多噻烷诱导芳香烃受体作用研究

多噻烷诱导芳香烃受体作用研究 第29卷第6期 2004年l2月 贵阳医学院 JOURNALOFGUIYANGMEDICALCOLLEGE VOI.29No.6 2004.12 多噻烷诱导芳香烃受体作用研究 张爱华,邱燕 龙曼海,蒋宪瑶, (1.贵阳医学院预防医学系,贵州贵阳550004;2.江苏省南通市环境监测中心站,江 苏南通226000) 方法:用化[摘要]目的:通过特殊的细胞株研究多噻烷有无诱导芳香烃受体的作用. 学激活荧光素酶表 达方法,离体测试多噻烷诱导完整细胞中芳香烃受体依赖的基因表达.结果:多噻 烷各浓度对人肝细胞瘤细胞 有毒性,抑制细胞生长;对小鼠肝细胞瘤细胞基本无毒;各浓度在人和小鼠肝细胞 瘤细胞中所致荧光素酶活性均 未明显高于阴性对照组(DMSO).结论:多噻烷对人和小鼠肝细胞瘤细胞无诱导芳 香烃受体的作用. 【关键词]多噻烷;受体,芳基烃;荧光素酶 [中图分类号]$482.37;R992[文献标识码]A[文章编号]1000-2707(2004)06-0505-02AStudyonPoisoningMechanismofPolythiacycaoalkanes(PCTA) LONGMan.hal,JIANGXian.yao,ZHANGAi—hua,QIUYan (1.SchoolofPublicHealth,GuiyangMedicalCollege,Guiyang550004,China; 2.TheCentralStationofEnvironmentalMonitoring,Nantong226000,Jiangsu,China) [Abstract]Objective:ToinvestigateifPCTAhaveeffectofinducingaromatichydrocarbonre ceptor (AhR).Methods:TheinvitrochemicMactivatedluciferaseexpression(CALUX)assaywasadopt- ed.andthehumanandmousehepatomacelllineswereused.Results:Thetestedconcentrationsof PCTAweretoxictohumanhepatomaTV101Lcells,andinhibitedthegrowthofthecells,butwereba- sicallynon-toxictothemousehepatomaHepa1.12cRcells.TheluciferaseactivitiesofPCTAgroup werenotsignificantlyhigherthanthatofcontrolgroup(DMSO)testedinbothTV101LandHe— pa1.12cRcelllines.Conclusion:PCTAhasnoinducingeffectofAhR— dependentexpressioninboth humanTV101LandmouseHepa1.12cRcellfines. [Keywords]Polythiacycaoalkanes;receptors,arylhydrocarbon;luciferins 多噻烷(PCTA)为沙蚕毒素(nereisotxin,NTX) 系新型杀虫剂,化学名为7一二甲胺基一1,2,3,4, 5一五硫环辛烷草酸盐….芳香烃受体(AhR)是 一 种广泛存在于各种组织细胞浆内的芳香烃依赖 型转录因子,某些化学物质通过该受体诱导基因表 达,改变激酶活性和蛋白质功能,从而引起中毒,故 AhR介导的基因表达成为这些化学物质引起中毒 的基本机理.2002年3—12月对沙蚕毒素是否诱 导AhR活性进行了研究. 1材料与方法 1.1材料 多噻烷由贵州省化工研究院提供;2,3,7,8一 四氯二苯并对二嗯英(TCDD),二甲基亚砜(DM- so)由SGMA公司提供;重组细胞株:人肝细胞瘤 TV101L系将含有3个DRE的人CYPIAI融合至萤 火虫荧光素酶基因的质粒;小鼠肝细胞瘤He. pa1.12CR用PAH/HAH诱导的荧光素酶表达载体 转染而得,该载体含4个DRE.荧光素酶的诱导 在人TV101L和小鼠Hepa1.12CR细胞中均呈时 间,剂量及AhR依赖性】. 1.2方法 采用化学激活荧光素酶表达(CAL~)方法,离体 测定受试物诱导完整细胞中AhR依赖的基因表达. 1.2.1TV101L-CALux人肝细胞瘤TV101L细胞 暴露于1O一10I?molTCDD,0.005%DMSO和 0.125—6.25g/L多噻烷24h后,测定其荧光素酶 活性,同时测定细胞的蛋白含量以校正细胞数,荧 光素酶活性用每微克蛋白中相对光量单位(mu/ 505 贵阳医学院29卷 )表不. 1.2.2Hepa1.12CR—CALux小鼠肝细胞瘤He— pa1.12CR细胞生长于含有小牛血清,庆大霉素和 G418的a—MEM培养液中,细胞接触0.125—6.25 g/L的多噻烷,0.005%DMSO,10,10,molTC— DD4h后,测定荧光素酶活性(Rlu/~g). 