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重楼皂苷的两种分离工艺及其联用效果的比较

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重楼皂苷的两种分离工艺及其联用效果的比较重楼皂苷的两种分离工艺及其联用效果的比较 重楼皂苷的两种分离工艺及其联用效果的 比较 华 W 西 C 药 J 学 ~ 杂 P 志 S2()o8.23(6):672674 腹部,以排净膀胱中尿液,然后按0.02ml?g体重 给药.按组别ig给予1mg?ml,24一乙酰泽泻醇A 混悬液,0.25mg?ml双氢氯噻嗪,生理盐水.给药 毕,立即将大鼠分别放入代谢笼中,收集尿液,记录 给药后3组大鼠的平均排尿量(表5). 表524一乙酰泽泻醇A对大鼠尿量和尿中离子排出量的影响 Table5Effec...

重楼皂苷的两种分离工艺及其联用效果的比较
重楼皂苷的两种分离工艺及其联用效果的比较 重楼皂苷的两种分离工艺及其联用效果的 比较 华 W 西 C 药 J 学 ~ 杂 P 志 S2()o8.23(6):672674 腹部,以排净膀胱中尿液,然后按0.02ml?g体重 给药.按组别ig给予1mg?ml,24一乙酰泽泻醇A 混悬液,0.25mg?ml双氢氯噻嗪,生理盐水.给药 毕,立即将大鼠分别放入代谢笼中,收集尿液,记录 给药后3组大鼠的平均排尿量(表5). 表524一乙酰泽泻醇A对大鼠尿量和尿中离子排出量的影响 Table5EffectsofalisolA24一monoacetate011uricquantityandonionintheurineofrats ComparedwithNSgroup:P<0.05 1.3.3尿中Na,K的测定尿液中Na,K经 火焰激发后,可发出特异的光谱.钠波长为589 nm,钾波长为767Ilm,溶液中金属离子浓度越高,发 射光谱愈强.火焰光度计利用光电管及检流计测定 光的强度,被测离子的浓度与检流计读数成正比. 测定尿钠时,精密吸取0.2ml尿样,加9.8ml去离 子水;测定尿钾时,精密吸取0.5ml尿样,加9.5ml 去离子水.检测稀释后的尿样并计算.尿样中浓度 =C.×A/A.×稀释倍数.式中,C.为标准液中 Na,K的浓度,A.为标准液的读数,A为尿样的 读数.由尿中浓度的计算可知,乙酰泽泻醇A的利 尿效果不及双氢氯噻嗪,但利尿的作用机制二者均 为促进排钠利尿,同时也可增加排钾的作用. 2讨论 从结果可以看出,泽泻醇提物,水提物,24一乙 酰泽泻醇A均有利尿作用,泽泻醇提物和24一乙酰 泽泻醇A的利尿作用无显着性差异.说明至少 24一乙酰泽泻醇A是泽泻利尿的活性成分之一,可 以作为泽泻药材质量评价的成分;泽泻水提物也有 利尿作用,曾经用HPLC法比较水提物和醇提物的 指纹图谱,发现水提物中几乎不含醇提物中所含有 的泽泻醇类成分,说明其水提物的利尿作用几乎与 泽泻醇类无关;从泽泻微量元素的分析结果可初步 推绎出正品泽泻的含钾量较高,也可能是泽泻利 尿的成分之一. 参考文献: [1]中华人民共和国国家药典委员会.中国药典[SJ.一部.北京: 化学工业出版社,2005.158. [2]国家中医药管理局《中华本草》编委会.中华本草(精选本下 :上海科技出版社,1998.1993—1998. 册)[M].上海 [3吴启南.中药泽泻微量元素的研究[J].世界元素医学,2003. 10(2):48—49. 收稿日期:2007—12 重楼皂苷的两种分离工艺及其联用效果的比较 兰洁,杨明,王瑾 (成都中医药大学药学院,四川成都611130) 摘要:目的比较重楼皂苷的泡沫分离工艺与优化后的大孔树脂分离工艺.方法以重 楼皂苷的纯度,回收率,纯度比,工 时,能耗,操作难易等为评价指标,综合比较泡沫,大孔树脂的分离工艺,并结合两者 优势进行工艺的联用.结果从成本,环 保,操作难易分析,泡沫分离工艺优于大孔树脂;从分离效果看,前者亦高于后者,但 回收率低于后者.将两种工艺联用,可显 着提高回收率.结论泡沫分离工艺可作为一种操作单元分离纯化重楼皂苷,具有较 好的富集,分离效果,工艺简单,环保, 成本也低. 关键词:重楼皂苷;泡沫分离;大孔树脂;工艺比较;工艺联用 中图分类号:R284文献标识码:A文章编号:1006—0103(2008)06—0672—03 基金项目:国家"十五"科技攻关重点项目(2004BA721A43) 作者简介:兰洁(1982一),女,四川崇州,正攻读中药制剂专业的硕士学位.E— mail:jane—blue77@yahoo.corn.cn 通讯作者(Corespondentauthor),E—mail:yangmingl6@126.con 第6期兰洁,等.