金钗石斛试管开花研究

金钗石斛试管开花研究 华南师范大学 硕士学位MATCH_ word word文档格式规范word作业纸小票打印word模板word简历模板免费word简历 _1714166473478_0金钗石斛试管开花研究 姓名:王琳 申请学位级别:硕士 专业:植物学 指导教师:叶庆生 20040601 缩略词 ,，,, ,, ,,,,,,,如〔’，,,,,,,, ,,;,,,,,,,,,, 多效唑,,, ,,,;,,,; ,;,, 脱落酸,一,, ,,,,,,,,,,,,,,, ,(苄基嘌呤,,, ,,,,,,,,,,, ,;,, 赤霉素,,, ,,,,,,,,,,, 噻苯隆,,, ,,,,,,,,,,,,,,;,,,; ,;,, 萘乙酸,诅 ，,,,,,((,((,;,,,; ,;,, 吲哚乙酸, ,,, 天, ,,,, 小时,,, ,,,,,, 分钟,,, ,,,,,, ,,,,;,, ,,,,,,, 十二烷基硫酸钠,,,,, ,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,, 四甲基乙二酸 , 摘要 利用组织培养的方法，研究金钗石斛(,,,,,,,,,, ,,,,,, ,,,,)的试管开花，缩短营养生长向生殖生长转变的时间，探讨花芽分化规律在理论上和应用上都具有重要的意义。 本文研究了,,,,,、,,,、,,,、,,、含氮量和糖浓度等因素对金钗石斛组培苗花芽发生和花发育的影响。研究发现，,,诱导金钗石斛的花芽形成率较低。单独使用,,,处理，花芽形成率最高仅达,,(,,。减少培养基中氮的含量(,,,,氮)，增加磷含量(,倍磷)，同时将糖浓度增加到,,,,,，可使,,,诱导的花芽形成率明显提高，最高约,,(,,。单独使用,,,,,或,,,对 材料 关于××同志的政审材料调查表环保先进个人材料国家普通话测试材料农民专业合作社注销四查四问剖析材料 进行预处理，对,，),诱导花芽形成的影响效果均不明显;若将,,,,,和,,,联合使用，可使花芽数量明显增加，但所形成的花大多数不能正常开放。通过筛选，诱导金钗石斛花芽形成效果最好的培养方法是:以,,,,,附加蔗糖,,,几，琼脂,,几，活性炭,(,,几为基本培养基(,,,(,巧(,)，将组培苗在加有,,,,,,(,,,,,，,,,,(,,,,,的培养基上预培养,,,后，再转入到附加,,,,(,,,,,，,,,,,,(,,,,,的培养基中。,,,,内统计的花芽形成率高达,,(,,。根的修剪对花芽形成有显著影响，这种诱导提早开花的现象通常发生在进行了根修剪的情况中，开花的植株多是接种的小苗基部萌发的幼芽形成的新植株，在其顶端形成单花或具有,,,朵小花的花序。以,,，,,,,(,,,,,，为基本培养基，附加不同浓度的,,,,,，可促使金钗石斛幼苗茁壮生长。在壮苗培养过程中也有花芽形成，但形成率较低。用经过壮苗培养的材料进行处理，在预处理条件及成花诱导条件不变的情况下，花芽形成率和正常花的比率均明显增加，分别达到,,(,,和,,(,,。 以诱导花芽形成效果最佳的 配方 学校职工宿舍分配方案某公司股权分配方案中药治疗痤疮学校教师宿舍分配方案医生绩效二次分配方案 处理的金钗石斛小苗为材料，通过石蜡切片，观察了金钗石斛花芽分化初期形态发育过程，整个过程大致分为,个时期。