直杆蓝桉叶的生药学研究

直杆蓝桉叶的生药学研究 云南中医学院学位 论文 政研论文下载论文大学下载论文大学下载关于长拳的论文浙大论文封面下载 独创性声明 本人郑重声明:所呈交的学位论文,是个人在导师的指导下,独立进行研 究工作所取得的成果,无抄袭及编造行为。除文中已经特别加以注明引用的内 容外,本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文 做出重要贡献的个人和集体,均已在文中以明确方式标注并致谢。本人完全意 识到本声明的法律结果并由本人所承担的法律责任。 学位论文作者签名:奎主生鱼 日期:至竺三年? 月二日 云南中医学院学位论文使用授权的声明 云南中医学院有权保留使用本人学位论文,同意学院按规定向国家有关部 门机构送交论文的复印件和电子版,允许被查阅和借阅。本人授权云南中医学 院可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影 印、缩印或其他复印手段保存或汇编本学位论文。可以公布包括刊登论文 的全部或部分内容。 保密论文在解密后应遵守此规定 学位论文作者签名::耋至丝 日期:乏圣 年上月且日 日期:丝年上月?卫日 学位论文导师签名:卤巫 目录 工贸企业有限空间作业目录特种设备作业人员作业种类与目录特种设备作业人员目录1类医疗器械目录高值医用耗材参考目录 摘要? ................................................................. .......................................... 引言?.一 ‘;舌?.. 第一章 直杆蓝桉叶和蓝桉叶的鉴别研究.直杆蓝桉和蓝桉的植物形态鉴定 .直杆蓝桉和蓝桉的药材性状鉴别??. .直杆蓝桉和蓝桉显微鉴别?一 .薄层鉴别小结和讨论第二章直杆蓝桉叶的浸出物、水分、灰分、重金属的 测定? .浸出物的测定?.. .水分的测定..总灰分及酸不溶性灰分的测定.重金属检查??.. 第三章直杆蓝桉叶急性毒性试验及药效学初步研究? 第一节直杆蓝桉叶提取物的急性毒性试验??.. 实验材料? 实验方法及结果? .小结与讨论??.. 第二节直杆蓝桉叶水提煎液的抗炎镇痛实验初步研究? .镇痛实验. .抗炎实验? 第四章直杆蓝桉叶和蓝桉叶挥发油的化学成分分析? .仪器与试药??...方法与结果??.. .讨仑?. 直杆蓝桉叶质量 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 草案直杆蓝桉叶药材标准草案起草说明?.. 结论?. 综盎?. 参考文献??. 致谢?中文摘要 直杆蓝桉叶的生药学研究 研究生:李文艳中药资源开发与利用 指导教师:高丽 摘要 直杆蓝桉 ...和蓝桉 .为桃金娘科桉属植物。直杆蓝桉叶疏风解表;清热止痒。蓝桉疏风解 热,抑菌消炎,防腐止痒。目前,云南省大量栽种的桉树包括蓝桉和直杆蓝桉, 国内外对蓝桉叶的应用和研究比较多,而国内外对直杆蓝桉叶的研究非常少, 在实际应用中都将二者混用。为了保证药材和提取物的质量和药用安全,更好 的开发利用直杆蓝桉叶的资源,本论文主要从以下几个方面进行实验研究,这 些研究为直杆蓝桉的进一步开发和利用、制定直杆蓝桉叶的质量标准提供了理 论依据。 . .直杆蓝桉叶的鉴别研究 用原植物来源鉴别、药材性状鉴别、显微鉴别和理化鉴别这四大鉴别方法, 对直杆蓝桉叶作了细致全面的研究,得到直杆蓝桉叶的鉴定结果。 .直杆蓝桉叶的浸出物、水分、灰分、重金属的测定 对直杆蓝桉叶进行了浸出物、水分、总灰分和酸不溶性灰分、重金属等指 标的测定,并规定了限度:直杆蓝桉叶药材浸出物不得少于.