1.2.3细胞毒性检测TV101L,Hepa1.12CR细 胞分别按上述方法暴露于多噻烷,DMSO和TCDD, 采用Promega的Celltiter96方法测定活细胞的代 谢活性,用MicroplcteReader450测定其在波长为 570nln时光谱吸光度. 1.3统计学分析 采用t检验,检验多噻烷各浓度与阴性对照 (DMSO)的差别显着性,当多噻烷明显高于DMSO (P<0.05)时,则表明有AhR诱导活性. 2结果 2.1TCDD剂量一反应曲线见图1,图2.从图 中可见,随着TCDD剂量增加,其荧光素酶活性亦 增加,在两种细胞株中均呈明显的剂量一反应关 系,表明方法准确可靠,结果可信. 2.2多噻烷的AhR—CALUX活性由表1可见, 在人肝细胞瘤TV101L细胞中,多噻烷各浓度所产 生的荧光素酶活性均未明显高于DMSO,从细胞毒 性研究结果看(表2),多噻烷各浓度对该细胞有毒 性,使其不能正常生长.而多噻烷对小鼠肝细胞瘤 HePa1.12CR基本无毒,但其浓度所致的荧光素酶 活性亦未明显超过DMSO. l0o 8o ? 匿 6o Ell- Il 藿40雠 20 0 le-1Ule-9le-8le-7le-61e-5 TCDD浓度(too1) 图1TCDD在TV101L细胞中化学激 活荧光素酶表达 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 曲线 Fig.1TCDDstandardcurveinTV101一CALUX 5O6 le—llle一1Ule-9le-8 TCDD浓度(mo1) 图2TCDD在Hepa1.12CR细胞中化学激 活荧光素酶表达标准曲线 Fig.2TCDDstandardCHIVeinSepa1.12cR—CALUX 表1多噻烷在人TvlOlL—LALux和小鼠 HePa1.12CR中的作用 Tab.1TheeffectofPCTAinhuman"IV101一CALUX andmOUSeHepa1.12cR—CALUX(Rlu/p~g) ''与DMSO相比P<O.05,ND表示未检出 表2多噻烷对人TV101L—LALux和小鼠 HePal1.12CR细胞生长的影响 Tab.2TheeffectofPCTAOngrowthofhuman TV101LandmouseSepa1.12CRcell(unit:OD) ''与DMSO相比,P<O.05 (下转第509页) ???加mO 一_【匿?一蹄 6期赵卓等心力衰竭患者血浆利钠肽水平及萘哌地尔对其的影响 心衰时血浆BNP浓度升高,且与左心室功能不全 的严重程度密切相关J.多数人认为在重度心衰 时,BNP比ANP升高得更加显着.但也有报道 BNP和ANP水平一致j,甚至明显低于ANP水 平【2】.本组结果表明,CHF组血浆BNP水平升高 比ANP更为显着,同样是心衰越严重升高越明显. 同ANP一样可作为判断心衰程度的指标. 免疫组织化学实验证实心衰时心血管组织中 CNP的密度增加,表明心衰时CNP的合成是增加 的J.本组中,重度心衰患者血浆CNP浓度无明 显改变,这与Wei等的报道一致,但本组轻度心 衰患者的CNP升高.中,重度心衰时内皮依赖性 舒张因子释放减少,动脉血压的降低及内皮细胞所 受的切应力下降J,均可能使内皮细胞释放CNP 的环节受损.至于轻度心衰CNP浓度增加的机制 目前尚不清楚. 萘哌地尔是一种选择性的.一受体阻滞剂, 主要阻滞..受体亚型,兼有一定的钙通道阻滞作 用.对23例CHF患者在常规治疗基础上加用萘 哌地尔,并与24例常规治疗者对照,经过1月治 疗,两组患者心功能均有明显改善,血浆ANP和 BNP浓度均有显着下降,但经萘哌地尔治疗的患 (上接第506页) 3讨论 研究表明二嗯英类化学物质如2,3,7,8一四氯 二苯并对二嗯英,某些多氯芳烃(PAH),多氯联苯等 的作用主要是通过AhR受体诱导基因表达,改变激 酶活性和蛋白质功能而引起毒性作用.其中AhR 介导的基因表达是二嗯英类化学物质毒性作用的最 主要机理,当该类化学物质进入细胞浆与AhR结合 后,形成的配体一受体复合物即进入细胞核与DNA 上特有的识别位点——二嗯英反应元件结合,导致 有关基因异常表达,从而表现出一系列毒效应【4】. 虽然典型的AhR诱导物质为上述化合物,但也有研 究表明化学结构与理化特性与上述化合物完全不同 的化学物质如某些农药】,也有诱导P4501A1基因 表达或与AhR结合的作用. 本研究结果表明,多噻烷对人肝细胞瘤 TV101L,小鼠肝细胞瘤HePa1.12CR细胞无诱导 芳香烃受体的作用. 者ANP和BNP水平下降更为明显,显示其对神经 一 内分泌激素的异常改变有良好的抑制作用. 4参考文献 [1]李莉,王猷权.心功能不全与血浆心钠素水平的关系 [J].华西医学,2000,15:239—240. 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