处理,,,时花芽仍未分化，,,,时将分化，,,,左右逐渐分化出花原基，,,(,,,可观察到萼片原基、花瓣原基、合蕊柱。 以诱导花芽形成效果最佳的培养基作为处理组，同时设置一组对照。通过,,,(聚丙烯酰胺凝胶电泳进行蛋白组分的 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 。,,,的对照组中出现了两个特异性蛋白，分子量为,,,,左右和,,,,左右。,,,的对照组中出现了一个分子量 ,约,,,,的特异性蛋白。,,,对照组中的特异性蛋白分子量约,,,,;处理组中三个特异性蛋白分子量分别为,,,,左右、,,,,左右和,,,,左右。另外，,,,,的处理组中也出现了三个特异性蛋白，分子量分别约为,,,,、,,,,和,,,,。 ,,,,,,,, ,,,, ,,,,,,,,,, ,,,,,, ,,,,, ,, ,, ,,,,,,, ,,,,, ,, ,,,,,,(,, ,,,,, 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,构由表皮、皮层薄壁组织、内皮层、中柱鞘、初生木质部、初生韧皮部及类似于髓部样的组织构成。分生组织区有短小根毛覆盖。正常根的皮层薄壁组织细胞能形成,个由部分细胞壁、网状纤维物质组成的海绵组织，这一特殊结构具有良好的通气性能和吸附、保持水分的能力;生长不正常的根，皮层薄壁组织细胞不能进一步发育，而是迅速腐烂瓦解，以致伤及内皮层，导致根坏死。 张洁等【,,对,种石斛属植物叶表皮微形态的研究发现，,种植物气孔结构和表皮细胞表面雕纹均不相同。金钗石斛的气孔外形呈近圆形，端部较尖;气孔外盖为单层，表面平滑，内缘平整。虽然金钗石斛、鼓槌石斛、霍山石斛、铜皮石斛表皮细胞外壁角质层均有十分明显的条纹凸雕，但金钗石斛的条纹凸雕为细条纹，且排列整齐。其余三种均为粗条纹。 对金钗石斛进行形态解剖学研究，不仅可以为石斛属植物的分类和商品药材鉴别提供依据，而且也可以为金钗石斛的驯化栽培提供科学的依据。,，,栽培与管理 金钗石斛作为中药材，应用历史悠久。药材来源主要依赖于野生资源,”。但金钗对生长环境要求苛刻，在自然条件下繁殖系数低，年生长量不高，加上人为过量采收，野生资源濒临枯竭。为挽救这一濒危资源，对金钗进行人工种植刻不容缓。近年来，我国学者对金钗石斛的人工栽培进行了一些研究，试图通过人工栽培扩大资源，实现濒危资源的可持续利用。 自然生长的金钗石斛，喜生于温暖、湿润、阴凉的环境，常生于有腐殖质聚集的岩石或树干上【,】。对金钗进行大田栽培，重在模拟它们在自然条件下的生长环境。温度、光照、水分等环境因子对金钗石斛生长的影响极为重 要。据记兀 痤未又肿用确?匠擅缟 に 璧奈露龋 话阄 玻埃 常啊保ǎ玻 辜湮露仍嘉 保丁 玻病妫 蕉 露纫 螅保啊保ǎ惨陨稀,痤问舭胍跣灾参铮 耘嗍毙枰 担埃ヒ唬叮埃フ谝酰 惨 蠼细叩目掌 龋 话阆喽允 仍冢叮埃ヒ陨稀,运 值囊 蠛苎细瘢 湫韵彩 螅 峙鹿 嗟乃 种土簦 首詈迷耘嘣谒 殖渥愕 潘 己玫幕肪持校峤痤蔚母 ?对诳掌 校 笊 せ肪乘拇νǚ纭,苑柿系囊 蟛桓撸 ?市枋柿浚 柿瞎 ǚ炊 崾蛊涫苌耍 鹚劳觯穑辍?大田栽培过程中要注意病虫害的防治。常见的病害有石斛黑斑病，石斛煤污病和石斛炭疽病，通常用,,,的多菌灵,,,,倍液，,,,乐果乳剂,,,,倍液或,,,甲基托布津,,,,倍液喷雾等方法防洲…。 