真藓科植物ISSR_PCR反应体系的优化及ISSR指纹图谱的初步构建

真藓科植物ISSR_PCR反应体系的优化及ISSR指纹图谱的初步构建 SSR-PCR SSR II真 藓 科 植 物 反应体系的优化及 指纹图谱的初步构建 1 2,汪琛颖赵建成 ( 1, ,450044; 2, ,050016)郑州师范学院生命科学系河南郑州 河北师范大学生命科学学院河北石家庄 ISSR ,( Bryacae) 。,,,,,摘要 目的试图通过 指纹图谱的构建为真藓科植物的种类鉴定提供分子分析数据 方法 快递客服问题件处理详细方法山木方法pdf计算方法pdf华与华方法下载八字理论方法下载 为获得 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 试验程序 2 + ISSR-PCR 5 ( Mg、dNTPs、、DNA 、Taq DNA ) 4 首先利用正交试验设计的方法对真藓科植物的 反应的 因素引物模板聚合酶水平进行试 。,,: 20 l PCR ng A,0, 2 mol / L ,2, 25 mmol / L MgCl,0, 6 U Taq DNA ,5 DN验结果最适扩增条件是在 μ反应体系中模板 μ引物聚合2 ,酶 0, 4 mmol / L dNTPs; 48 : 50 ? 。6 ISSR 14 niaceae) ( M最适退火温度为 利用此结论使用 条 引物对 种真藓科及相关的提灯藓科植物分别 PCR 86 100% 。NJ 。,,,86 ,,,进行 扩增共扩增出 条带多态性带为 条多态率达 根据扩增结果进行 聚类分析得到的支序图呈星状结论 ISSR ,UBC808、811 826 ISSR ,指纹能够在种级分类水平提供适度的多态性利用引物 以及 构建的 指纹图谱能够区分所有供试植物为利 ISSR 。用 指纹技术解决真藓科植物种级水平分类关系问题时提供了分子辅助证据的可行性 Q 949A0517 ) 6611( 2011) 27 ) 16490) 04 中图分类号 ; ISSR; 文献 标识 采样口标识规范化 下载危险废物标识 下载医疗器械外包装标识图下载科目一标识图大全免费下载产品包装标识下载 码 ; 文章编号; 关键词 真藓科反应体系优化种级水平分类关系 Optimization of ISSR-PCR Reaction System and Preliminary Construction of ISSR Fingerprinting of Some Species in BryaceaeWANG Chen-ying et al ( Department Loiff e Science,Zhengzhou Teachers College,Zhengzhou,Henan 450044) Abstract ,Objective, The aim was top rovide molecular basis for thei dentification of species in the mosfsa mily Bryaceaeb y the construc- tion of inter simple sequence repea(t IsSS R) fingerprinting, ,Method, In order to seeks tandardizing PCR reaction set-up,orthogonal design 2 + was used toop timize ISSR-PCR amplification system of Bryaceaine f ive factors( Mg,dNTPs,primer,DNA template,Taq DNA polymer- ase) at four eves respectvey, ,Resut, A sutabe SSR reacton system waosb taned,namey: 20 l reacton system ocntanng 5 ng llillilIiiliiiμDNA template,0, 2 mol / L primer,2, 25 mmol / L MgCl,0, 6 U Taq DNA polymerase,0, 4 mmol / L dNTPs, Propera nnealing temperature w4a8s μ 2 )5 0 ? ,T he above system ansdix ISSR-PCR primers were used for the PCRam plification of 14 samples from Bryaceae and threel ated speciesin Mniaceae, A total of 86 bands