黄芪注射液多剂量给药对雷替曲塞在大鼠体内药动学行为影响.doc

黄芪注射液多剂量给药对雷替曲塞在大鼠体内药动学行为影响.doc 黄芪注射液多剂量给药对雷替曲塞在大鼠体内药动学 行为影响 [摘要] 该研究揭示了黄芪注射液多次给药对雷替曲塞大鼠体内药动学行为影响。12只SD大鼠分为多剂量组和对照组，多剂量组每天早晨8点尾静脉注射黄芪注射液，连续给药7 d。第8天早注射黄芪注射5 min后，注射雷替曲塞溶液;对照组前7天不做处理，第8天与多剂量组同时注射雷替曲塞溶液。分别于大鼠雷替曲塞给药后不同时间点采血，处理后经HPLC进样 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 ，并计算药动学参数。从大鼠血浆药时曲线中可以看出，多剂量组与对照组相比，各时间点浓度均较低，AUC和t1/2均值分别由56 080 μg?min?L-1和15.07 min减小到35 834 μg?min?L-1和8.95 min，CL则由0.51 mL?h-1提高至0.83 mL?h-1，推测黄芪注射液多次给药后可影响大鼠对雷替曲塞的糖代谢和肾排泄功能，进而使其药动学行为发生变化。 [关键词] 雷替曲塞;黄芪注射液;相互作用;药动学 [收稿日期] 2014-03-16 [基金项目] 安徽省自然科学基金项目(1408085MH206) [通信作者] 邢蓉，主任药师，副教授，硕士生导师，E-mail:xingrong9796@163.com 美国食品药品监督管理局(FDA)网站上最新公布的统计显示，FDA每年收到的药物不良反应(adversed drug reaction， ARD)报告数量自2003 年起呈递增趋势，至2011年已增至约80万份。各方对于ADR导致的具体死亡人数报道虽有偏差，但临床合理用药对于避免或减小ADR的必要性却是人们的共识，也是决定药效的关键因素之一。 化疗时联合用药作为临床治疗癌症的常用手段已得到广泛应用，如刘桂兰等[1]收集临床样本得出卡培他滨与吉西他滨联用比与多西紫杉醇联用有更好地疗效;郑文斌等[2]使用塞来昔布联合奥曲肽增加了对胃癌多药耐药细胞生长的抑制。然而联合用药的副作用也应得到重视，如阿霉素与多种药物联合化疗时，其在大鼠体内消除速率加快[3];以吉西他滨为主的数种联合化疗在改善了患者半年生存率的同时也增加了药物的毒副作用[4]。雷替曲塞(raltitrexed， RTX)目前可作为治疗结直肠癌的一线药物使用[5]。黄芪是临床应用最为广泛的补益类中药，可增强化疗患者免疫功能，本身还具有一定的抗癌活性[6]。两者在临床上若能安全、有效联用，则将对RTX临床治疗产生积极影响。本课题组在前期实验中观察到，黄芪注射液单次给药对RTX在大鼠体内药动学行为的改变并无显著性差异[7]。因此本文继续探究黄芪注射液多次给药后RTX药动学行为。 1 材料 1.1 仪器 LC-15C高效液相色谱仪(日本Shimadzu公司);TG16-WS台式高速离心机(湖南湘仪集团);XW-80A涡旋混合仪(上海沪西仪器有限公司);AB-135型分析天平[梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司]。 1.2 试剂 注射用雷替曲塞(南京正大天晴制药有限公司，批号120607)，雷替曲塞对照品(南京正大天晴制药有限公司，批号Y12062901)，黄芪注射液(正大青春宝药业有限公司，批号1112103)，生理盐水(开开 援生制药股份有限公司，批号11102752)，甲醇(上海星可生化有限公司，批号021120801)，乙酸(江苏强盛化工有限公司，批号20090115)，纯净水为实验室自制。 1.3 动物 SPF级SD大鼠，雌雄各半，体重(200?20) g，由安徽医科大学实验动物中心提供，合格证号为SCXK(皖)2011-002。 2 方法与结果 2.1 HPLC条件 COSMOSIL 5C18-MS-?色谱柱(4.6 mm×250 mm， 5 μm)，流动相为甲醇-水(含0.5%乙酸) 45?55;检测波长349 nm，流速1 mL?min-1，柱温30 ?，进样量20 μL。 2.2 血浆样品处理方法 取大鼠血浆100 μL置于肝素化的离心管中， 14 000 加入300 μL甲醇以沉淀蛋白，置于涡旋振荡器上混匀3 min，r?min-1离心10 min，精密吸取上清液200 μL，过0.22 μm微孔滤膜，待进样。 2.3 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 曲线和定量下限 分别配制不同浓度RTX对照品储备液，取适量加入到空白血浆中配制成质量浓度分别为0.1， 0. 