五日生化需氧量的测定(1)
生化需氧量是指在规定条件下,微生物分解存在于水中的某些可氧化物质,主要是有
机物质所进行的生物化学过程中消耗溶解氧的量。分别测定水样培养前的溶解氧含量和在
20?1?培养五天后的溶解氧含量,二者之差即为五日生化过程所消耗的氧量(BOD)。 5
对于某些地面水及大多数工业废水、生活污水,因含较多的有机物,需要稀释后再培
养测定,以降低其浓度,保证降解过程在有足够溶解氧的条件下进行。其具体水样稀释倍数
可借助于高锰酸钾指数或化学需氧量(COD)推算。 Cr
对于不含或少含微生物的工业废水,在测定BOD时应进行接种,以引入能分解废水中5有机物的微生物。当废水中存在难于被一般生活污水中的微生物以正常速度降解的有机物或
含有剧毒物质时,应接种经过驯化的微生物。
1.恒温培养箱。
2.5—20L细口玻璃瓶。
3.1000—2000mL量筒。
4.玻璃搅棒:棒长应比所用量筒高度长20cm。在棒的底端固定一个直径比量筒直径略小,并带有几个小孔的硬橡胶板。
5.溶解氧瓶:200—300mL,带有磨口玻璃塞并具有供水封用的钟形口。
6.虹吸管:供分取水样和添加稀释水用。
1.磷酸盐缓冲溶液:将8.5g磷酸二氢钾(KH
PO),21.75g磷酸氢二钾(KHPO),2424
33.4g磷酸氢二钠(NaHPO?7HO)和1.7g氯化铵(NHCl)溶于水中,稀释至1000mL。此2424溶液的pH应为7.2。
2.硫酸镁溶液:将22.5g硫酸镁(MgSO?7HO)溶于水中,稀释至1000mL。 42
3.氯化钙溶液:将27.5g无水氯化钙溶于水,稀释至1000mL。 ?6HO)溶于水,稀释至1000mL。 32
4.氯化铁溶液:将0.25g氯化铁(FeCl5.盐酸溶液(0.5mol/L):将40mL(ρ=1.18g/mL)盐酸溶于水,稀释至100mL。
6.氢氧化钠溶液(0.5mol/L):将20g氢氧化钠溶于水,稀释至1000mL。
7.亚硫酸钠溶液(1/2NaSO=0.025mol/L):将1.575g亚硫酸钠溶于水,稀释至1000mL。23
此溶液不稳定,需每天配制。
8.葡萄糖-谷氨酸标准溶液:将葡萄糖(CHO)和谷氨酸(HOOC—CH—CH—CHNH—6126222COOH)在103?干燥1h后,各称取150mg溶于水中,移入1000mL容量瓶内并稀释至标线,混合均匀。此标准溶液临用前配制。
9.稀释水:在5—20L玻璃瓶内装入一定量的水,控制水温在20?左右。然后用无油空气压缩机或薄膜泵,将此水暴气2—8h,使水中的溶解氧接近于饱和,也可以鼓入适量纯氧。
瓶口盖以两层经洗涤晾干的纱布,置于20?培养箱中放置数小时,使水中溶解氧含量达
8mg/L左右。临用前于每升水中加入氯化钙溶液、氯化铁溶液、硫酸镁溶液、磷酸盐缓冲溶
液各1mL,并混合均匀。
稀释水的pH值应为7.2,其BOD应小于0.2mg/L。 5
10.接种液:可选用以下任一方法,以获得适用的接种液。
(1)城市污水,一般采用生活污水,在室温下放置一昼夜,取上层清液供用。
(2)表层土壤浸出液,取100g花园土壤或植物生长土壤,加入1L水,混合并静置10min,取上清液供用。
(3)用含城市污水的河水或湖水。
(4)污水处理厂的出水。
(5)当
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含有难于降解物质的废水时,在排污口下游3—8km处取水样做为废水的驯化接种液。如无此种水源,可取中和或经适当稀释后的废水进行连续暴气、每天加入少量
