实验二十一_可溶性总糖的测定(蒽酮比色法)
实验二十一 可溶性总糖的测定(蒽酮比色法) 一、目的
掌握蒽酮法测定可溶性糖含量的原理和方法。
二、原理
强酸可使糖类脱水生成糠醛，生成的糠醛或羟甲基糖醛与蒽酮脱水缩合，形成糠醛的衍生物，呈蓝绿色，
该物质在 620 nm 处有最大吸收 . 在 10 -100ug 范围内其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。
这一方法有很高的灵敏度，糖含量在 30ug 左右就能进行测定，所以可做为微量测糖之用。一般样品少的
情况下，采用这一方法比较合适。
三、仪器、试剂和材料
1 .仪器
( 1) 分光光度计
2 )电子顶载天平 (
(3 )三角瓶: 50m1 X 1
( 4 )大试管: 9 支
( 5) 试管架，试管夹
( 6 )漏斗，漏斗架
( 7 )容量瓶: 50rnl X 2
( 8 )刻度吸管: 1m1X3 ， 2m1X1 ， 5mlX1
( 9 )水浴锅
2 .试剂
( 1) 葡萄糖
标准
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液: l00ug/ml
(2 )浓硫酸
(3) 蒽酮试剂 :0.2g 蒽酮溶于 100 ml 浓 H2SO4 中当日配制使用。 3 .材料
小麦分蘖节。
四、操作步骤
1 .葡萄糖标准曲线的制作
取 7 支大试管，按下表数据配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液:
管号 1 2 3 4 5 6 7 葡萄糖标准液( ml ) 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.6 0.8 蒸馏水( ml ) 1 0.9 0.8 0.7 0.6 0.4 0.2 葡萄糖含量( ug ) 0 10 20 30 40 60 80 在每支试管中立即加入蒽酮试剂 4.0m1 ，迅速浸于冰水浴中冷却，各管加完后一起浸于沸水浴中，管口加盖玻璃球，以防蒸发。自水浴重新煮沸起，准确煮沸 l0min 取出，用流水冷却，室温放置 10min ，在 620 nm 波长下比色。以标准葡萄糖含量( ug) 作横坐标，以吸光值作纵坐标，作出标准曲线。 2 .植物样品中可溶性糖的提取
将小麦分蘖节剪碎至 2mm 以下，准确称取 Ig, 放入 50m1 三角瓶中，加沸水 25m1 ，在水浴中加盖煮沸 10min ，冷却后过滤，滤液收集在 50m1 容量瓶中，定容至刻度。吸取提取液 2m1 ，置另一 50m1 容量瓶中，以蒸馏水稀释定容，摇匀测定。
3 .测定
已稀释的提取液于大试管中，加入 4.Oml 蒽酮试剂，以下操作同标准曲线制作。比色波长 吸取 lml
620nm ，
记录
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吸光度，在标准曲线上查出葡萄糖的含量( ug )。
查表所得糖含量( ug )×稀释倍数
五、结果处理
六、注意事项
1 .该显色反应非常灵敏，溶液中切勿混入纸屑及尘埃。
2 . H 2 SO 4 要用高纯度的。
3. 不同糖类与蒽酮的显色有差异，稳定性也不同。加热、比色时间应严格掌握。
七、思考题
1 .用水提取的糖类有哪些,
2 .制作标准曲线时应注意哪些问题,
浙公网安备 33021202002483