werea mplified,of which 86 ( 100% ) was polymorphic, NJ cluster analysis showed ast ellate cladogram, ,Concuson, The resuts manfested that SSR fngerprntng coud provde the approprate degree opfo ymorphsm at ow taxonomc eve,so liliIiiiliililill it woud be au sefu too to provde addtona evdence for resovng taxonomc reatonshps at the speces eve of Bryaceae,llliiililiiliiill Key words Bryaceae; ISSR; Optimization of reaction system; Species-level; Taxonomic relationship 。,。真藓科是藓类植物中一个较大的科传统上它的分类 法还未应用于真藓科植物的分类问题 ( ) ISSR DNA 系统主要建立在由可比较的形态学如孢子体或配子体特 笔者使用 技术试图寻找 水平上的一些特征 。,征作为基础的假说或假设之上但因不同的学者在真藓科 能直接区分关系相近的种以便提供进一步解决真藓科植物 ( ) ,。种的分类上依据的原始假设假说不同所以在种的鉴定上 种级水平分类关系的基本信息 1。,( ) ,材料与方法 有许多混淆之处此外除非采集到结构完整的标本否 ,6,1, 1 《》14 , 分类抽样 依据中国苔藓志相关内容选择 种则一些在分类上很关键的形态学特征在种级水平鉴定上也 。,真藓科及相关科属植物作为试验材料凭证标本信息见表 不总能发挥作用更不用说一些种的形态学特征还往往容易 1,( HB- 。,凭证标本保存于河北师范大学生命科学学院标本馆受到其所生存环境因素的影响而可能出现的变化所以若 NU) 。 、想对如此大的存在分类困难的真藓科植物成功进行分类工 ,1, 1, 2DNA ,。,的提取 样品采集后装于纸制标本袋中空气干 作是有相当难度的在这种情况下便需要寻找更为精确 )8 0 ? 。,,燥后贮存 于 冰 箱 中 备 用剪取植株绿色 部 分 放 入 的技术例如分子标记技术以提供高度的多态性以及不同 Eppendorf ,DNA ,离心管中向其中加少许 提取缓冲液利用电 。的特征用以解决真藓科植物的分类问题 ,DNA ,钻研磨使用植物 基 因 组 提 取 试 剂 盒天 根 生 化 科 技 Zietkiewicz 1994 等于 年阐明了简单序列重复区间扩增 ,2,( ) ,DNA 北京有限公司及其配套 方案 气瓶 现场处置方案 .pdf气瓶 现场处置方案 .doc见习基地管理方案.doc关于群访事件的化解方案建筑工地扬尘治理专项方案下载 分别制备各种类的 样 ( ISSR) 。ISSR 多态性简称 方法使用锚定的简单序列重复 TM 。DNA NanoDrop1000 品提取 样品的质量和浓度采用 超 ( SSR) SSR ,简称 作为引物扩增由两个相反的微卫星或 界定 / ( ThermoS cientific) ,微量紫外光 可见光分光光度计检测作 DNA ,DNA 的一个 片段因为微卫星 的进化速率比其他类型 PCR 。 为 扩增反应模板DNA ,ISSR DNA( 的 要高标记应该比其他大多数类型的 包 1, 3PCR ( )以 真 藓 科 银 叶 真 藓 的 反 应 的 建 立 预 试 验 RAPD) 。,ISSR 括 揭示多态性的可能性更大同时方法因比 ,4, DNA ,Hassel ,样品作为模板参照 等的研究报道建立起最 RAPD ,Qian 技术具有更长的引物 序列和更高的退火温度,3,ISSR-PCR 、ISSR 初的 反应体系扩增程序及 扩增反应的引物 ISSR ,等研究认为会产生更为可靠和可重复性更强的条 ( 2) 。表 。,ISSR DNA ,带另外方法无需事先知道 序列的信息还能产 ,4,,5,20 l 2 l 10 × Taq P lus bufferμ反 应 体 系 包 括 μ,。,ISSR 生许多标记操作简单且经济研究表明技术在 ,200 mmol / L Tris-HCl ( pH 8, 4 ) ,200 mmol / L KCl,100 。,ISSR 解决种级水平分类关系上是一个有效的工具但是方 mmol / L C2006000147 ) ; ( 基金项目 河北省自然科学基金资助项目郑州市科技 ( NH) SO,15 mmo / L MgCng DNA ,10 l ll,,10 等模板μ( 10PTGN449-6 ) ; 4 2 4 2 计划 项目进度计划表范例计划下载计划下载计划下载课程教学计划下载 资 助 项 目 河南省科技计划项目 ( 11230041001)8 。 