%、水分不得 过%、总灰分不得过.%、酸不溶性灰分不得过.%,重金属的含量小于百 万分之二十。 .直杆蓝桉叶煎液的急性毒性试验及药效学初步研究 经急性毒性试验,小鼠对直杆桉叶煎液的最大耐受量为生药量计为 ./合./,按成人的用量为、.按中值.来算, 小鼠对直杆桉叶的最大耐受量为成人用量的倍。试验结果表明,直杆蓝桉直 杆蓝桉叶的生药学研究英文摘要 ... ... . , . ,,, . . ,? .. . ,,,, ,? , .: .%, %, .%, .%,. 直杆蓝桉叶的生药学研究 . .. /,../ . ~, ., . ? .. .?, .,, .: ;;; 引言 引言 ...,为桃金娘科桉属植物,原产于 直杆蓝桉 澳大利亚,引种到云南、四川,在海拔高达两千米的地方,深厚的土壤及潮湿 的地方,生长很好。直杆蓝桉树干挺直,常作为速生丰产林和行道树,资源很 丰 富。据《中华本草》载:“直杆蓝桉叶,味苦、辛,性?。疏风解表;清热止 痒。主治感冒;流感;咽喉炎;烫伤;乳痈;风疹;湿疹【”。” .,与直杆蓝桉同为桉属植物,是中国和各国药 蓝桉 典收载的桉油的植物来源,原产澳大利亚,常和直杆蓝桉一起栽种。在我国云南、 广西和四川等地都有大量种植,在东南部的沿海地区还没有成功种植的 经验 班主任工作经验交流宣传工作经验交流材料优秀班主任经验交流小学课改经验典型材料房地产总经理管理经验 。蓝 桉不适应低海拔和较高气温,但是能耐零度以下的低温。国内外对蓝桉的应用和 研究较多】。蓝桉叶主治感冒、消化系统炎症、泌尿系统炎症、皮炎及痈疮肿 毒等。蓝桉的木材用途广泛,木材不直呈扭曲状,不宣用来做家具,但能抗腐蚀, 可以用来建造码头和船;蓝桉花蜜质量也很高;蓝桉叶含油量高,可制作各种 药油,有益脾胃、止神经痛、消毒杀菌作用,治风湿扭伤,也可作杀虫剂。国外 有研究在蓝桉的叶子和花萼中分得的化合物有一定的抗炎、抗爱滋病和抗肿瘤活 性。蓝桉的果实“一口钟”,可用作感冒药,抗菌消炎药,跌打损伤药,用于抗 癌、治疗皮肤病,是民间常用药【?。 蓝桉的叶和幼枝含挥发油,水蒸气蒸馏即可得桉油。蓝桉挥发油成分复杂, 易挥发的成分比较多,含量最大的是桉油精,一桉叶素.。。。,桉油精也是 桉油最主要的有效成分。药理研究表明,蓝桉油能抗很多种细菌,尤其是对上 呼吸道感染、慢性支气管炎,祛痰效果良好。蓝桉油也可用于治疗某些皮肤病, 可用来作为创面、溃疡、瘘管的冲洗、除臭,并有很好的镇痛效果。直杆蓝桉 油和蓝桉油成分相似,具有很大的应用前景。 桉叶油是世界十大精油品种之一,用途广泛,最主要的是桉叶油在医药方面 的应用。桉油精是桉叶油中主要成分,直杆蓝桉叶和蓝桉叶的挥发油中桉油精 ,一桉叶素。。。。含量很高,接近%。风靡东南亚的风湿药油,和受女 性欢迎的名牌化妆品都常含有桉油精。我国桉叶油资源丰富,产量不断增大。 但是,我国大面积种植桉树人工林主要是利用其木材作为建筑、造纸等方面的 直杆蓝桉叶的生药学研究 原材料,而在桉树主产区,每年砍伐木材,大量的树叶枝条完全没有利用就被 丢弃,造成了很大的浪费。蓝桉叶和直杆蓝桉叶作为提炼桉油资源和药用资源, 具有很高的经济价值,应该充分利用【】。 而国内外对直杆蓝桉的研究非常少,没有系统的研究,但在实际应用中都 将二者混用。为了保证药材和提取物的质量和药用安全,更好的开发利用直杆 蓝桉的资源,所以需要对其进行系统研究。 第一章直杆蓝桉和蓝桉的鉴别研究 第一章直杆蓝枝叶和蓝桉叶的鉴别研究 ...,为桃金娘科桉属植物。原产澳大利 直杆蓝桉 亚,引种到云南、四川、广西,常作为速生丰产林和行道树,资源极为丰富。 .,与直杆蓝桉同为桉属植物,是中国和各国药 蓝桉 典收载的桉油来源,常和直杆蓝桉一起作为行道树。 