25， 0.5， 1.0， 2.5， 5.0 mg?L-1的对照品血浆样本，按2.2项下方法处理进样，以血浆中待测物药物质量浓度X(mg?L-1)对待测药物的峰面积Y做回归方程为Y=13 160X+1 238.9，R2=0.997 8。结果 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 明RTX在0.1,5 mg?L-1线性关系良好。血浆中RTX的定量下限(S/N=10)为0.1 mg?L-1。 2.4 专属性考察 取大鼠空白血浆样本，大鼠空白血浆添加雷替曲塞对照品样本，大鼠空白血浆添加黄芪注射液样本，大鼠空白血浆添加黄芪注射液与RTX混合液样本，及尾静脉注射RTX后血浆样本，按2.2项下处 理进行对照，所得色谱图见图1。黄芪注射液中各成分对RTX的色谱行为并无影响，且不干扰RTX的含量测定;血浆中的内源性物质在RTX出峰处并无杂质，大鼠空白血浆添加雷替曲塞与给药后血样色谱行为一致。 2.5 精密度试验 分别取空白血浆加入不同浓度RTX溶液，配制成低、中、高质量浓度样本(0.1， 0.5， 2.5 mg?L-1)，按2.2项下方法操作，每个浓度平行配制6份，依次进样测定，并连续测定3 d，考察方法日内和日间精密度。结果表明日内精密度低、中、高质量浓度的RSD分别为1.7%，8.8%，2.8%，日间精密度低、中、高浓度的RSD分别为15%，11%，9.4%。 2.6 回收率测定 按2.5项下方法制备并处理得低、中、高质量浓度的样本(0.1， 0.5， 2.5 mg?L-1)，每个浓度平行配制6份，依次进样测得C提取;另取大鼠空白血浆100 μL加入300 μL甲醇沉淀蛋白后，再加入相应浓度RTX对照品溶液，涡旋混匀，离心后取上清液过0.22 μm滤膜待进样，每个浓度平行配制6份，依次进样测得C对照。以C提取除以C对照，得到大鼠血浆中RTX提取回收率。结果表明低、中、高质量浓度提取回收率分别为(81.47?3.71)%，(91.83?4.99)%，(95.74?2.44)%。 2.7 稳定性试验 按2.5项下方法制备并处理得低、中、高质量浓度的样本(0.1， 0.5， 2.5 mg?L-1)，每个浓度平行配制6份，分别于血浆样本在室温放置12 h，反复冻融3次，-20 ?放置1周后依次进样测定。结果表明低质量浓度 RSD小于7%，中、高质量浓度RSD均小于4%。表明在模拟样本测定中可能出现的情况时，血浆样本中待测物稳定。 2.8 药动学研究 取SPF级SD大鼠12只，体重约(200?20) g，随机分为对照组和多剂量组，每组雌雄各半。多剂量组大鼠每天早晨8点尾 静脉单次注射黄芪注射液，给药剂量为1.575 mg?kg-1，连续给药7 d，期间饮食正常。第7天晚8点开始禁食，饮水不限，第8天早晨8点注射黄芪注射5 min后，注射RTX溶液(剂量为0.467 mg?kg-1);对照组前7天不做任何处理，期间饮食正常，第7天晚8点开始禁食不禁水，第8天早晨8点单独注射RTX溶液(剂量同多剂量组)。2组分别于注射RTX溶液后1， 3， 7， 10， 20， 30， 60， 120 min从大鼠眼后框静脉丛取血0.5 mL，置于涂有肝素的离心管中，离心(3 000 r?min-1， 15 min)分离出血浆，按2.2项下方法处理后，进HPLC分析，得到RTX峰面积代入标准曲线内计算浓度。对照组和多剂量组的平均血药浓度-时间曲线见图2。 采用3P97软件计算RTX的药动学参数，见表1。结果采用SPSS 17.0软件进行统计学检验，采用Students′ t-test方法。结果表明，多剂量组和对照组的药动学参数有显著性差异，经计算，P<0.05，有统计学意义。 3 讨论 本实验中黄芪注射液多剂量给药后，多剂量组各时间点血药浓度的均低于对照组，雷替曲塞在大鼠体内药动学行为较对照组有显著改变，主要体现在半衰期(t1/2)缩短，清除率(CL)提高，在血中AUC降低，表明雷替曲塞在体内的代谢和排泄行为都加快。原因可能如下:?肾脏是雷替曲塞排泄途径之一，研究表明小鼠静脉注射RTX(剂量为100 mg?kg-1)后约有15%药物经肾脏排泄[8]。Judson等[9]研究表明，RTX在肾功能损伤肿瘤患者体内的药动学行为与肾功能正常的肿瘤患者相比，其消除相显著延长，清除率降低，体内消除半衰期与AUC下降，表明肾脏功能与RTX 在体内的行为有着密切的关系。通常认为，黄芪具有利水消肿功效，Zheng等[10]研究表明，黄芪苷?可提高肾小球滤过功能，从而增加尿量。提高尿量可加速RTX排泄，可能使得联用后RTX在大鼠血液中浓度降低。?有研究表明黄芪可通过提高胰岛素受体表达以降低血糖[11]，促进糖代谢。