免疫沉淀反应1
免疫沉淀反应
免疫沉淀反应 (IP)是技术 沉淀 抗原 在解答外面使用 抗体 具体对那抗原。 这个过程可以用于丰富特定蛋白质到某一程度纯净或集中低丰盈蛋白质。 Co免疫沉淀反应 能辨认 互动的蛋白质 或蛋白质复合体当前在细胞萃取物。 通过有选择性瞄准认为是蛋白质更大的复合体的成员的知道的蛋白质，一罐头(原则上)拉扯整个蛋白质复合体在解答外面。 拉扯多互动的蛋白质复合体的这个概念在解答外面通过immunoprecipitating蛋白质复合体的一名唯一成员通常简单地指“拉下来”。 在实际实践，你在一唯一pulldown不准备实际上能对拉下来和辨认复合体的所有成员。 一个典型的战略是执行拉下来，辨认复合体的新的成员然后执行免疫沉淀反应一个新系列，最近辨认的成员为免疫沉淀反应被瞄准。 这个战略在最初被瞄准的蛋白质，您与正确复合体一起使用的一重要vaildation再发现经常导致在复合体的更加成员的发现上以及结果。 蛋白质复合体，一次一定对具体抗体，从大块解答被去除被捕获与抗体束缚的蛋白质附有一个载体。 历史上载体是微观高多孔的 琼脂糖 小珠(泥浆)。 最近， monosized superparamagnetic小珠是可利用的作为提供某些独特的好处胜过多孔琼脂糖小珠例如能力束缚更大的复合体的支撑材料(所有捆绑在小珠表面发生)，更加快速的约束动能学(蛋白质复合体不必须击穿入多孔表面)并且减少的背景(少量假阳性)。
有二个一般战略可利用对实际免疫沉淀反应。 束缚对“被沉淀的”蛋白质的抗体可能二者之一是i)增加直接地到包含蛋白质混合物或ii)的解答孵化与小珠和允许束缚对小珠被孵出跟随了与抗体一定的小珠与蛋白质的解答。 在第一个情景，一旦给了抗体充足的时刻束缚对他们的目标蛋白质，小珠增加到解答，并且抗体然后将遵守小珠。 在第二个情景，小珠与一定的抗体增加到样品并且被孵化允许束缚蛋白质蛋白质或复合体对被固定的抗体。 情景给同一个最终结果与一定的蛋白质或蛋白质复合体他们自己在选择小珠被固定的抗体(是他们琼脂糖琼脂糖或monodisperse superparamagnetic)。 抗体束缚的蛋白质(蛋白质A, 蛋白质G, 蛋白质L)与细菌最初被隔绝了并且认可各种各样的抗体，虽然其中每一有它自己的特异性。
在蛋白质或蛋白质复合体的最初的捕获以后，载体被洗涤多次为不具体地取消所有蛋白质和紧紧跳起对支持通过抗体。 在洗涤以后，被沉淀的蛋白质被洗脱并且被分析使用 胶凝体电泳法, 质谱分析, 西部弄脏或者其他方法的任何数字为在复合体辨认组成部分。 因此， co免疫沉淀反应是估计蛋白质蛋白质互作用的一个
标准
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方法。
免疫沉淀反应是非常有用的 染色质免疫沉淀反应允许分析对 脱氧核糖核酸 序列一定 组蛋白 或其他 染色质 组分。
步
1. 溶解细胞并且样品为免疫沉淀反应做准备。
2. 前清洁样品使用清液从主要抗体被上升的动物种类(这减少背景和未指明
的蛋白质)。
3. 孵化解答与抗体反对蛋白质利益(抗体可以附有载体在这步前后)并且允许
抗体抗原复合体形成。
4. 沉淀复合体利益，去除它从大块解答。
5. 洗涤被沉淀的复合体多次。 每次转动在洗涤之间并且去除上层清液。 在
最后之后洗涤，去除同样多上层清液尽可能(这步是最高效率的，当使用
旋转专栏时执行，因此缓冲的整个容量可以被取消在每洗涤步)。 6. 洗脱蛋白质从载体(通常与低酸度值或SDS样品装货缓冲)。 7. 分析复合体或抗原利益。 这可以做用各种各样的方式:
1. SDS-PAGE (钠dodecyl硫酸盐聚丙烯酰胺胶凝体电泳法); 如果
您使用了放射线，暴露影片。
2. 调动和西部污点使用另一抗体为与抗原互动的蛋白质。
3. 其他分子方法。
外部链接
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