扎根昆明海埂的蓝桉虽然历经世纪沧桑,但是仍傲然挺立,冠盖如云,连绵 数里。被确认为中国最粗大的桉树,誉为“中国第一桉的桉树就屹立在这里。 见图。 图 .植物图中国第一桉 蓝桉 目前,国内外对蓝桉叶的应用和研究比较多,而国内外对直杆蓝桉叶的研 究非常少,在实际应用中都将二者混用。为了保证药材和提取物的质量和药 用 安全,更好的开发利用直杆蓝桉的资源,本论文对直杆蓝桉和蓝桉进行了鉴 别 研究。 直杆蓝桉的鉴别研究对制定其质量标准具有重要的参考价值,本论文对直 杆蓝桉和蓝桉作了详细的鉴别研究,分别从来源鉴别、性状鉴别、显微鉴别、 直杆蓝桉叶的生药学研究 理化鉴别等四大鉴别方法对其作了阐述。该部分的研究为今后的开发研究提 供 一定的实验依据。 .直杆蓝桉和蓝桉的植物形态鉴定 直杆蓝桉和蓝桉均采自云南昆明,经中国科学院陶德定副研究员鉴定。 .直杆蓝桉,大乔木。树皮灰蓝色,逐年脱落,基部有宿存树皮;嫩枝圆形 有棱。幼嫩叶多对生;叶片卵形至圆形,长~,基部心形,无柄或抱茎, 灰色;成熟叶片披针形,长,宽.,革质,两面多黑腺点;叶柄长~ ..伞形花序有花朵,总梗压扁或有棱;花梗长约;花蕾椭圆形, 长.,宽,两端尖;萼管倒圆锥形,有棱;帽状体三角锥状,与萼冠等 长;雄蕊多数,花药倒卵形,纵裂。蒴果钟形或倒圆锥形,长~,宽 ,果缘较宽,果瓣~,先端突出萼管外。直杆蓝按 ...植物图见图。 ...植物图 图直杆蓝桉 第一章直杆蓝桉和蓝桉的鉴别研究 .蓝桉,大乔木;树皮成片状剥落。叶蓝绿色,常被白粉;异常叶对生,矩 圆状卵形,宽,无柄或有短柄;正常叶厚,披针形,状,长, ,有 宽,有明显腺点。花通常单朵腋生,直径达;萼筒长约. 棱及小瘤体,有蓝白色腊被;萼帽状体较萼筒短,二层,外层平滑,早落,内 层粗厚,有小瘤体,中央呈圆锥状突起蒴。朔果杯状,直径...,棱有 棱及不明显瘤体或沟纹,果缘厚,果爿,和果缘等高。蓝桉 .植物图见图。 .植物图 图蓝桉 蓝桉和直杆蓝桉植物形态相似,主要通过花和果实的形态鉴别:蓝桉花通 常为单朵腋生,直径达,杯状朔果,直径,棱有棱及瘤体或沟纹;而 直杆蓝桉花伞形花序,有花~朵,钟形或倒圆锥形蒴果,长~宽 ,有较宽果缘。 .直杆蓝桉和蓝桉的药材性状鉴别 ,基部为心形;成熟叶片披针形, .直杆蓝桉叶,幼叶卵形或圆形, 长,宽.,革质,两面有很多黑色腺点;叶柄长。香味特异,味有 辛?感、苦、涩。以叶大、完整、梗少、无杂质者为佳。见图。第一章直杆 蓝桉和蓝桉的鉴别研究 .蓝桉叶,干燥叶呈镰刀状批针形,长厘米,宽.厘米,革质而 厚,先端尖,基部不对称,全缘,上面黄绿色,光滑无毛。对同光透视,见有 无数透明小腺点、并多数红棕色木栓斑点。羽状网脉;叶柄长~厘米,扁平 而扭转。微有香气,昧有清?感而稍苦。见图。 萨??~ 图蓝桉叶药材图 .直杆蓝桉和蓝桉显微鉴别 .仪器、试剂及材料 ..仪器一生物组织脱水机孝感市宏业医用仪器有限公司、 ?型生物组织冷冻包埋机孝感市宏业医用仪器有限公司,?型生物 组织切片机孝感市宏业医用仪器有限公司,一?型摊片烤片机孝感市宏 业医用仪器有限公司,型显微镜同本尼康公司,一型电 热鼓风干燥箱上海安亭电子仪器厂。 ..试剂及试液无水乙醇、%乙醇为分析纯安徽安特生化有限公司, 番红、固绿中国医药集团化学试剂公司,石蜡熔点、,中性树胶直杆蓝桉叶的 生药学研究 国药集团上海化学试剂有限公司,水合氯醛上海善普化工科技有限公司, 生物制片透明剂广西岑溪市松香厂研制,稀甘油,醋酸甘油。 试液的配制方法如下: 稀甘油 取甘油,加蒸馏水,再加樟脑少许或液化苯酚滴。 水合氯醛试液 取水合氯醛,加蒸馏水与甘油使溶解。水合氯醛是良好的 透化剂,能迅速渗入粉木组织细胞,增强透光度,能使细胞组织清晰可见,能 溶解蛋白质、淀粉粒、树脂、叶绿素、挥发油等,不溶解草酸钙和碳酸钙晶 体。 