糖代谢加快产生的ATP增多，因而多聚谷氨酰合酶的活性可能提高，使得RTX加速代谢为多聚谷氨酸形式蓄积于细胞中，同样使RTX在大鼠血液中浓度降低。 本实验观察到黄芪注射液多剂量给药后，大鼠体内RTX血药浓度下降，而通过对药动学参数的分析，揭示临床上黄芪注射液与RTX联合用药时，RTX的用量调整更需谨慎。因倘若RTX直接通过肾排泄被排除体外，则需要考虑增加用药量以使血药浓度达到治疗窗;但若是RTX以多聚谷氨酸代谢物形式蓄积在细胞内，虽同样表现为血药浓度下降，RTX用量却应得到控制甚至降低用药量，因RTX聚谷氨酸形式的代谢物的抗癌活性比原型药强约100倍，过多的细胞内聚集也容易造成不良反应发生几率增加，如甲氨蝶呤的代谢物多聚谷氨酸甲氨蝶呤，在细胞内蓄积超过一定量可能造成临床不良反应。因此，结合黄芪注射液单次给药的研究，笔者认为临床上应用黄芪注射液辅以RTX化疗应慎重选择，黄芪注射液给药周期的不同将对RTX的体内行为产生显著影响，具体给药 方案 气瓶 现场处置方案 .pdf气瓶 现场处置方案 .doc见习基地管理方案.doc关于群访事件的化解方案建筑工地扬尘治理专项方案下载 值得进一步探索和研究，以减少ADR的发生，提高治疗安全性和治疗效率。 [参考文献] [1] 刘桂兰，冯艳红，侯慧科，等. 吉西他滨联合卡培他滨治疗蒽环类耐药的转移性乳腺癌的临床疗效和安全性分析[J]. 肿瘤药学，2013，3 (5):357. [2] 郑文斌，王春晖，强鸥，等. 塞来昔布联合奥曲肽对人胃癌多药 耐药细胞生长的影响[J]. 癌症， 2004，23(12):1628. [3] 翟林胜，倪海静，王华，等. 联合用药对阿霉素兔体内药动学的 影响[J]. 中国药学杂志， 2002，37(6):441. [4] 龚继芳，张晓东，李洁，等. 吉西他滨为基础的化疗方案治疗进 展期胰腺癌的临床研究E[J]. 癌症， 2007， 26(8):890. [5] Michal G Rose， Michael P Farrell， John C Schmitz.Thymidylate synthase: a critical target for cancer chemotherapy[J]. Clin Colorectal Cancer， 2002，1(4):220. [6] 黄芪注射液联合化疗治疗恶性肿瘤的临床研究[J]. 中国万丽娜，冯刚. 药房， 2009，20(9):703. [7] 邢蓉，周恺，宋佳伟. 黄芪注射液单次给药对雷替曲塞在大鼠体 内药动学研究[J].中国中药杂志， 2013，38(11):1823. [8] Stephen J C， Philip J B， Laurent P R.Clinical and preclinical pharmacokinetics of raltitrexed[J]. Clin Pharmacokinet， 2000，39(5):429. [9] I Judson， T Maughan， P Beale， et al. Effects of impaired renal function on the pharmacokinetics of raltitrexed (Tomudex ZDI 694)[J]. Bri J Cancer， 1998，78(9):1188. [10] Zheng R， Deng Y Y， ChenY P， et al. Astragaloside ? attenuates complement membranous attack complex induced podocyte injury through the MAPK pathway[J]. Phytother Res， 2012，26:892. [11] 周云枫，吴勇，欧阳静萍. 黄芪多糖对2型糖尿病大鼠肾组织 胰岛素信号转导的影响[J]. 武汉大学学报:医学版， 2005，26(2):139. Pharmacokinetics behavior of raltitrexed in rats after repeatedly injected with Huangqi injection XING Rong， QU Biao， SONG Jia-wei， ZHOU Kai， LIAO Qiao (1.The First Affiliated Hospital of Bengbu Medical College， Bengbu 233000， China; 2. The Pharmacy College， Anhui University of Chinese Medicine， China; Hefei 230000， 3. School of Pharmacy， Bengbu Medical College， Bengbu 