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植物体中可溶性糖与可溶性蛋白质含量的测定

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植物体中可溶性糖与可溶性蛋白质含量的测定植物体中可溶性糖与可溶性蛋白质含量的测定 植物体中可溶性糖与可溶性蛋白质含量的 测定 姓名: 指导老师: 摘 要 本实验以苹果、梨、橘子作为实验材料来测定植物体内可溶性糖和可溶性蛋白质的含量。三种水果分别经蒽酮、考马斯亮蓝G-250试剂处理后,在分光光度计的测定下测其吸光度值,从而对照标准曲线计算每种水果的可溶性糖和可溶性蛋白质的含量。 关键词 苹果 梨 橘子 蒽酮 考马斯亮蓝G-250 引 言 糖类物质是构成植物体的重要组成成分之一,也是新陈代谢的主要原料和贮存物质。不同载培条件,不同成熟度都可以影响水果...

植物体中可溶性糖与可溶性蛋白质含量的测定
植物体中可溶性糖与可溶性蛋白质含量的测定 植物体中可溶性糖与可溶性蛋白质含量的 测定 姓名: 指导老师: 摘 要 本实验以苹果、梨、橘子作为实验材料来测定植物体内可溶性糖和可溶性蛋白质的含量。三种水果分别经蒽酮、考马斯亮蓝G-250试剂处理后,在分光光度计的测定下测其吸光度值,从而对照标准曲线计算每种水果的可溶性糖和可溶性蛋白质的含量。 关键词 苹果 梨 橘子 蒽酮 考马斯亮蓝G-250 引 言 糖类物质是构成植物体的重要组成成分之一,也是新陈代谢的主要原料和贮存物质。不同载培条件,不同成熟度都可以影响水果、蔬菜中糖类的含量。因此对水果、蔬菜中可溶性糖的测定,可以了解和鉴定水果、蔬菜品质的高低。植物在个体发育的各个时期代谢活动都发生相应的变化,碳水化合物的代谢也不例外,其含量也随之发生变化,本实验介绍的是蒽酮比色法,糖在硫酸存在下生成糠醛,糠醛再和蒽酮作用形成蓝绿色的缩合物,其颜色的深浅代表着糖含量的高低。 植物体内的可溶性蛋白质大多数是参与各种代谢的酶类,测其含量是了解植物体总代谢的一个重要指标。在研究每一种酶的作用时,常以比活(酶活力单位,mg蛋白)表示酶活力大小及酶制剂纯度。因此,测定植物体内可溶性蛋白质是研究酶活的一个重要项目。考马斯亮蓝G-250测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。考马斯亮蓝G-250在游离态下呈红色,当它与蛋白质的疏水区结合后变为青色,前者最大光吸收在465nm,后者在595nm。在一定蛋白质浓度范围内(0,100μg/ml),蛋白质,色素结合物在595nm波长下的光吸收与蛋白质含量成正比。故可用于蛋白质的定量测定。蛋白质与考马斯亮蓝G-250结合在2min左右的时间内达到平衡,完成反应十分迅速,其结合物在室温下1h内保持稳定。该反应非常灵敏,可测微克级蛋白质含量,所以是一种比较好的蛋白质定量法。 一 可溶性糖含量的测定 1 材料与方法 1.1 材料、仪器与试剂 1.11 材料:苹果 橘子 梨 1.12 仪器:分光光度计 恒温水箱 20ml具塞刻度试管(3支) 漏斗 100ml容量瓶 刻度试管 试管架 剪刀 研钵 等 1.13 试剂: a 200μg/ml标准葡萄糖:AR级葡萄糖100mg,蒸馏水溶解,定容至500ml。 b 蒽酮试剂:1g蒽酮,用乙酸乙酯溶解,定容至50ml,棕色瓶避光处贮藏; c 浓硫酸 1.2方法 a 葡萄糖标准曲线的制作 取 6 支大试管,从 0 , 5 分别编号,按表 24-1 加入各试剂。 表 24-1 蒽酮法测可溶性糖制作标准曲线的试剂量 管 号 试 剂 0 1 2 3 4 5 100 μg/m L 葡萄糖溶液( m L ) 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 蒸馏水( m L ) 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0 蒽酮试剂( m L ) 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 葡萄糖量( μg ) 0 20 40 60 80 100 将各管快速摇动混匀后,在沸水浴中煮 10 min ,取出冷却,在 620 n m 波长下,用空白调零测定光密度,以光密度为纵坐标,含葡萄糖量( μg )为横坐标绘制标准曲线。 b(样品中可溶性糖的提取 称取0.5~1.0克水果,剪碎,置于研钵中,加入少量蒸馏水,研磨成匀浆,然后转入20ml刻度试管中,用10ml蒸馏水分次洗涤研钵,洗液一并转入刻度试管中。置沸水浴中加盖煮沸10分钟,冷却后离心(4000r/min离心20分钟),滤液收集于100ml容量瓶中,用蒸馏水定容至刻度,摇匀备用。 c(糖含量测定 用移液管吸收1.0ml提取液于20ml具塞刻度试管中,加1ml水和0.5ml蒽酮试剂。