能使细胞膨胀,适于观察组织细胞形态。 番红染色液 取番红,溶于%乙醇溶液中。番红是细胞学和动植物组织学常 用的染料,能染细胞核、染色体和植物蛋白质,维管束植物木质化、木栓化和 角质化的组织。 固绿染色液 取固绿.,溶于%乙醇溶液中。固绿是一种染含有浆质的纤 维素细胞组织的染色剂,在染细胞和植物组织上应用极广。固绿与番红染色 液 配合使用,用于药材组织切片的二重染色。 ..材料 直杆蓝桉和蓝桉为昆明产地。选用结构完整,具有代表性的直杆蓝桉叶和 蓝桉叶作为组织横切用材料。粉末制片用药材粉碎之后,过目筛。 .实验方法 ..组织横切面采用石蜡制片法,制成永久封片,具体方法及步骤如下: 取材、固定 选取新鲜的直杆蓝桉叶和蓝桉叶片,将其切成.的小段,然后放 入液中固定小时以上。 脱水一透明一浸腊 这个过程在生物组织自动脱水机中完成,常用的脱水剂和透明剂,分别是 乙醇和生物透明剂。 第一章直杆蓝桉和蓝桉的鉴别研究 取固定好的两种叶片各份,用%的乙醇冲洗次后,置脱水篮 中放入自动脱水机中自动脱水、透明、浸蜡。其过程如下:%乙醇.小时一 %乙醇小时一%乙醇小时一%乙醇小时一%乙醇分钟一无水乙 醇::小时一无水乙醇::.小时一纯 分钟一纯 分钟一纯石蜡 .小时一纯石蜡小时,浸蜡温度为?。 包埋 用石蜡包埋浸过蜡的药材,整个过程在生物组织冷冻包埋机上完成。石蜡 完全冷却凝固后,就可以进行进行切片工作。 切片一摊片 将蜡块放在切片机上,调节厚度及角度进行切片,厚度为。将切 好的片在摊片机中水温?展开,转移到载玻片上,放入烤片机中?左 右烤片,待水分干后放入干燥箱中烘烤?~小时。 脱蜡一染色一透明一封固 将烘干的片子放在染色架上,然后按步骤逐一进行脱蜡一染色一透明:纯 分钟一纯 分钟%乙醇秒一%番红分钟%乙醇秒 一纯乙醇秒一纯乙醇秒一纯乙醇秒一.%固绿秒:乙醇: 秒一纯分钟一纯 分钟一封片一干燥小时。 在显微镜下拍照 完成以上步骤,制成永久的石蜡标本片,在显微镜下观察标本的内部构造 并对主要特征进行拍照。 ..粉末制成临时装片进行观察 水合氯醛装片 取药材粉末少许于载玻片上,加水合氯醛一滴,在酒精灯上加热片刻, 注意不能加热过久产生大量气泡,加稀甘油~滴,盖上盖玻片于显微镜下观 察并拍照。 .实验结果 ..直杆蓝桉叶横切面 叶上表皮细胞列,细胞类圆形,排列整齐;外有较厚角质层。叶肉组织 分化不明显,有类圆形及椭圆形油室散在,有的油室中可见油滴:叶肉薄壁细 胞中含有较多草酸钙方晶及簇晶。叶中脉宽扁,维管束,外韧型;周围的细 直杆蓝桉叶的生药学研究 胞中含草酸钙方晶或红棕色物质。叶下表皮细胞列,细胞类方形或类圆形, 排列整齐;外有角质层。见图。第一章直杆蓝桉和蓝桉的鉴别研究 ..蓝桉叶横切面 叶上表皮细胞列,细胞类圆形,排列整齐;外有较厚角质层。栅栏组 织细胞~列,海绵组织细胞较疏松,有较大的类圆形及椭圆形油室散在,有 的油室中可见油滴;叶肉薄壁细胞中含有较多草酸钙方晶及簇晶。叶中脉向 上、 下两面稍突出,形成圆弧形,维管束,外韧型;周围的细胞中含草酸钙方晶 或少量红棕色物质。叶下表皮细胞列,细胞类圆形,排列整齐;外有角质层。 见图。 图蓝桉叶横切 .上表皮.栅栏组织.油室 .海绵组织.维管束.下表皮 ..直杆蓝桉叶表面观 叶上、下表皮细胞表面观类多角形,垂周壁平直;气孔类圆形或长圆形, 环式,有的气孔稍下陷。叶肉细胞中可见草酸钙方晶、簇晶及油室。见图。 图直杆蓝桉叶表面观特征图 .上表皮.下表皮 』』』第一章直杆蓝桉和蓝桉的鉴别研究 ..蓝桉叶表面观 叶上、下表皮细胞表面观类多角形,垂周壁平直;气孔类圆形或长圆形, 环式,上表皮气孔较下表皮稍大。叶肉细胞中可见草酸钙方晶、簇晶及油室。 见图。 .............一 图蓝桉叶表面观特征图 .上表皮.下表皮 直杆蓝桉叶的生药学研究 ..直杆蓝桉叶粉末特征 粉末绿色。草酸钙方晶较多,散在或存在于叶肉细胞中,类长方形、双锥 .,棱角锐 形或多面体形,直径 。草酸钙族晶多散在,直径 尖或稍钝。气孔长圆形,稍内陷。油室较大,完整者圆形或椭圆菜,有细小油 。纤维散在或成束,壁较厚,边 滴散在。导管主为螺纹导管,直径 缘有锯齿状突起。见图。 ?奄邻? 黪一? 挈。一 ’ 瓠一豫? 疆墨薯磁 嚣 零。蜡 要一 。缈。。擘弱 ?.一。鞠 一 图直杆蓝桉粉末图 .草酸钙方晶.草酸钙簇晶 .气孔.油室.导管.纤维 第一章直杆蓝桉和蓝桉的鉴别研究 ..蓝桉叶粉末特征 粉末绿色。草酸钙方晶较多,散在或存在于叶肉细胞中,类长方形或多面体形, 直径 。草酸钙族晶多散在,直径一 ,棱角锐尖或稍钝。 气孔长圆形或类圆形。油室较大,多破损,有油滴散在。导管主为螺纹导管, 直径 。纤维散在或成束,壁较厚,边缘有锯齿状突起。见图。 :弓。~?””‘””“强 ., 誊、貔、享 ??。?, ?? 黛曼差 争警。\鬻 书 器 。。一,琴一,一一蔫霉弋:鼍一一厶 ???曩 ?‘适箨.,.,王置.,置嚣?蠹量譬 ......一 乩 图蓝桉粉木图 .草酸钙方晶.草酸钙簇晶 .气孔.油室.导管.纤维 直杆蓝桉叶的生药学研究 .讨论与小结 两种桉叶横切和粉末主要区别如下表 .薄层鉴别 根据文献记载直杆蓝桉叶和蓝桉叶中很重要的成分是桉油精。。.。,按直 杆蓝桉和蓝桉叶所含有桉油精。。。。研究制定薄层色谱鉴别方法。 .仪器、试剂及材料 电子天平上海精密科学仪器有限公司,超声波清洗器上海科 导超声仪器有限公司,硅胶板默克化工技术有限公司、自制硅胶板。 桉油精。。。。对照品中国药品生物制品检定所,批号为?。环 己烷,乙酸乙酯分析纯天津化学试剂二厂,硫酸,香草醛,乙醇安徽安 特生物化学有限公司,水为蒸馏水。 直杆蓝桉叶药材采自昆明、丽江、大理,蓝桉采自昆明,经中国科学院昆 明植物研究所分类鉴定室陶德定副研究员鉴定为直杆蓝桉 .。 ...和蓝桉 .实验方法 ..供试品溶液制备 直杆蓝桉叶经水蒸气蒸馏提取挥发油,取挥发油.,加无水乙醇使成 ,作为供试品溶液。 ..对照药材溶液的制备 蓝桉叶经水蒸气蒸馏提取挥发油,取本品.,加无水乙醇使成,作 为对照药材溶液。 ..对照品溶液制备第一章直杆蓝桉和蓝桉的鉴别研究 取桉油精。。。。适量加适量无水乙醇,作为对照品溶液。 ..药材中桉油精。。。。考察 吸取供试品溶液、对照药材溶液、对照品溶液各虬, 分别点于同一硅胶 薄层板上,以环乙烷一乙酸乙酯.:.为展开剂,展开,取出,晾干, 喷以%香草醛硫酸溶液。供试品色谱中,与对照品色谱相应的位置上,显相同 颜色的斑点。 结果,见图,在与桉油精,。。。对照品相应的位置上,直杆蓝桉和蓝桉 都有斑点,说明它们都含有桉油精。。。。,从薄层板上还可以看出直杆蓝桉与 蓝桉有着几个相同的斑点,它们有部分相同或者相似的化学成分。也有几个 斑 点蓝桉有而直杆蓝桉对应的位置没有,说明有些成分蓝桉含有但是直杆蓝桉没 有。 图 .桉油精.直杆蓝桉昆明 .直杆蓝桉丽江.直杆蓝桉大理.蓝桉 直杆蓝桉叶的生药学研究 .小结与讨论 薄层色谱结果显示,直杆蓝桉叶和蓝桉叶都含有桉油精这种有效 化学成分。此结果有较好的重现性,操作简单,结果明显,可作为直杆蓝桉叶 和蓝桉叶的薄层鉴别特征。 小结和讨论 直杆蓝桉和蓝桉的植物形态比较相似,二者鉴别的重点在花、果实的区别上。 但作为主要的药用部位叶较相似并且不同的生长时期变化较大,鉴定困难。本 研究的四项鉴别结果,可作为二者鉴别的依据,对于桉属其他难以区分的近缘 种的鉴别亦有借鉴意义。蓝桉和直杆蓝桉的鉴别的主要生药鉴别特征见下表。 