金钗为附生兰类，进行无土栽培具有重要意义。李泉森等【,,,分别选用紫色页岩颗粒、砖粒和锯末对金钗石斛进行无土栽培实验，结果表明，以锯末为基质，施以由硝酸钙、硝酸钾、硫酸镁、硫酸钾、磷酸二氢钾氨和多种微量元素组成的营养液，可使金钗生长良好，年产量增加,,(,,一,,,(,,。 金钗石斛自然条件下的繁殖率很低，利用组织培养技术可以进行快速繁殖，短期内提供大量试管苗，是解决种苗的有效途径。用于组织培养的外植体有种子、假鳞茎段、茎节、茎尖等。目前，国内有关于霍山石斛、铁皮石斛组培快繁的技术报道较多，一般是以成熟或未成熟的种子为材料，诱导出原球茎，由原球茎继续扩繁或成苗【,,，,,，,,,。王康正等报道，以种子为外植体对金钗石斛进行培养时，基本培养基以,,、,,培养基最为常用，添加一定种类的植物激素如,,,、,,,以及附加马铃薯浸液、香蕉水浸液等有利于种子的萌发和生长。金钗石斛的种子在无菌培养基上均能够萌发形成试管苗，成苗后要及时的将小苗转移到合适的培养基中进行生根、壮苗培养【,】。 金钗石斛的繁殖方法可采用分株、扦插及埋条法进行苗木繁殖，以分株繁殖较为常用【,,。 栽培方法因目的、用途有所不同。如以观赏花木为目的兼顾药用的，多采用盆栽;如以发展商品药材生产为目的，则采取地栽【,】。,(,药材特性、药用有效成分及药理作用 金钗石斛入药始于《神农本草经》，被列为上品，主要以新鲜或干燥的茎入药【,,】。药材性状主要表现为:茎下部圆柱形，中部及上部扁圆形，稍曲折略呈“之”字状，长,,,,,,,，直径,,,,,,,，节间长,(,,,,,。表面金黄色或绿黄色，基部有光泽，具纵沟及纵纹，节膨大，棕色，节上有互生花序柄及残存膜质叶鞘,质轻而脆，断面较平坦。鲜品茎绿色，质重、味苦。金钗入药性微寒，味甘，归 胃、肾经。中药功效主要为滋养肺胃，清热生津:用于阴伤津亏，口干烦渴，食少干呕，病后虚热，目暗不明【,,】。药材用量一般,一,,克;鲜用,,,,,,克，若 ,,入汤剂，宜先煎制。干品置通风干燥处，防潮:鲜品置阴凉潮湿处，防冻。 金钗石斛的药用成份主要是石斛碱及多糖类物质【,,,。有研究表明，多糖类物质具有增强,细胞及巨噬细胞免疫活性,,,、直接促进淋巴细胞有丝分裂的作用,,,,。传统经验认为质重，嚼之粘牙，昧甘，无渣者为优品，其多糖含量较高【,,,。吴庆生等研究发现，在金钗茎中，多糖含量按从茎稍到茎根自上而下逐渐递减的方式分布【,,,。 金钗茎中含生物碱,(,,,,,(,,,四，其中主要为石斛碱(,,,,,,,,,,)、石斛次碱(,,,,,,,,,,)、,,羟基石斛碱(,一,,,,,,,,;,,,,,,;)等，还含有,种季铵生物碱,,】。曾有报道，金钗石斛也是石斛属植物中唯一含有石斛碱的中药石斛品种,,,,，石斛碱含量在茎的上部,下部,中部，与 药材“梢部最苦”的情况相一致【,,,。 王康正等报道，从金钗中提取的两种菲类化合物，被证明具有抵抗人体肺癌，卵巢癌和前髓细胞白血病的功效,,,。韩国学者也曾报道金钗石斛乙酸乙酯提取物对肿瘤细胞株,(,,,，,,,,,,,，,(,,有显著的细胞毒作用【,,】。此外，金钗的水蒸气蒸馏液(精油成分)可以激活豚鼠离体肠管活动的兴奋性，还对大肠杆菌、枯草杆菌、金黄色葡萄球菌有抑制作用?,。