10 作者简介 汪琛颖( 1968 )) ,女,河 南 南 阳 人,副 教 授,博 士,从 事 苔 藓 2 + mol / L ,0, 6 l 25 mmol / L Mg,0, 12 l 5 U / l 引物μμμμ,E-mail: okwcy @ yahoo,植物分子 系统发生及分类学研究 com, cn。 Taq 2011-08-01收稿日期 plus DNA ,( ) ,,0, 4 聚合酶天根生 化 科 技 北 京有 限 公 司μ Eppendorf,) ,: 94 ? 42% ( W / V) ,( ) 仪德 国上 进 行反 应 条 件 是预 变 性 的琼脂糖凝胶电泳中分离电压 司核酸染料的 min; 94 ? 1 min,48 : 50 ? ( ) 2 min,72 4, 3 V / cm。GeneGenius Super12 变性 不同引物退火 为 电泳 结 束 后 在 全 自 动 凝 ? 1 mn,35 ; 72 ? 7 min,4 ? i。延伸 个循环最后 延伸 贮存备 胶成像分析系统上观察并拍照记录 。Goldview ( 用扩增产 物 在 含 北京赛百盛基因技术有 限 公 1 表 凭证标本信息 Table 1 Voucher specimen information amyGenusSpecesebaum voucheFiliHrrir科 属 种 标本凭证 AnomobryumAnomobryum emmgigerum Broth20073730, , B, ,LLi真藓科 银藓属 芽孢银藓 云南泸水县老窝乡 BryaceaeBrachymeniumBrachymenium longicolle Thér,,20073687, L, B, Li短月藓属 大孢短月藓 云南泸水县老窝乡 Bryum argenteumHe dw,,20050031, J, C, ZhaoBryum银叶真藓 河北平泉县马架子 真藓属 Bryum paescens Scheich, ex Schwaegr, lll黄色真藓 暖地,20050088, D, Wang河北平泉县辽河源保护区龙母洞 Rhodobryum igganteum ( Schwaegr, ) Par, 大叶藓 平蒴hodobyum,20070472, J, C, ZhaoRr 四川全县喇叭河自然保护区 大叶藓属 Pagiobryum zierii ( Hedw, ) Lindb, l藓 夭命丝瓜藓 Plagiobryum,000514, W, Q, Li平蒴藓属 河北隆化县茅荆坝 Pohlia annotina ( Hedw, ) Lindb, ,J004, J, C, ZhaoPohlia日本广岛绿化中心 丝瓜藓属 ,20070940, J, C, Zhao丝瓜藓 Pohlia elongata Hedw, 四川全县喇叭河自然保护区 ,070809, J, C, ZhaoPohlia crudoides ( Sull, , Lesq, ) Broth,新疆乌鲁木齐市南山小渠子林场 小丝瓜藓 ,J013, J, C, ZhaoPohlia nutans ( Hedw, ) Lindb,日本广岛绿化中心 黄丝瓜藓 Pohia proigera ( Kindb, ex Limpr, ) Lindb, ex Arn,,J008, J, C, Zhaoll卵蒴丝瓜藓 日本广岛绿化中心 Pohia ongicois ( Hedw, ) Lindb,,97067, Y, Z, Yellll拟长蒴丝瓜藓 河南省嵩县白云山九龙瀑布 MniumMnium hornum Hedw,,20080015, J, C, Zhao提灯藓科 提灯藓属 提灯藓 湖南湘潭市韶山冲 Mniaceae Plagiomnium Plagiomnium cuspidatum ( Hedw, ) T, Kop, ,20070925, C, Y, Wang 匐灯藓属 匐灯藓 河北平山县驼梁 ISSR ( UBC) 2 表 引物序列来自 及其退火温度 PCR ×Ta q 16。2 l 10 验总组合数为 每 反应管中另加 μ Pusl SS pme sequence(s fom the Unvesy of Bsh Colum- IRrirriritritiTable 2 bia) usedf or Bryum argenteum and their primer specific an- DNA ,20 。l缓冲液及相应反应物和 模板补足水分至 μ并 neang empeaues litrtr。