蓝桉和直杆蓝桉的鉴别第一章直杆蓝桉和蓝桉的鉴别研究 生药学研究对制定直杆蓝桉叶药材的质量标准具有重要的意义。目前,关 于直杆蓝桉的鉴别还没有系统的相关研究。本论文对其作了详细的鉴定研 究, 分别从来源鉴别、性状鉴别、显微鉴别、理化鉴别等四大鉴别方法对它做了 研 究,研究结果为直杆蓝桉的进一步开发研究提供了一定的实验依据。直杆蓝 桉叶的生药学研究 第二章直杆蓝桉叶的浸出物、水分、灰分、重金属的测定 .浸出物的测定 浸出物测定系指用水、乙醇或其他适宜溶剂,有针对性地对药材及制剂中 可溶性物质进行测定的方法,是控制药品质量的指标之一。 .试剂及材料 %醇分析纯,水浴锅,蒸馏水,镊子,蒸发皿,干燥器,三个产地 直杆蓝桉叶。 .实验方法 ..水溶性浸出物的测定 按照《中华人民共和国药典》版附录中浸出物测定法中的水浸 法。 ..醇溶性浸出物的测定 照水溶性浸出物测定法测定,以%乙醇,%乙醇代替水为溶剂。 .实验结果 以昆明产地为预试验,分别以水、%醇、%乙醇为溶剂,采用冷浸法 和热浸法测定本品浸出物,结果见下表。 浸出物的测定结果比较 结果显示:根据昆明产地试验结果,选用热浸法,以稀乙醇作溶剂测定来 测定三个产地批样品的浸出物含量,结果见下表。 第二章直杆蓝桉叶的浸出物、水分、灰分、重金属的测定 三个产地浸出物的测定结果%平均 谦 . . . . . .% 昆明 . . . . . . . .% 大理 . . . . . . .% 丽江 根据三个产地的测定结果,将本品浸出物限度定为不得少于.%,纳入 标准。 .水分的测定 .药材的水分含量过高,可能会影响用药剂量的准确性,容易使药材变质, 影响治疗效果,而且有可能产生有害物质。因此,控制药材水分含量对于原药 材的贮藏、加工和保证质量有十分重要的意义。因为直杆蓝桉叶挥发油含量 高, 所以采取药典中水分测定法中第二法甲苯法测定水分。 .仪器及材料 电子分析天平上海精密科学仪器有限公司。如图,为 的短颈圆底烧瓶:为水分测定管;为直形冷凝管,外管长。使用前, 全部仪器应清洁,并置烘箱中烘干。甲苯;直杆蓝桉叶打成粉末,过目筛。 .方法 照《中华人民共和国药典》版一部附录?水分测定法第二法甲 苯法进行测定。 取供试品适量,精密称定,置瓶中,加甲苯约,必要时加入玻璃珠 数粒,将仪器各部分连接,自冷凝管顶端加入甲苯,至充满管的狭细部分。 将瓶置电热套中或用其他适宜方法缓缓加热,待甲苯开始沸腾时,调节温度, 使每秒钟馏出滴。待水分完全馏出,即测定管刻度部分的水量不再增加时, 将冷凝管内部先用甲苯冲洗,再用饱蘸甲苯的长刷或其他适宜的方法,将管 壁 上附着的甲苯推下,继续蒸馏分钟,放冷至室温,拆卸装置,如有水粘附在 管的管壁上,可用蘸甲苯的铜丝推下,放置,使水分与甲苯完全分离可加 亚甲蓝粉末少量,使水染成蓝色,以便分离观察。检读水量,并计算成供试 品中含有水分的百分数。 直杆蓝桉叶的生药学研究 .结果第二章直杆蓝桉叶的浸出物、水分、灰分、重金属的测定 总灰分及酸不溶性灰分的测定 生药中灰分来源包括生药本身经过加热炙灼灰化后遗留的不挥发性无机盐 以及附着的不挥发性无机盐类,即总灰分。同一种生药,在无外来掺杂物时, 一般总有一定的总灰分含量范围。规定总灰分的限量对于保证生药的品质和 纯 净度有一定的意义。 有些生药本身含有的无机物差异较大,测定总灰分时不足以说明外来无机 盐的存在,故需测定酸不溶性灰分。因为生药所含无机盐类大多可以溶于稀 盐 酸中除去,而来自泥沙的硅酸盐则不溶解而残留。但是直杆蓝桉是叶子入药, 酸不溶性灰分比较少。 .仪器与试剂 ..仪器及材料 型 电子分析天平上海精密科学仪器有限公司,?.. 箱式电阻炉上海一恒科技有限公司,电子万用炉北京市永光明医疗仪器 厂,坩埚,干燥器。 ..试剂 稀盐酸.%一.%。 .方法 照《中华人民共和国药典》版一部附录?灰分测定法进行测 . 定。 .结果 各产地总灰分及酸不溶性成分测定结果见下表。 总灰分测定结果直杆蓝桉叶的生药学研究 根据实验结果将药材的总灰分控制为不超过.%,酸不溶灰分为.%。 .重金属检查 中药材大多是来自大自然,可分为植物、动物、矿物药,植物占最多。土 壤中矿物原本就含有各种的重金属,动物在食物链中累积到重金属,植物从泥 土吸收到重金属。天然药材可能会遭受各种各样的污染,使其重金属的含量增 高。 年版《中国药典》增加了中药材中铅、镉、砷、汞、铜等种元 素的标准和测定方法。年新版《中国药典》继续加强安全性检查要求。在 控制重金属和各种有害元素方面,用电感耦合等离子体质谱测定中药中种的 重金属含量:在中药的注射剂及用药时间长和儿童用药的品种,增加了重金属 和有害元素限量标准。现在中国对食品和药品中重金属含量有明确的规定。中 药注射剂中重金属含量不得超过.,其它药品重金属含量不超过 。要求达到《药典》标准的中药,才能在国内市场销售。【】如何防止重 金属超标及中药必须由各方面保证。如提高土地、水及空气质量。控制生长 环境、农药及肥料的使用,解决重金属污染。 重金属的常规检测方法有比色法、紫外分光光度法、原子吸收分光光度法、 原子荧光分光光度法,此外还发展了电感耦合等离子体质谱法、电感耦合等离第二章直杆蓝桉叶的浸出物、水分、灰分、重金属的测定 子体发射光谱法及高效液相色谱法等等。其中,原子吸收分光光度法和原子荧 光分光光度法具有检出限低,准确度高,选择性高,谱线较简单,干扰少,分 析速度快等优点,是目前最适用于中药重金属的检测方法。 本实验采用原子吸收分光光度法和原子荧光分光光度法测定直杆蓝桉叶中 种重金属元素,参照《中华人民共和国药典》版一部附录?铅、 镉、砷、汞、铜测定法进行测定。 .仪器与试剂 ..仪器 型无接触红外微波压力消解系统,一消解罐,原子吸收光 谱仪,热解涂层石墨管和、、空心阴极灯赛默飞世尔有限公司;、 空心阴极灯北京科创海光仪器有限公司,一双道原子荧光光度计, 自动进样器,电子分析天平上海精密科学仪器有限公司。 ..试剂 硝酸川东化工有限公司化学试剂厂,优级纯,盐酸西陇化工有限公 司,优级纯,去离子水,.%氢氧化钠,%硼氢化钠,铅、砷、汞、镉、铜 标准溶液购买于国家标准物质中心。 用体积分数为%的。溶液浸泡玻璃器皿小时以上,用去离子水冲 洗干净,实验所用试剂为分析纯。 .测定条件 空气一乙炔火焰原子吸收光谱法测定,实验最佳的仪器工作条件:测定 波长.,狭缝.,灯电流%,燃气流量./,燃烧头高度.。 、采用石墨炉原子吸收光谱法,仪器测定条件见下表,石墨炉参数 见下表。 、的仪器测定条件 、的石墨炉参数 直杆蓝桉叶的生药学研究 。 、采用原子荧光光谱分析法,检测波长分别为.、. 仪器测定条件见下表。 、的仪器测定条件 .溶液的制备 ..供试品溶液的制备 分别取三个产地的直杆蓝桉叶,将各药材粉碎过目筛,精密称取三个产 地的药材粉末各.,把粉末放入四氟乙烯罐,加入硝酸混合均匀,盖好 内盖,浸泡过夜,旋紧外套,放入密闭式微波消解仪中,按照下表消解程序进 行消解。消解完毕后取出,冷却分钟,打开罐盖,将罐内的消解液转移至蒸 发皿中,用超纯水冲洗罐盖及罐壁,蒸发皿在水浴上缓缓加热至红棕色蒸气 挥 尽,并继续缓缓浓缩至溶液.一.,冷却,将溶液转入容量瓶中,用去离 子水定容至.,即得供试品溶液。按以上步骤随同做试样空白试验。 微波消解程序第二章直杆蓝桉叶的浸出物、水分、灰分、重金属的测定 ..对照品储备液的制备 取各元素的单元素标准溶液,分别用%硝酸溶液制成浓度均为/的 溶液,作为对照品储备液。 .。贮存 .