另有研究报道，金钗还有抗疲劳、抗辐射、增强体力、提高人体应激能力、延缓衰老、养颜美发、扩张血管、保护肝脏、治疗白内障等作用〔,，,,,,,。 在植物生长调节剂对金钗石斛药用化学成分的影响方面，陈仕江等(,,,,)的研究表明，用,,,,、,,,两种植物生长调节剂浸根处理金钗石斛，在,,,浓度为,,,,,以及,,,,浓度为,,,,,(时，可使金钗石斛可溶性总糖含量增加，而两种生长调节剂都对石斛碱含量无影响。此外，,,,能显著提高石斛总生物碱的含量陟,。 在金钗石斛的研究方面，我们实验室也做了许多工作。对金钗石斛叶片结构的研究发现:金钗石斛叶片为平行叶脉，上表皮外有角质层，无气孔分布，气孔分布于下表皮。叶片上、下表皮的细胞均为多边形并排列成单层。表皮细胞体积较叶肉细胞要小，排列紧密。表皮之间的叶肉没有海绵组织、栅栏组织分化，胞间隙较小，排列紧密，叶肉细胞呈椭圆形，体积较大，含大量叶绿体。叶片中轴为较粗大的中脉，小叶脉分布在两侧。木质部在主脉维管束的上部，韧皮部在下部，外面被细胞较小且不含叶绿体的维管束鞘包被。维管束无花环结构，与,,植物类似,卅。 在组织培养方面，我们的研究发现，以金钗石斛成熟的茎段作为外植体进行组培快繁，不仅可以保证遗传的稳定性，还可以一年四季随时更新，十分方便。具体方法如:将二年生茎段培养于,,,,,，,,,,(,,,,,，,,,,,,,上，附加,,,香蕉汁,,,,,,,，蔗糖,,,,,，活性炭,(,,,,，可使腋芽萌发。丛生芽的诱导采用附加,(,,,,, ,,和,,,,,蔗糖的,,,,,培养基。,,,,,，,,,,(,,,,,的培养基附加,,,香蕉汁,,,,,,,，蔗糖,,,,,，活性炭,(,,,,有利于丛生芽进一步增殖。成苗培养的培养基以,,，,,,,(,,,,,，,, ,,,,,为最好。试管苗经过驯化后可以移栽到大田中。若将洗净的瓶苗先在阴凉处晾干,,小时，再栽于润湿的水藓中，,,天后开始浇水，一个月后，开始用,,,,的复合肥叶面喷施，每周,次，成活率较高。,，,市场前景 金钗石斛素有“千金草”之称，驰名中外，被国际药用植物界称为“药界大熊猫”，被道家称为中华九大仙草之首。吴道圣曾报道，在列入药典的石斛中，只有金钗石斛才具有主治五脏虚弱赢瘦、强阴益精、久服厚肠胃、定志除惊、轻身延年、健阳、补肾益力、壮筋骨等功效,,,,。据调查，目前国内市场售价为,,,,元，克。以金钗石斛正气处方为配本，相继推出了石斛夜光丸、石斛明目丸、石斛浸膏溶液、石斛清胃散等产品，对咽喉疾病、肠胃疾病、白内障、心血管疾病、糖尿病有显著疗效，受至?我国成千上万咽喉炎、气管炎患者，肺癌患者、近视眼患者、,,,,多万糖尿病患者、,千多万教师队伍及,亿多烟民的喜爱，同时在东南亚一带，日本、韩国、美国等也有广阔的市场。成为世界各国人们防病、治病、医疗保健的极品良药。除此之外。金钗石斛还可以用作母本，和其它种类的春石斛进行杂交。培育出来的杂交种具有花朵更大、更艳丽的特点，观赏价值更高，许多已被引种到世界各地作盆栽花卉。由此可见，对金钗石斛进行人工种植和加工有着巨大的市场空间和广阔的 开发利用前景。,兰科植物试管开花国内外研究进展 花的形成是高等植物所特有的一种生理现象。在多数情况中，植物必须达到某种成熟阶段才能开始花的形成。开花的研究主要包括三个方面:(,)成花转变，即植物由营养生长转向生殖生长状态，包括外界条件(光、温、水、肥等)及内部状况(植株年龄、激素平衡等)的影响及其相互间的作用。