该种废水,同时加入适量表层土壤或生活污水,使能适应该种废水的微生物大量繁殖。当水
中出现大量絮状物,或检查其化学需氧量的降低值出现突变时,表明适用的微生物已进行繁
殖,可用做接种液。一般驯化过程需要3—8d。
11.接种稀释水:取适量接种液,加于稀释水中,混匀。每升稀释水中接种液加入量生
活污水为1—10mL;表层土壤浸出液为20—30mL;河水、湖水为10—100mL。
值以在0.3—1.0mg/L之间为宜。接种稀释水配制后5
接种稀释水的pH值应为7.2,BOD应立即使用。
1.水样的预处理
(1)水样的pH值若超出6.5—7.5范围时,可用盐酸或氢氧化钠稀溶液调节至近于7,
但用量不要超过水样体积的0.5%。若水样的酸度或碱度很高,可改用高浓度的碱或酸液进
行中和。
(2)水样中含有铜、铅、锌、镉、铬、砷、氰等有毒物质时,可使用经驯化的微生物
接种液的稀释水进行稀释,或增大稀释倍数,以减小毒物的浓度。
(3)含有少量游离氯的水样,一般放置1—2h,游离氯即可消失。对于游离氯在短时间不能消散的水样,可加入亚硫酸钠溶液,以除去之。其加入量的计算方法是:取中和好的
水样100mL,加入1+1乙酸10mL,10%(m/V)碘化钾溶液1mL,混匀。以淀粉溶液为指示剂,用亚硫酸钠标准溶液滴定游离碘。根据亚硫酸钠标准溶液消耗的体积及其浓度,计算水
样中所需加亚硫酸钠溶液的量。
(4)从水温较低的水域中采集的水样,可遇到含有过饱和溶解氧,此时应将水样迅速
升温至20?左右,充分振摇,以赶出过饱和的溶解氧。
从水温较高的水域或废水排放口取得的水样,则应迅速使其冷却至20?左右,并充分振摇,使与空气中氧分压接近平衡。
2.水样的测定
(1)不经稀释水样的测定:溶解氧含量较高、有机物含量较少的地面水,可不经稀释,
而直接以虹吸法将约20?的混匀水样转移至两个溶解氧瓶内,转移过程中应注意不使其产
生气泡。以同样的操作使两个溶解氧瓶充满水样,加塞水封。
立即测定其中一瓶溶解氧。将另一瓶放入培养箱中,在20?1?培养5d后。测其溶解氧。
(2)需经稀释水样的测定
稀释倍数的确定:地面水可由测得的高锰酸盐指数乘以适当的系数求出稀释倍数(见
下表)。
工业废水可由重铬酸钾法测得的COD值确定。通常需作三个稀释比,即使用稀释水时,
由COD值分别乘以系数0.075、0.15、0.225,即获得三个稀释倍数;使用接种稀释水时,
则分别乘以0.075、0.15和0.25,获得三个稀释倍数。
稀释倍数确定后按下法之一测定水样。
?一般稀释法:按照选定的稀释比例,用虹吸法沿筒壁先引入部分稀释水(或接种稀
释水)于1000mL量筒中,加入需要量的均匀水样,再引入稀释水(或接种稀释水)至800mL,用带胶板的玻璃棒小心上下搅匀。搅拌时勿使搅棒的胶板露出水面,防止产生气泡。
按不经稀释水样的测定步骤,进行装瓶,测定当天溶解氧和培养5d后的溶解氧含量。
另取两个溶解氧瓶,用虹吸法装满稀释水(或接种稀释水)作为空白,分别测定5d前、后的溶解氧含量。
?直接稀释法:直接稀释法是在溶解氧瓶内直接稀释。在已知两个容积相同(其差小
于1mL)的溶解氧瓶内,用虹吸法加入部分稀释水(或接种稀释水),再加入根据瓶容积和
稀释比例计算出的水样量,然后引入稀释水(或接种稀释水)至刚好充满,加塞,勿留气泡
于瓶内。其余操作与上述稀释法相同。
在BOD
测定中,一般采用叠氮化钠改良法测定溶解氧。如遇干扰物质,应根据具体情5
况采用其他测定法。溶解氧的测定方法附后。
1.不经稀释直接培养的水样 (mg/L)=c-c 512
BOD式中:c——水样在培养前的溶解氧浓度(mg/L); 1
