人血小板抗体测定法
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本法系采用血小板与血小板抗体结合后，使血小板发生凝集的原理。通过比较凝集反应
终点测定供试品中人血小板抗体效价。
（1）5%乙二胺四乙酸二钠（EDTA）抗凝剂 取磷酸氢二钠（NaHPO?12HO）242
0.365g、磷酸二氢钾0.875g、氯化钠2.125g 、乙二胺四乙酸二钠（EDTA_Na?2HO）12.5g，22
加水溶解并稀释至250ml。
（2）0.33% EDTA溶液 称取磷酸氢二钠（NaHPO?12HO）0.73g、磷酸二氢钾1.75g、242
氯化钠4.25g、乙二胺四乙酸二钠（EDTA_Na?2HO）1.65g、加水溶解并稀释至500ml。 22
（3）血小板稀释液 取3人份以上AB型血清混合，56? 灭能30分钟，按AB型血清每100ml加硫酸钡50g的比例加入硫酸钡，置37?吸附1小时，随时搅动，然后以每分
钟3000转离心30分钟，弃去沉淀，吸上清液备用。
试验当天按1份血清加3份生理氯化钠溶液配成血小板稀释液(注意AB型血清中不得混有红细胞及溶血)。
（4）血小板悬液的制备 采集人静脉血20ml,按5% EDTA溶液与全血以1?9的比例混合,在20?以每分钟 800转离心15分钟，取上层血浆加0.33% EDTA溶液至原全血体积,于20?每分钟 1500转离心10分钟,弃去上清液,如此再重复用0.33% EDTA洗涤2次,弃上清液，向沉淀中加血小板稀释液0.5ml，混匀，计数并将血小板浓度调至2.5-3.5x1053/mm即可(注意：计数时血小板悬液应在计数板上静置2～3分钟，并在10分钟内计数完)。
用生理氯化钠溶液将供试品进行2倍系列稀释至1?16。
取经人血小板免疫的猪血浆（或兔血清）0.5ml 60?灭能10分钟,用硫酸钡0.05g于37?吸附15分钟后，以每分钟3000转离心20分钟,取上清液备用。 阴性对照溶液生理氯化钠溶液及血小板稀释液。
取不同稀释度供试品溶液各0.1ml,分别加血小板悬液0.1ml,在37?保温30分钟后,滴到计数板上,静置2～3分钟,在20～40倍显微镜下观察结果。本试验同时设阴性、
阳性对照组。
（1）阳性对照 取阳性对照溶液0.1ml，自“加血小板悬液0.1ml”起，同法操作。 （2）阴性对照 取阴性对照溶液0.1ml，自“加血小板悬液0.1ml”起，同法操作。
阳性对照为“++”；阴性对照为“-”；试验成立。以“+”为判定终点，即以供试品出现“+”的最高稀释度为该供试品的血小板抗体效价。
【附注】（1）“-”无凝块或偶见2～3个血小板成串。
（2）“+”小凝块，3～5个血小板凝集，游离血小板少。
（3）“++”大凝块，6个以上血小板聚集，几乎无游离血小板。
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