急性髓细胞白血病中各特异性物质的表达及临床意义

急性髓细胞白血病中各特异性物质的 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 达及临床意义 年级:2011级生物技术姓名:陶廷露学号:2011222683 摘要:白血病已成人类生命健康的头号杀手之一,对白血病的研究日益重要,而白血病中的特异性物质的表达受到了众多研究者的关注。其中利用Real-time PCR 检测 工程第三方检测合同工程防雷检测合同植筋拉拔检测方案传感器技术课后答案检测机构通用要求培训 AML患者中COX-2mRNA的表达水平,以此分析COX-2表达水平与AML 临床病理特征和预后的关系;应用半定量逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR )测定成人急性白血病及对照组外周血中FOX01的含量,并进行比较以此探究FOX01在成人白血病患者及健康人外周血中的表达及临床意义;采用免疫组化法检测A M L患者及非肿瘤患者骨髓骨桥蛋白(OPN)的表达,同时采用ELISA 法检测初治AML、化疗缓解AM L及复发AML患者血清OPN 的水平以此探讨OPN在急性髓系白血病患者中的表达及意义。 关键词:急性髓系白血病;环氧化酶2;转录因子叉头框蛋白;骨桥蛋白; 一、各特异性物质的表达检测方法 (一)环氧化酶2的表达检测方法及临床意义 方法:环氧化酶(Cyclooxygenase COX ),又称前列腺素过氧化物合成酶,是前列腺素(PG )合成起始步骤的关键酶【1】目前发现两种COX,即COX -1和COX -2,二者具有不同的结构和生理功能。研究表明,COX-2在多种实体瘤组织中高表达,并且其表达上调与肿瘤的预后相关。采用采用Rea1-time PCR检测COX -2基因在急性髓细胞白血病(AML )中的表达情况,并探讨其与AML预后的关系。 将临床上特定数量的初治AML患者进行分型,用相同的方法治疗2周,取骨髓后进行单个核细胞的总RNA提取,并进行cDNA的合成,采用Real-time PCR检测COX-2 mRNA的表达水平。 AML患者COX -2mRNA RQ的均值为4.77±2.21,以此均值为界值,将AM L患者分为两组:超过半数患者为COX-2高表达组(8.33±1.96 ),患者为低表达组(1.89 ±1.04)。 环氧化酶2的临床意义【2】:CO X -2为诱导型,又被称为“快速反应基因”,在正常生理状态下几乎不表达或表达甚少。【3】诱导COX - 2表达的因素存在于细胞内外,多种生长因子或细胞因子(EG F、TG F-B、TG F) 、细菌脂多糖、诱生性一氧化氮合成酶(iNOS)以及癌基因Ras、V-SRC、丝裂原等均可诱导COX -2表达。多项研究证实COX-2在肿瘤的发生、发展中发挥重要作用。首先在一系列癌前病变及癌细胞中发现COX- 2高表达。研究发现B-慢性淋巴细胞白血病中COX-2表达水平上调,体外实验发现COX-2特异性抑制剂NS-398可加速白血病细胞的凋亡。 (二)转录因子叉头框蛋白的表达检测方法及临床意义 方法:人的FOXO1基因定位于13号染色体(13q13—14.1),编码655个氨基酸。研究证实,FOXO1广泛表达于成人的各组织器官中,包括心、脑、胎盘、肺、肝。骨骼肌、肾、脾、胸腺、前列腺、睾丸、卵巢、小肠、结肠、外周血白细胞【4】。用Trizol试剂盒严格按RNA提取试剂说明书操作进行总RNA的提取,然后进行RT-PCR反应,琼脂凝胶电泳进行产物分析,最后统计学处理。结果AL患者外周血中FOX0l的表达量明显高于对照组。 转录因子叉头框蛋白的临床意义【5】:Ciechomaska等报道PI3K抑制剂 LY29400促使胶质瘤C细胞中的F0X01蛋白进入细胞核,抑制细胞增殖;但不能促进Fasi的表达及细胞凋亡;在骨髓瘤MM.IS细胞株中,LY2940002激活Foxol,上调p27K ipl,使细胞阻滞于G期。