233000， China) [Abstract] In this study， the variation of pharmacokinetics behavior of raltitrexed(RTX) in rats after repeatedly injected with Huangqi injection was investigated. Twelve SD rats were divided into two groups: the multidose group and the RTX group. Rats in multidose group were iv. injected with Huangqi injection(dose of 1.575 mL?kg-1) everyday at 8 am for a week， and had free accesses for food and water. The rats were fasted for food but not water since 8 h before the eighth day. At the eighth morning， firstly， rats were injected with Huangqi injection(dose of 1.575 mL?kg-1)， and 5 min later， were injected with RTX(dose of 0.467 mg?kg-1); rats in RTX group were not disposed in the previous seven days， also had free accesses for food and water， and were iv. injected with raltitrexed at the same time as Multidose group at the eighth day morning. Rat plasma was collected at different time and processed with methanol to precipitate the protein before HPLC assays. The pharmacokinetics parameters for two groups were calculated by software 3P97. Through the observation of drug concerntration in plasma and time curve， we found that at almost every time point the concerntration of RTX in plasma in multidose group was lower than the RTX group. When comparing the pharmacokinetics parameters between the multidose group and the RTX group， the average of AUC0-t and half-life(t1/2) of multidose group were decreased from 56 080 μg?min?L-1 and 15.07 min to 35 834 μg?min?L-1 and 8.95 min， respectively， while the clearance(CL) was increased from 0.51 to 0.83 mL?h-1. Therefore， it could be deduced that repeatedly injected with AR injection may influence the renal excretion and glycometabolism of RTX， thus change pharmacokinetics behavior of raltitrexed in rats plasma. This result may give us a hint to prudantly manage the drug combination of RTX and Huangqi injection. [Key words] raltitrexed; Huangqi injection; drug-drug interaction; pharmacokinetics doi:10.4268/cjcmm20141139 [责任编辑 陈玲]