线性关系考察 精密量取、、、、的对照品储备液,将对照品储备液逐级 稀释至?/,腿/,/,几,?/;对照品储备液逐级 稀释至?/,/,斗/,/,上/;对照品储备液逐级稀释至 /,./, /,./,/;对照品储备液逐级稀释至肛/, 肛/,弘/,?/,上/;对照品储备液逐级稀释至?几,.悒 几,?几,.?/,?/;以上稀释液均为%的。。。制备空白对照溶 液。 以各元素所稀释成的系列浓度标准溶液测得的吸收值为纵坐标,对应浓度 为横坐标,绘制标准曲线并计算回归方程,在所配置浓度范围内呈良好的线 性 关系,结果见下表。 各元素回归方程 回归方程 线性范围/ .样品测定 直杆蓝桉叶的生药学研究 分别取批样品,按“..”项下制备,测定上述种重金属及有害元素, 样品中所含、、、和残留量结果见下表。 样品中砷、镉、铜、铅、汞的残留量 .小结与讨论 根据/?《药用植物及制剂进出口绿色行业标准》对重金属的限量 指标/:重金属总量应小于等于.,?.,弋.,?., .,?.,重金属检测结果表明:直杆蓝桉叶中的重金属都没有超标。 第三章直杆蓝桉叶的急性毒性和药效学初步研究 第三章直杆蓝桉叶急性毒性试验及药效学初步研究 第一节直杆蓝桉叶提取物的急性毒性试验 实验材料 .药物 选用昆明产直杆蓝桉叶,直杆蓝桉叶以倍量水煎煮次,合并滤 液浓缩至干膏,干膏为,于干燥器中备用,提取率为%。 .动物 级小鼠,雌雄各半,体重左右,合格证号一军一?。 .主要器材 锥形瓶、量筒、注射器及针头,.%苦味酸溶液。 实验方法及结果 .预实验 级体重一,小鼠只,雌雄各半,按体重和性别随机分为两组, 每组只。实验前禁食不禁水。最大的给药浓度以生药量计./,给 药体积为./。给药后即刻观察,持续,主要观察动物外观、行为、 饮食、分泌物、排泄物、死亡情况及中毒反应症状及其起始时间、严重程度、 持续时间、是否可逆及恢复时间,体重变化等,以后每天观察两次,连续天, 记录各组小鼠的死亡情况。 .预实验结果 给药后,给药组所有小鼠均活动减少。小剂量组全部存活,在给药浓度以 浸膏量计./及以下,小鼠全部存活;大剂量组在给药、天后小部 分死亡,在给药浓度以浸膏量计./以上,有小鼠死亡,但死亡均未 超过半数。解剖有肠胀气,腹腔淤血。直杆蓝桉叶的生药学研究 根据预实验,在所能达到的最大给药浓度下,有动物死亡,但未达到半数 死亡,因此测定最大耐受量。最大耐受量与半数致死一样可以作为在大剂量 下 有动物死亡的急性毒性情况的 评价 LEC评价法下载LEC评价法下载评价量规免费下载学院评价表文档下载学院评价表文档下载 和分析。 在预实验中观察到,大于./以浸膏量计,折合成生药量./ 的浓度均有动物死亡,而等于或小于./以浸膏量计无动物死亡。通过 预实验初步确定为./以浸膏量计,给药量为./。 . .最大耐受量的测定方法 取体重一小鼠只,根据雌雄、体重随机分成组,每组只, 雌雄各半,为试验组和空白对照组,分笼饲养。试验组给药剂量以生药量计为 . /,给药体积为./,空白对照组给予等体积的生理盐水,给药 当天持续观察,之后每天观察两次,主要观察行为活动、肌肉运动、植物神 经系统反应、呼吸等;并详细记录动物反应情况及称量动物体重,连续观察 天。第天处死、解剖小鼠,肉眼观察其主要脏器的外观。 .实验结果 见下表。第三章直杆蓝桉叶的急性毒性和药效学初步研究 .小结与讨论 药物急性毒性实验的最大耐受量与最大给药量是不同的两个概念。最大耐 受量是指动物能耐受而不引起动物死亡的最高剂量。直杆桉叶水液的最 大耐受量为生药量计为./合./,按成人的用量为 ,取中间值.计算,直杆桉叶的最大耐受量为成人用量的倍。试验 结果表明,该药材的临床用药安全范围大。通过对直杆蓝桉叶水提物小鼠灌胃 给药的急性毒性试验,为临床用药的安全性提供实验依据。