重楼皂苷的两种分离工艺及其联用效果的比较673 Comparisonandcombinationoftwoseparationandpurificationcraftsforpolyphyllinfrom RllizomaParidis LANJie,YANGMing,WANGJin (SchoolofPharmacy,ChengduUniversit)TraditionalChineseMedicine,Chengdu611130,China) Abstract:OBJECTIVETocomparethefoamfractionationcraftwiththeoptimalmacroporousadsorptionresincraftforpolyphyl— lins,estimatethecharactersoffoamfractionation.METHODSPurityofpolyphyllin,recoveryofpolyphyllin,purityratio,working hour,costanddifficultyofoperationwerechosenastheperformancecriteria.Madeacomprehensivecomparisonoffoamfractionation craftandmacroporousadsorptionresincraft,andtriedtocombinethetwocraftsbyconsiderin gtheiradvantages.RESULTSFoam fractionationhadsomeadvantagesovermacroporousadsorptionresin.Thefoamfractionati oncouldgetmorepureproducthoweverlower recoverythanmacroporousadsorptionresin.Combinationoftwoprocesscouldincreaserec overygreatly.CONCLUSIONFoamfrac— tionationcraftcanbeusedasaoperationunittoseparatepolyphyllins.Ithasgoodenrichmenta ndseparationeffect.Theprocessisa simple,low—costingandenvironmental— protectingcraft,whichoffersanewmethodfortheseparationofsteroidalsaponinsinRhizom a Paridis.? Keywords:Polyphyllins;Foamfractionation;Macroporousadsorptionresin;Craftcompari son;Craftcombination CLCnumber:R284Documentcode:AArticleID:1006—0103(2008)06—0672—03 泡沫分离技术是根据表面吸附的原理,借助鼓 泡使溶液中的表面活性物质聚集在气/液界面处,再 随气泡上浮至溶液主体上方,形成泡沫层,将泡沫和 液相主体分开,达到浓缩表面活性物质(在泡沫 层),净化液相主体的目的…. 泡沫分离技术具有分离效果好,能耗低(可在 常温和低温下分离),设备简便价廉且可连续操作; 投资小,运行成本低,还能在低浓度下除去表面活性 物质等优点.其分离过程无需使用任何有机试剂, 安全而环保. 重楼的主要有效成分重楼皂苷具有很强的生理 和药理活性.'j.其分离方法有正丁醇萃取法,大孔 吸附树脂法,膜分离法,色谱法等,,但均存在有 机试剂消耗量大,环境污染严重,分离效果不佳,树 脂再生和膜堵塞等问题.因此,作者在文献'的 基础上,比较了重楼皂苷的泡沫分离工艺与经优化 的大孔树脂分离工艺,可客观地评价重楼的泡沫分 离工艺.将两种分离技术联用,可提高回收率. 1实验部分 1.1材料与仪器 重楼饮片(四JII德仁堂中药饮片公司)经鉴定 为七叶一枝花的干燥根茎,符合《中国药典)2005年 版的要求,按干燥品计算,重楼皂苷I,?的总量> 0.8%;薯蓣皂苷元(中国药品生物制品检定所,供 含量测定用,批号:1539—200001,含量>99.5%); 试剂均为分析纯;水为纯水;大孔树脂D101\HP一 10\LsA一8\LSA一20\LSA一21\AB一8(西安蓝晓 科技公司).uV一1700紫外分光光度计(日本岛 津);TDL一5型离心机(上海安亭科学仪器厂); RE一52C旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂);泡沫 分离塔(自制). 1.2方法与结果 1.2.1两种工艺的提取结果称取300g重楼饮 片,加70%乙醇回流提取(2h×3),合并提取液,过 滤,量取10L重楼醇提取液,回收乙醇,得到约3L 浓缩液.量取1.5L浓缩液,5×10r?rain离心20 rain,取1.2L上清液作为原料液,以2BV?h吸附, 通过200gD101大孔树脂柱(4.5cm×16am),用3 倍量水洗至无色,再用5倍量70%乙醇洗脱,收集 洗脱液,测定总皂苷,固形物的含量,计算回收率和 纯度.另取1.5L浓缩液,5×10r?min离心20 rain,取上清液,加水稀释6倍,得到原料液,量取 7.2L进行泡沫分离,原料液在4Occ恒温(pH7),气 流速度为400ml?rain'.,进料高度为30am,回流速 度为4,200L?h...分别移取25ml或50ml泡 沫液,残留液和醇洗脱液,置已恒重的蒸发皿中,水 浴挥干,再置105%烘箱中烘干.