(,)同源异型基因，即控制花器官发育顺序及空间排列的基因，及其克隆和定位。(,)成花逆转，即植物由生殖生长状态转向营养生长状态,,,,。 ,,,,,(,,,,)利用植物组织培养技术将兰花茎尖分生组织诱导形成原球茎并分化成植株，导致兰花栽培技术变革，建立了兰花工业【郸,,。 利用组织培养的方法，建立兰花的快速无性繁殖系，可以诱导出试管兰花一年四季都有花蕾形成，对进一步研究高等植物的开花过程，阐明其调控机理，提供了有益的参考。 法国的,,,,,, ,,,,,,,,,最早进行了兰科植物的试管开花研究，发现缺少菌根时可以促进兰花的开花【,,】。 随后，,,,等人对单茎型杂种兰花(,,,,,, ,,,,,,,)进行研究，发现，,,对花芽的形成有抑制作用，而,,,,不仅促进花芽发端而且促使花芽发育成熟并开花【,,,,,,。 ,,,,和,,,,,,(,,,,)研究了,,,,,,,, ,,,,(:,屠兰属,,,,,,, ,,,;,,,,,,,×,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,,,)的试管开花，观察到在无糖的,,;,, ,,,,培养基以及,,,,,,,培养基中，,,均不能诱导花芽的形成。如果先用,,处理，诱导出花芽，再将形成花芽的小植株转瓶培养在不含,,的,,;,, ,,,,培养基中，花芽可以正常开放;但如果,,;,, ,,,,培养基中含有,,或转瓶到,,,,,,,培养基中，花芽不能正常开放，很快枯萎,？。此外，在研究中他们还发现，除了细胞分裂素,,能诱导,,,,,,, ,,,,的花芽形成之外，蔗糖浓度、营养水平及其之间的配比也对,,,,,,,, ,,,,的花芽形成有影响。在不含,,的培养基中，蔗糖浓度为,,,,,时，不能诱导花芽形成;若培养基中含有,,，蔗糖浓度偏高(,,,,,)或蔗糖浓度偏低(,,,,,)也不能诱导花芽的形成;在培养过程中，减少,,培养基中氮的含量或提高氨态氮与硝态氮的比值(,,,(,,,,,一,)，有利于花芽的形成【,,】。之后，,,,,和,,,,,,(,,,,)又对蝴蝶兰,,,,,,,,,,,,进行研究，发现将,,,,,,,,,,,,的花茎节间的不定芽培养在含,,的,,,,,,,的培养基中，之后继代在含,,的,,;,,,,,,,培养基中，苗龄为,个月的小苗，,,,以上有花芽形成，,,,的花芽开花。虽然春化作用诱导其它植物开花的报道较多，但低温似乎不能诱导,,,,,,,,,,,,试管开花【,,,。 ,,,,,,,,,进行了,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,,,,, ,,,试管开花研究，结果表明,,,本身不诱导开花。而生长素抑制剂,，,，,(三碘苯甲酸抑制开花;高浓度的,,延缓开花，,,,(抗,,剂)完全抑制细胞分裂素诱导开花的作用。此外，在研究中还发现使用,,的同时，进行氮、磷含量的调节(增加,，减少,)以及修剪根，,,,,,,,,,开花率可高达,,(,,;但如果仅调节氮、磷的含量，或只进行根修剪，开花率则很低【,,,。 ,,,,,,,于,,,,年报道同一种的,,,,,,,,杂种兰花，诱导其开花的光周期反应会因温度变化的影响而表现不同【,,，,,,。