再缓慢加入5ml浓H2SO4(注意:浓硫酸遇水会产生大量的热~),盖上试管塞后,轻轻摇匀,再置沸水浴中10分钟(比色空白用2ml蒸馏水与0.5ml蒽酮试剂混合,并一同于沸水浴保温10分钟)。冷却至室温后,在波长620nm下比色,记录光密度值。查标准曲线上得知对应的葡萄糖含量(μg)。 (三种水果方法相同,每种水果平行重复2次) 2 结果计算 根据光密度值从标准曲线上查出相应的糖含量,按下列公式计算出样品的含糖量: 溶性糖含量(,),从标准曲线查得糖的量(μg)×提取液体积(ml)×稀释倍数/[测定 6 用样品液的体积(ml)×样品重量(g)×10]×100% 数据处理: 1.3 实验结果及 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 2.植物组织中可溶性糖含量的测定 管号 1 2 3 4 5 6 葡萄糖含量0 20 40 60 80 100 (μg) 吸光值 0 0.102 0.235 0.363 0.489 0.657 实验组 苹果 橘子 梨 吸光值 0.406 0.308 0.713 样品质量 0.6399 0.9952 0.5743 糖含量(mg/g) 0.102 0.051 0.196 二 可溶性蛋白质含量的测定 1 材料与方法 1.1 材料、仪器与试剂 1.11 材料 苹果 橘子 梨 1.12 仪器 分光光度计 分析天平 样品容量瓶 移液管 试管 试管架 剪刀 研钵 1.13 试剂 a 牛血清白蛋白 配成100μg/ml; b 考马斯亮蓝G-250:称取100mg考马斯亮蓝G-250溶于50ml 90%乙醇中,加入85%(W/V) 磷酸100ml,最后用蒸馏水定容至1000ml。此溶液在常温下可放置一个月 c 90%乙醇 d 磷酸(85%,W/V)。 1.2 方法 a 标准曲线的绘制 0,100μg/ml标准曲线的制作 取6支试管,按表28-1数据配制0,100μg/ml血清白蛋白液各1ml。准确吸取所配各管溶液0.1ml,分别放入10ml具塞试管中,加入5ml考马斯亮蓝G-250试剂,盖塞,反转混合数次,放置2min后,在595nm下比色,绘制标准曲线。 表28-1 配制0,100μg/ml血清白蛋白液 管 号 1 2 3 4 5 6 100μg/ml牛血清蛋白量(ml) 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 蒸馏水量(ml) 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0 蛋白质含量(mg) 0 0.02 0.04 0.06 0.08 0.10 b 样品提取液中蛋白质浓度的测定 待测样品制备: 称取0.5~1.0克水果,剪碎,置于研钵中,加入少量蒸馏水,研磨成匀浆,然后转入20ml刻度试管中,用10ml蒸馏水分次洗涤研钵,洗液一并转入刻度试管中。置沸水浴中加盖煮沸10分钟,冷却后离心(4000r/min离心20分钟),滤液收集于100ml容量瓶中,用蒸馏水定容至刻度,摇匀备用。 测定: 另取1支10ml具塞试管,吸取样品提取液1.0Ml,放入具塞试管中,加入5Ml考马斯亮蓝G,250溶液,充分混合,放置2Min后在595nM下比色,记录吸光值,并通过标准曲线查得蛋白质含量。 (三种水果方法相同,每种水果平行重复2次) 2 结果计算 VC,a W 样品蛋白质含量(mg/g鲜重)= 式中 C,查标准曲线所得每管蛋白质含量(mg); V,提取液总体积(ml); a,测定所取提取液体积(ml); W,取样量(g)。 3 实验结果与分析 植物组织中可溶性蛋白质含量的测定 标准曲线管号 0 1 2 3 4 5 蛋白质含量0 20 40 60 80 100 (μg) 吸光值 0 0.082 0.209 0.258 0.376 0.446 实验组 苹果 橘子 梨 吸光值 0.167 0.105 0.130 样品质量(g) 0.5 0.5 0.5 蛋白质含量(mg/g) 0.073 0.045 0.057 三 讨论 根据实验数据可得,在本次试验中梨的可溶性的糖含量最高,苹果次之,橘子的可溶性糖含量最低,可溶性蛋白质的含量中含量最高为苹、梨次之、橘子含量最少。 据研究表明每100克苹果中含糖量在10%,15%之间,是低糖类水果,苹果和梨中含有少量多糖。多糖是水果中一类重要的功能因子, 多糖的免疫调节、抗肿瘤、抗氧化、抑菌、抗病毒和降血糖等生物活性。 苹果和梨都属于低蛋白质水果,蛋白质是细胞中最重要的含氮生物大分子之一,蛋白质含量和种类也是衡量农产品等营养价值的指标之一。在苹果和梨中虽然量比较少但是这两种资源特普遍资源量大我们可以利用相关科学技术提取出蛋白质供人们所利用。
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