本实验结果显示,A L患者外周血中FOXO1的表达量明显高于对照组,提示FOXO1可能参与A L细胞的凋亡和增殖。 (三)骨桥蛋白的表达检测方法及临床意义【7】【8】 方法:骨桥蛋白(osteopontin,OPN )是一种分泌型磷酸化糖蛋白,近年来的相关研究表明,该蛋白与肿瘤的转移、浸润、复发有关。【6】OPN通过与各种细胞受体相互作用促进肿瘤细胞的迁移和侵袭,抑制细胞凋亡,并促进细胞外基质重塑和血管生成。然而OPN与急性髓系白血病的关系,目前国内外研究仍较少。采用免疫组化法对临床标本进行骨桥蛋白的表达检测,为临床提供诊断依据。首先常规做骨髓组织病理切片,然后用ELISA法检测外周血清中OPN的含量并进行统计。结果OPN蛋白在AML骨髓组织的表达明显高于非肿瘤患者骨髓组织。 骨桥蛋白的临床意义:AML患者骨髓组织OPN表达明显高于非肿瘤患者骨髓组织,提示OPN在AML发病中可能起作用,进一步用ELISA法检测初AML、化疗缓解AML及复发AML患者血清OPN的浓度,结果显示化疗缓解AML患者血清OPN浓度均低于初治AML及复发AML患者血清OPN浓度,并且复发AML患者血清OPN浓度比初治AML患者血清OPN浓度明显增高,以上结果提示OPN在AML发病中起主要作用,OPN可能成为AML治疗的新靶点。二、前景及展望 目前有关AML的研究集中于探寻新的分子生物学标记物,并据此完善AML 预后分层系统,研发新的治疗药物,实现个体化治疗,有关COX-2基因是否能成为A M L新的生物学标志物及治疗靶点,尚需更大样本及基于AML遗传学分型基础上更细致的研究,以得出更准确的结论。目前对FOXO1的表达与AL的化疗疗效有关,随着病情的缓解其表达量下降。但FOXO1在A L中作用的具体机制及与其它基因的关系有待于进一步的研究。OPN可能通过自分泌及旁分泌方式参与肿瘤干细胞的耐药。然而仍需要进一步深入研究OPN在AML发病中的具体机制及OPN 作为AM L 治疗可能的新靶点。 参考文献: 【1】、OstrovDA ,Contag CH.Molecular imaging of inflammation and carcinogenesis[J].Cancer Prey Res(Phila) ,2011,4 (10) : 1523 —1526 . 【2】、白颖,刘彦琴等,COX -2在急性髓细胞白血病中的表达和临床意义的初步研究,2013,1009 — 0460(2013)09 — 0795 — 04 【3】、Wang D ,Dubois RN .The role of COX -2 in intestinal inflammation and colorectal cancer[J].Oncogene,2010 ,29 (6 ):781-788 【4】、Anderson MJ,Viars C S ,Czekay S ,et a1 .Cloning and characterization of three human fork head genes that comprise an FKHR ——like gene subfamily[J].Genomies,1998 ,47 (2) :l87—199 【5】、倪蕾,侯志凌等,FOXO1在急性白血病中的表达及临床意义,2014, 1008—0104 (2014)01—0013—02 【6】、晋雯,李赞,黄智勇等.骨桥蛋白RNA干扰对人U251胶质瘤细胞在裸鼠体内生长的影响[J].中国生物化学与分子生物学报,2011,27(6):574 —581. 【7】、陈自仁,骨桥蛋白在急性髓系白血病患者中的表达及意义,2014,【8】、于广晴,鲍莹莹,倪蕾等,急性髓细胞白血病患者环氧化酶一2与骨桥蛋白表达的意义及相关性研究,2014,1008—0104(2014)01—0023—02