另外，还有研究报道，附加物赖氨酸【,,,，六氢吡 啶羧酸【,,】和高铁氰化物【,,,都有促进开花的作用。 王熊利用建兰(大一白)建立了快速无性繁殖系，并发现试管幼苗的开花现象〔,,,。,,,,年，他重新建立了秋兰和春兰的快速无性繁殖系，并初步开始探讨花芽的分化规律，,,,,年的研究发现秋兰无性繁殖系能形成花器官，附加,,,,,,,,,，,,,,(,,,，,的培养基对诱导花芽分化有良好的作用，形成的花芽均可以正常开放，从小植株形成到花朵开放最短只需,个月。盆栽秋兰新发生的芽需二年才开花，但试管兰花一年四季都有花蕾形成,,,】。在此之前用组织培养的方法研究诱导兰花花芽发端并发育成开花植株，在国内尚未见有报道。 之后，王熊等人(,,,,)又对素心建兰进行了研究，并成功诱导出素心建兰的试管开花【“。 王光远等对铁皮石斛花芽形成的研究发现，在兰花的离体条件下，,,,对诱导花芽形成有明显影响。如果将铁皮石斛原球茎先在附加,,,,(,,,,,的培养基上预培养,,,，再转入含,,,,,,,,(的,,培养基上培养，花芽形成频率明显 ,,提高，可达,,(,,，而且每株植株花的数目增加。但是在仅含,,,的,,培养基上培养的原球茎再生植株，很难有花芽形成〔,,,。,,,,年，王光远等对铁皮石斛的离体开花进行进一步的研究，结果表明，将铁皮石斛组培苗在,,，亚精胺,,,,,,,上培养,个月，成花频率可达,,(,,，花芽通常着生在顶端，开花可持续约,,,，花的形态正常，并能产生正常的花粉;若在,,培养基中附加,(,,,，,,,,和,(, ,,,,,,,也可以促进成花，平均频率,,(,,，但形成的花芽通常不正常，也不能正常开放【柏】。此外，在研究中还观察到以不同材料作为处理，对花芽形成也有不同的影响。当以原球茎作为起始材料时，形成的小植株较小，但花芽出现的时间较早(,,,);当以无根小苗作为起始材料时，至少要,个月才能形成花，花芽形成频率低于原球茎或与之相仿;当以完整小植株作为起始材料时，形成花芽所需的时间最长，成花频率也最低〔,,,。 温云飞等(,,,,)研究了霍山石斛的快速繁殖和花芽诱导，发现在,,培养基中加入,，,(,,(,,,,,和,,,(,,,,,可诱导出花芽数较多的正常花芽，然后再将霍山石斛小苗转入,,，香蕉提取物,,,,,的无激素培养基上，花芽大多可以正常开放。另外，在,,培养基中附加,，,一, ,(,,,,,和,,,, ,(,,,,,也可以促进成花，但形成的花花形巨大，花萼异常粗壮，约是正常花的,(,倍(“。 在此之前，我们实验室也做了霍山石斛的试管开花工作，研究了,,,、,,、糖浓度、低温处理、含氮量、转瓶时间对霍山石斛组培菌花芽形成的影响。研究发现，,,诱导霍山石斛花芽形成率较低，小苗有褐化现象。低浓度,,,诱导的花芽多为顶生单花，高浓度,,,诱导的花芽多为总状花序。诱导霍山石斛组培苗的最佳培养条件为:减少,,培养基中氮含量(,,,氮)，增加磷含量(,倍磷)，糖浓度提高到,,,,,，同时附加,,,,(,,,,,,。,个月内最高诱导率约在,,,,生右。花芽形成的植株不是最初接种的小苗，而是从小苗基部分生出来的侧枝，花芽多顶生，在叶腋间也有花芽发生。诱导的花芽大多数不能正常开放，但如果将小苗在诱导花芽发生的培养基培养一段时间后，再转入到无激素的,,培养基中，可提高花芽的正常开放率【,…。 花的发育是一个复杂的生理现象，虽.