c——水样经5d培养后,剩余溶解氧浓度(mg/L)。 2
2.经稀释后培养的水样
式中:B——稀释水(或接种稀释水)在培养前的溶解氧浓度(mg/L); 1
B——稀释水(或接种稀释水)在培养后的溶解氧浓度(mg/L); 2
f——稀释水(或接种稀释水)在培养液中所占比例; 1
f——水样在培养液中所占比例。 2
1.测定一般水样的BOD时,硝化作用很不明显或根本不发生。但对于生物处理池出水,5
则含有大量硝化细菌。因此,在测定BOD时也包括了部分含氮化合物的需氧量。对于这种5
水样,如只需测定有机物的需氧量,应加入硝化抑制剂,如丙稀基硫脲(ATU,CHNS)等。 422
2.在两个或三个稀释比的样品中,凡消耗溶解氧大于2mg/L和剩余溶解氧大于1mg/L
都有效,计算结果时,应取平均值。
3.为检查稀释水和接种液的质量,以及化验人员的操作技术,可将20mL葡萄糖-谷氨
酸标准溶液用接种稀释水稀释至1000mL,测其BOD,其结果应在180—230mg/L之间。否则,5
应检查接种液、稀释水或操作技术是否存在问题。
碘量法测定水中溶解氧
水样中加入硫酸锰和碱性碘化钾,水中溶解氧将低价锰氧化成高价锰,生成四价锰的
氢氧化物棕色沉淀。加酸后,氢氧化物沉淀溶解,并与碘离子反应而释放出游离碘。以淀粉
为指示剂,用硫代硫酸钠标准溶液滴定释放出的碘,据滴定溶液消耗量计算溶解氧含量。
?4HO)溶于水,用水稀释至1000mL。此溶42
液加至酸化过的碘化钾溶液中,遇淀粉不得产生蓝色。 1.硫酸锰溶液:称取480g硫酸锰(MnSO
2.碱性碘化钾溶液:称取500g氢氧化钠溶解于300—400mL水中;另称取150g碘化钾溶于200mL水中,待氢氧化钠溶液冷却后,将两溶液合并,混匀,用水稀释至1000mL。如有沉淀,则放置过夜后,倾出上层清液,贮于棕色瓶中,用橡皮塞塞紧,避光保存。此溶液
酸化后,遇淀粉应不呈蓝色。
3.1+5硫酸溶液。
4.1%(m/V)淀粉溶液:称取1g可溶性淀粉,用少量水调成糊状,再用刚煮沸的水稀
释至100mL。冷却后,加入0.1g水杨酸或0.4g氯化锌防腐。
5.0.02500mol/L(1/6K
CrO)重铬酸钾标准溶液:称取于105—110?烘干2h,并冷227
却的重铬酸钾1.2258g,溶于水,移入1000mL容量瓶中,用水稀释至标线,摇匀。
6.硫代硫酸钠溶液:称取6.2g硫代硫酸钠(NaSO?5HO)溶于煮沸放冷的水中,加2232
0.2g碳酸钠,用水稀释至1000mL,贮于棕色瓶中,使用前用0.02500mol/L重铬酸钾标准溶液标定。
7.硫酸,ρ=1.84。
1.溶解氧的固定:用吸液管插入溶解氧瓶的液面下,加入1mL硫酸锰溶液,2mL碱性碘化钾溶液,盖好瓶塞,颠倒混合数次,静置。一般在取样现场固定。
2.打开瓶塞,立即用吸管插入液面下加入2.0mL硫酸。盖好瓶塞,颠倒混合摇匀,至
沉淀物全部溶解,放于暗处静置5min。
3.吸取100.00mL上述溶液于250mL锥形瓶中,用硫代硫酸钠标准溶液滴定至溶液呈淡
黄色,加入1mL淀粉溶液,继续滴定至蓝色刚好退去,记录硫代硫酸钠溶液用量。
式中:M——硫代硫酸钠标准溶液的浓度(mol/L);
V——滴定消耗硫代硫酸钠标准溶液体积(mL)。
1.当水样中含有亚硝酸盐时会干扰测定,可加入叠氮化钠使水中的亚硝酸盐分解而消
除干扰。其加入方法是预先将叠氮化钠加入碱性碘化钾溶液中。
3+达100—200mg/L时,可加入1mL40%氟化钾溶液消除干扰。 2.如水样中含Fe
3.如水样中含氧化性物质(如游离氯等),应预先加入相当量的硫代硫酸钠去除。