设 计重复试验 ISSR 6 ISSR-1, 5藓类植物样品 多态性 使用筛选出的 个 5-3)( ''引物 引物序列退火温度 PCR ISSR ,引物以及优化的标准 反应体系对来自于真藓科 Primer Primer sequenc(e 5'-3') Annealing temperature? ?14 。ISSR- 和提灯藓科的 种样品分别进行扩增每个样品 的 UBC808AGA GAG AGA GAG AGA GC50 UBC811GAG AGA GAG AGA GAG AC 50PCR 、,1,0。扩增条带按有无记录有带的记为 无带的记为 仅 UBC812AA 50GAG AGA GAG AGA GAG CAC ACA CAC ACA CAC AG UBC81850,。PAUP记录可重复和可靠的条带得到原始数据矩阵使用 UBC825ACA CAC ACA CAC ACA CT 48,7, Version 4, 0b10NJ) ( 。软件的邻接法进行聚类分析 ACA CAC ACA CAC ACA CC UBC82648 2结果与分析 ,4, 1, 4SS-PC 、Hasse IRRl6 反应体系的优化 为最终获 到 界 限 分 明 2, 1 等提及的 条引物在试验 适当引物的筛选 、、,背景清晰可重复性好亮度适宜的扩增条带选用其中一条 ,中均能产生条带但条带的强度和可分辨性对于条带的记录 UBC808 PCR PCR 。PCR 、( 1) ,。 引物 进一步优化 反应体系退火温度底 反应体系需进一步优化不理想图 表明 PCR 物浓度等因素会影响一个特定引物的 扩增片段的数目 2 + ,5 ( Mg、dNTPs、和长度因此采用正交试验 设 计 在 因 素 引 、DNA 、Taq DNA ) 4 ( 3) PCR 物模板聚合酶水平上表 优化 扩 。PCR “1, 3”,50 ? 。增体系反应条件同退火温度为 正 5交试 L( 4 ) ISSR 3 表 正交试验设计产生的 反应体系 16 Table 3 ISSR reaction systemp roduced by meanso f orthogonal experi- 5mental design methodL ( 4 ) 16 A Taq DNA DN聚合酶 Taq 模板 引物 2 + dNTPs编号 MgDNA Template polymeraseU M, ( Hnd ) ; 2 ) 3, : iDNA + BamH+ DNA ?注标准分子量参照物λ??引物 Pmerir No,mmo / L mmo / llL/20 lμ ng /20 μlmol / μ UBC808; 4 ) 5, 引 物 UBC811; 6 )7 , 引 物 UBC812; 8 )9 , 引 物 L 11, 750, 10, 150, 4UBC818; 10 ) 11, 引物 UBC825; 12, 引物 UBC826。 22, 000, 20, 20, 410Note: M: Marker ( + BamH )3 : + Hind ) ; 2 DNA λ? ? 32, 250, 30, 30, 415Primer 42, 500, 40, 40, 420UBC808; 4 ) 5: Prmer UBC811; 6 ) 7: Prmer UBC812; 8 ) ii 51, 750, 20, 40, 6159: Primer UBC818; 10 )1 1: Primer UBC825; 12: Primer 62, 000, 10, 30, 620 UBC826, 72, 250, 40, 20, 651 ISSR 图 不同 引物的扩增 82, 500, 30, 10, 610 Fig, 1 Amplification results using different primers91, 750, 30, 20, 820 2, 2SSR-PCR 、I反应体系的优化 为最终获得界限分明 102, 000, 40, 10, 815、、, 背景清晰亮 度 适 宜可重复性好的扩增 条 带在 分 析 最 初 112, 250, 10, 40, 810 122, 500, 20, 350, 8PCR UBC808 , 反应结果的基础上使用引物 以及银叶真藓的 131, 750, 40, 31, 010 DNA PCR 。 样品作为扩增模板进一步对 反应体系进行优化142, 000, 30, 41, 05 152, 250, 20, 1201, 02 ,1、6、8、9、10、11、15 16 ,由图 可知除了组合 和 外剩余的组 162, 500, 10, 2151, 0。7,合均产生条带其中产生条带最为清晰的是组合 产生的 Taq DNA ,0, 4 mmol / L dNTPs。U 10 PCR 。