分别移取l0ml原 料液,泡沫液和洗脱液,用水饱和正丁醇萃取 (10ml×4),合并萃取液,挥干溶剂,残渣用95%乙 醇溶解,转移至25ml量瓶中,定容,即得样品溶液. 精密移取200l上述样品溶液,于10ml空白试管 中,挥干溶剂,加入5m1高氯酸显色,摇匀,于65~C 水浴中恒温15min,取出,冰水浴中冷却2min,在 407nm处测得吸光度(A).通过回归方程计算得到 总皂苷的含量,并计算纯度,纯度比,回收率. 从产品纯度,回收率,工时,乙醇用量,耗材,操 作难易等方面综合比较两种工艺(表1).同时,对 两种工艺的产品纯度,回收率和纯度比进行t检验, 均有显着性差异.从产品纯度上看,泡沫分离工艺 674华西药学杂志第23卷 高于大孔树脂工艺,但回收率较低(<50%).从成 本方面分析,泡沫分离工艺远低于大孑L树脂工艺,只 需少量水和电能.在环保和安全方面,泡沫分离工 艺也很有优势,为物理分离过程,安全无污染.从操 作方面分析,泡沫分离工艺简单,易控,可实现自动 化操作,得到的泡沫液直接干燥即可收集产品.而 大孔树脂工艺步骤较多,树脂需预处理;树脂柱容易 堵塞;洗脱液必须回收乙醇后才能干燥制成产品,耗 时;同时,涉及树脂再生和有机溶剂残留的问题. 表1工艺对比实验结果 Table1Resultsofcomparisonexperiment 1.2.3工艺联用的提取结果称取100g重楼饮 片,70%乙醇回流提取(2h×3),合并提取液,过滤, 回收乙醇后高速离心,收集上清液,量取600ml,用 水稀释6倍,得到泡沫分离的原料液.按"1.2.1" 项的相同工艺进行泡沫分离,分别收集泡沫液和残 留液;将残留液以2BV?h吸附,通过100gD101 大孔树脂柱,先用3倍量水洗去水溶性杂质,再用 70%乙醇洗至无色,收集洗脱液.按"1.2.1"项下 方法,分别测定泡沫液,残留液和醇洗脱液中固形物 和皂苷的含量,计算回收率和纯度.经比较,采用大 孑L树脂工艺提取的回收率高,而泡沫分离工艺的富 集纯化效果较好.尝试将两种工艺联用,结合两者 的优点来分离重楼甾体皂苷.原料液先经泡沫分 离,收集纯度较高的产品,再采用大孔树脂处理泡沫 分离的残留液,使不能起泡分离的皂苷通过大孔吸 附树脂被进一步分离,可达到更好的分离效果(表 2),工艺路线见图1.从表2可知,联用泡沫分离和 大孔树脂分离工艺与单用泡沫分离工艺比较,可以 显着提高回收率(提高了近一倍). 霞楼原料液 .』.泡沫分离 泡沫液残留液 减压干燥II大L树脂分离工艺 产品l70%醇洗脱液 li回收乙醇,减压干燥 J产品2 1....................................._J l 最终产品 图1联用的工艺路线 FiglPathofcombinedcrRfts 表2工艺联用试验结果(n=3) Table2Resultsofcombinedcraftexperiment(n=3) 2讨论 从工艺的比较研究可知,泡沫分离工艺得到的 产品纯度与大孔树脂分离所得相近甚至更高,且操 作简单,步骤少,不存在大孔树脂的预处理和再生问 题,泡沫液直接干燥就可得到产品;分离过程中未使 用有机试剂,无污染,成本低.从成本,环保,操作难 易等方面看,泡沫分离工艺比大孔吸附树脂有优势. 但回收率低,不足后者的1/2.主要原因是分离后 期无法产生稳定的泡沫,不能继续富集残留液中的 皂苷,直接导致工艺回收率低.对于重楼药液这样 一 个成分复杂的体系,重楼皂苷类成分可能不是惟 一 的起泡物质,药液中可能还存在表面活性更强的 未知物质,比如蛋白或多肽类成分.皂苷类成分主 要依靠这类物质的吸附或稳泡作用而被富集,分离. 当残留液中此类物质浓度降低时,仅依靠皂苷类成 分是无法产生稳定泡沫的,故不能继续分离富集. 将泡沫分离工艺作为一个操作单元,再与大孔树脂 工艺联用来分离重楼皂苷.实验表明,联用可以提 高回收率至70%以上,比单独使用泡沫分离工艺 好.在泡沫分离时可同时预处理树脂,工时与单用 树脂分离工艺一样,且联用还可节约树脂和乙醇用 量,降低了成本. 参考文献: [1]周长春.泡沫分离技术研究进展[J].生物技术通迅,2003,14 (1):85—88. [2]武珊珊,高文远,段宏泉,等.重楼化学成分和药理作用研究 进展[J].中草药,2004,35(3):344—347. [3]康利平,马百乎,张洁,等重楼中甾体皂苷的分离与结构鉴 定[J].中国药物化学杂志,2005,15(1):25—30. [4]年四辉,王扣,罗燕.树脂技术用于重楼总皂苷纯化工艺的研 究[J].云南中医中药杂志,2006,27(1):44—45. [5]张文英,万近福,王真.重楼乙醇提取液的微滤过程[J].中 国医药工业杂志,2004,35(5):275—278. [6]兰洁,李锐,韩丽.泡沫分离法分离重楼中重楼皂苷的工艺研 究[J].中草药,2008,39(1):44—47. [7]兰洁,杨明,韩丽,等.泡沫分离法与常规方法制备甘草酸粗 品的比较[J].华西药学杂志,2007,22(I):25—27. 收稿日期:2008一O1
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