: 20 l 聚合酶 条带数为 条即最适 反应体系为μ反应体系 包 2 + 5 ng DNA ,0, 2 mol / L ,2, 25 mmol / L Mg,括 模板μ引物 0, 6 M, ( Hind ) ; ( a) 1 ) 2、3 ) 4、5 ) 6、7 ) 8、9 ) 10、11 ) 12、13 ) 15 3 1、2、3、4、5、6、: DNA + BamH+ 注标准分子量参照物λ??分别对应表 中的组合 7,16 b) 1 ) 2、3 ) 4、5 ) 6、7 ) 8、9 ) 10 6、8、9、10、11,11 c) 1 ) 2、3 ) 4、5 ) 6、7 ) 8、9 ) 10 ; ( 3 ; ( 为对照组分别对应表 中的组合 为对照组分别 3 12、13、14、15、1,611 。对应表 中的组合 为对照组 Note: M: Marke(r Hind ) ; ( a) ,1 ) 2 ,3 ) 4,5 ) 6,7 ) 8,9 ) 10,11 ) 12,13 ) 15 referr espectively to treatments1, 2,3,4,5, DNA + BamH+ λ??6 and7 in Table 3,lane 16 is negative control; ( b) ,1 ) 2 ,3 ) 4,5 ) 6,7 ) 8,9 ) 10 referr espectively to treatments6, 8,9,10 and1 1 in Table 3,lane 11 is negative control; ( c) ,1 ) 2 ,3 ) 4,5 ) 6,7 ) 8,9 ) 10 referr espectively to treatments12 ,13,11,14,15 and1 6 in Table 3,lane 11 is negative control,2 ISSR-PCR 图 正交试验设计电泳结果 Fig, 2 Electrophoresis of ISSR-PCR orthogonal design ISSR ,2, 3 ISSR 200 : 2 000 bp,14, 3 ,为确保 的可重复性根据优化建 多态性 围为 每条引物平均产生 条带多态性带 PCR ISSR 14 86 100% 。,ISSR ,6 ,为 立的 反应体系使用 个 引物对 个样品逐一进 条多态率达 结果表明指纹能够在种级 PCR 86 ( 3) 。6 , ,UBC808 、811 行 扩增图 条引物共扩增出 条带长度大小范分 类水平提供适度的多态性 利 用 引 物 以 及 ) 14 : 1 、、、、、、、、、、、注分别代表样品芽孢银藓大孢短月藓暖地大叶藓平蒴藓丝瓜藓匐灯藓黄色真藓黄丝瓜藓夭命丝瓜藓银叶真藓卵蒴丝瓜藓 、、; 15 ) 16, ; M, 100 bp 。提灯藓小丝瓜藓拟长蒴丝瓜藓对照标准分子量参照物 Note: Lanes1 ) 14 represenst amples Anomobryume mmgigerum,Brachymenium longicolle,Rhodobryum giganteum,Plagiobryum zierii,Pohlia elongata, Plagiomnium cuspidatum,Bryum pallescens,Pohlia nutans,Pohlia annotina,Bryum argenteum,Pohlia proligera,Mnium hornum,Pohlia crudoides, Pohlia longicollis; Lanes 15) 16: Negative control; M: Marker ( 100 bp DNA ladder) , 3 ISSR 图 扩增产物电泳结果 Fig, 3 Electrophoresis map of ISSR amplification products ,11 ) 13,Cox 、826 ISSR 。等使用叶绿体基因组核基因组及线粒体基因组的 构建的 指纹图谱能够区分所有供试植物 DNA NJ ,2, 4 序列数据的分子系统发育分析研究认为丝瓜藓属与传 根据扩增结果进行 聚类分析得到的 聚类分析 ,14, ( 4) 。,( P, annotina) 。Crosby 支序图呈星状图 其中夭命丝瓜藓和拟 统上划归提灯藓科的属排列更近等提出将丝瓜 ( P, longicollis) ,( P,nu-。。 长蒴丝 瓜 藓 形 成 一 支与 黄 丝 瓜 藓 藓属移至提 灯 藓 科丝瓜藓属植物的归 属问题存在争议tans) ; ( P, elongata) ( M, hornum)区分明显丝瓜藓和提灯藓 虽然目前该研究所呈现的丝瓜藓属中种与种的系统发育关 ,( P, proligera) ( P, cuspida- 形成一支而卵蒴丝瓜藓和匐灯藓,SSR I系有待进一步探讨但结果显示出的 标记高水平的多 gem-tum) P, crudoides) ( A,; ( 。 聚为一支小丝瓜藓和芽孢银藓 态性为整个基因组提供了区分关系相近的藓类种的可行性migerum) ,。 ,聚为一支而与其他丝瓜藓属植物区分开特别是当形态学特征不足以鉴定真藓科植物种的时候由 UBC808、811、826 DNA 引物构建的 指纹能进一步提供额外 ,的信息这无疑为真藓科以及丝瓜藓属等植物的分类问题的 。最终解决带来了希望 参考文献 ,1,OCHI H, A revised infrageneric classification of the genus Bryum raenladt- ed genera ( Bryacea,eMusci) ,J,, Bryobrothera,1992,1: 231 ) 244, ,2, ZETKEWCZ E,RAFALSK A,LABUDA D, Genome infgerprinting by IIII simple sequence rep(ea SStR) -anchoredo lpymerase chain reaction amplifi- SS NJ caton,J,, Genomc,1994,20 176 ) 183, 4 IRii:图 数据分析产生的 无根邻接树 Fig, 4 Unrotted neighbor-joining tree resulting from the analysis ,3, QAN W,GE S,HONG D Y, Genetic variation within and amongo ppula- I tions of aw ild rice Oryza granulate from China detected bRAy PD and IS-of ISSR dataset SR markers,J,, Theoretical and Applied Genetics,2001,102: 440 ) 449, 讨论 3,4, HASSEL K,GUNNARSSON U, The use oifn ter simple sequencree peats ( ISSR) in bryophyte oppulation studies,J,, Lindbergia,2003,28: 152 ) 正交试验设计对于多因素试验设计来讲是一种有效的 157,,,数学方法它的便利之处在于检验多个因素的同时容易通 ,5, BLAIR M W,PANAUD O,MCCOUCH RS, Inter-simple sequencree peat ( ISSR) amplication for analysis of microsatellite motif frequency andin -f 。过直觉发现最佳的试验方案为了获得稳定的和可重复的 gerprinting in rice ( Oryza sativa L,) ,J,, Theoretical and Applied Genet- ,ISSR-PCR 。 扩增结果有必要对不同种的 反应体系进行优化ics,1999,98: 780 ) 792, 2 + ,6, 黎兴江,张大成,臧穆, 中国苔藓志( 第四卷) ,M,, 北京: 科学出版社, PCR MgdNTPs 、 ,、有多重因素会影响 扩增例如 浓度浓度2006 1 ) 111, :* * Taq DNA 、DNA ,聚合酶浓度引物浓度及 模板浓度等为寻找 ,7, SWOFFORDDD L, PAUP: Phylogenetic analysis using parsimony( and other metho) ds Version 4, 0b10,K,, Sunderland,Massahucsetts: Sinauer PCR ,,到一套适合的 反应参数同时缩小试验的规模采用正 Assoicates,2002, 5L( 4 ) 。交试验设计的方法通过 正交表设计的试验结果显 16 ,8, 陈邦杰,万宗玲,高谦,等, 中国藓类植物属志( 上册) ,M,, 北京: 科学 2 + 1963: 253 ) 256,,出版社 ,2, 25 mmol / L Mg示是获得强度和清晰度均合适的条带所 ,9, OCH H, A revson of the Bryaceaine Japan and thaed acent area,sM,, Iiij; 0, 03 U / l Taq DNA 必需的μ聚合酶能确保扩增条带的清晰 Tottori: The Biological Institute,Faculty of Liberal Arts,Tottori University, 1959: 1 ) 124, ; 0, 4 mmol / L dNTPs Taq DNA 度能平衡 聚合酶的保真度减 ,10, GANGULEE H C, Moss of EasterInnd ia and adjacent regions ,M,, Fasc PCR ; ,少与 反应有效性减少的矛盾随模板浓度增大虽然条 1 ) 8, Cacutta Pubshed by the Author,1980 888 ) 1022, l:li: ,11, COX C J,HEDDERSONT A J, Phylogenetic relationships among theci li- ,,5 ng /20 l DNA 带强度能增加但是条带变得弥散μ的 模板 ate arthrodontouso ssme:s Evidence fromc hloroplast and nuclear DNA se- PCR 。浓度能平衡每个 反应条带强度和可确认性 quence,J,, Plant Systematics and Evolution,1999,215: 119 ) 139, ,12, COX C J,GOFFINET B,NEWTON A E,et al, Phylogenetic relationships DNA ,提取微量的 就能满足试验分析之需对于研究藓 among the ipdlolepideous-alternate mosses( Bryidae) inferred from nu- 。,类植物特别有意义对于许多种藓类植物特别是真藓科植 cear and choropast DNA sequence,sJ,, The Bryoogst,2000,103 224 lllli: ) 241,,,,物植株通常很小单个配子体仅有几毫米高野外采集样品 ,13, COX C J,GOFFINET B,SHAW A J,et al, Phylogenetic relationships 。,的量有限特别对于一些濒危藓类种影响小的抽样就能解 among the mosses basheedte rogone neous Bayesian analysis of multiplegenes from umltiple genomic compartments,J,, Systematic Botany,2004, 。决样品采集和避免破坏生境的矛盾 29: 234 ) 250, ,、传统分类上丝瓜藓属植物因叶细胞狭长形孢蒴有长 ,14, CROSBYM R,MAGILL R E,ALLEN B,et a, A checkst of them osse slli,6,8 ) 10, ,EB / OL,, www, mobot, org / MOBOT / tropicos / most / checklist, shtml, 、。的蒴台部孢蒴垂倾等形态学特征而 划 归 真 藓 科但 檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪 1994,21( 3) : 245 ) 250,,园艺学报 ( 16486 )上接第 页 ,6, ,,, COJ,, ,于国华宫本堂何忠诚大栩黄瓜增施 对光合速率的影响莱 2 参考文献1996,13( 1) : 5 ) 10,,阳农业院学报 ,1, , ,J,, 蒋高明当前植物生理生态学研究的几个热点问题植物生态学 ,7, ,,, ,J,,喻梅高琼高素华全球变化条件下植物个体的生理生态学模型 2001,25( 5) : 514 ) 519,,报 1997,9( 9) : 811 ) 820,,植物学报 ,2, ,ENGELBERT W,,, : 盂庆伟邹琦等银杏叶片的光抑制和光保护机制,8, , ,M,, : ,2000: 169 ) 178,王忠植物生理学北京中国农业出版社 J,, 1999,41( 4) : 398 ) 404,、COO,,温度和 的影响植物学报 ,9, ,,,, CO王精明李永华黄胜琴等浓度升高对红掌光合速率与生长发育 2 2 2 ,J,, 2005,32( 2) : 335 ) 338,,,3, , COJ,, 的影响园艺学报 ,许大全光合作用及有关过程对长时期高 浓度的响应植物生 2 ,10, ,,, 1994,30( 2) : 81 ) 87,孙伟王德利王立狗尾草蒸腾效性和水分利用效率对模拟光辐射 ,理学通讯 COJ,, 2003,27( 4) : 448 ),,,4, ,,,, CO,Rubisco 增强和 浓度升高的响应植物生态学报 于国华张国树淑敏等浓度对黄瓜叶片光合速率活性 2 2 453,,J,, 1997,12( 4) : 101 ) 106,,及呼吸速率的影响华北农学报 ,5, ,,, COJ,,,王修兰徐师华李佑祥大白菜对 浓度倍增的生理生态反应 2