补体结合试验诊断环形泰勒虫病的研究

补体结合试验诊断环形泰勒虫病的研究 民泰新虫血清有轻微 的交叉反应,与越芽巴贝斯虫,牛巴剜斯虫,牛边虫,伊氏锥虫,日本分体吸虫病牛的血清无吏叉反应.利用该方法对不 同地区的t275份牛血清进行了环开j泰勒虫病血青学调查,表明其敏感性,特异性良好,可用于口岸辁疰,流行病学调查 厦临床诊断. 关键词环开j泰新虫卦体结合试验牛新;{ 环形泰勒虫病(Tropica]theileriosis)是由环形泰勒虫 (71annulata)引起的一种蜱传性血源原虫病,主要临床 收稿日期1995—1110 症状为稽留热,贫血和皮下出血,在我国北方分布较广,对畜 牧业危害严重.泰勒虫病与巴贝斯虫病(Babesiosis)统称为梨 形虫病(Piroplasmosis)许多国家在动物进出El时都要求橹疫 参l形虫.诊断梨形虫病的方法较多,但常规使用的方法只 4/S发病.羽毛松乱,昏睡,不食,拉白色水样粪便,攻毒后3d 死亡3其,第4d全部剖检,见腿部多处肌内出血,法氏囊周围 有胶冻样物质.3只死亡鸡的法氏囊内出血严重… 24二联苗与单苗的免疫效果比较 免疫后lo和2O”d采血,测定NDHI和IBDAGP抗体效 价结果见表2和表3. 表2免疫鸡血清NDHI抗体 检测 工程第三方检测合同工程防雷检测合同植筋拉拔检测方案传感器技术课后答案检测机构通用要求培训 结果]og: 表3免疫鸡血清IBDAGP抗体检测结果 剥—— 第一次免疫 免疫10d免疫20d 第二发免痤 免疫10d免疫20d 2.5保存期试验 (I)痊苗在一25?存放300d后作100和500倍稀释,各免 疫L0只鸡.免疫后14dNDHI抗体教竹达5.86和5.7;IBD AGP阳性率均在9o以上(2)疫苗在4?存放I5d,同上法进 行试验,NDHI抗体效价达到5.8和5.6lIBDAGP阳性率也 达到8O以上.(3)室温保存5d,同上法免疫,NDHI抗体效价 为41和32dBDAGP只有25的阳性率 2.6=联苗的应用 用该二联苗在太原,榆次,平遥,太谷,寿阳,临汾等地区免 疫接种2O多万只鸡,均无不良反应,和未出现发病的鸡群 3小结与讨论 3.1本试验结果证明,NDLaSotaF和IBDTAD二联弱毒疫 苗免痤小鸡是安全的,无不良反应.以滴鼻和口服各一半的免 疫途径较为理想. 3.2二联苗与单苗免疫对比试验说明,二联苗与单苗没有明 显差异,免疫后测得NDHI抗体救价和IBDAGP阳转率基本 一 致,因此二联苗可替代单苗使用,在生产中具有推广和应 用价值. 33不同剂量免疫后抗体救价及对强毒攻击的保护率证明. 现用疫苗量至少有100个以上免疫保护剂量. 3.4二免后10d测NDHI抗体效价和IBDAGP阳转率与首 免后2od的救价相比有所下降,这可能是二免后一定时间疫苗 受到首免抗体影响的缘故?. 3.5从二联疫苗免疫后NDHI抗体救价和IBDAGP阳转率 以及攻毒试验可以看出,二联疫苗彼此之间无不良影响和干挠 现象. 参考文献 1乔忠,詹丽擐.孙世兴.山西省鸡传染性法氏囊病流行病学 调查.中国兽医科技,1995,25(9):l2,l3 2李柠,黄引贤,李乃津.鸡新城疫,传染性法囊病弱毒混合免 疫试验中国畜禽传染病,1993(4):2,4 10中国兽医科技1996年第26卷第7期 有补悻结合试验(CFTj,间接荧光抗体试验(IFAT)和 ELISA.而过三种方法都有各自的长处与不足.美国农业部 在1969年就将CFT确定为检测梨形虫感染的法定方法. 1992年对谈方法进行了改进”CFT是诊断环形泰勒虫较为 敏感,特异的方法,国内外报道较多.’.在国内,马世君等”以 裂殖体为抗原,检测了接种疫苗后血清中的抗体.矗试验红 细胞中的虫体为抗原建立了环形泰勒虫感染的CF,r渗断方 法; 1材料和方法 1.1试验动物 本试验使用的动物为l,2岁黄牛.购干甘肃省临挑县, 试验前经耳失采血1馀片检查,无任何血液原虫寄生. 1,2虫株来源 利用采自内蒙古伊克昭盟的残缘璃眼蜱成蜱感染除脾 牛,待感染牛染虫率达51.3时.采血保藏于镬氪中备用 l’3抗原制备 取20ml古虫血接种除脾牛,同时隔日肌肉注射地塞米松 i0nag当耳尖血涂片染虫率达20”上时,颈动脉放血,以 20枸橼酸钠抗凝抗凝血用生理盐水3000r/m_n离心洗 涤3次,每次10mln,除去白细胞压积红细胞加 0倍量的 0.35盐水,4?裂解30rain后加 .5盐水使其恢复等 渗,再用生理盐水以8000r/mln洗涤4次,每擞如rain摄后 保留沉淀,加压积红细胞1/5量的生理盐水,超声粉碎l0 mln,加叠氮钠防腐,分装保存备用另采集健康牛血液,以回 样方法制备所谓红细胞抗原,”检验虫体抗原是否含血红蛋 白 1.4血渭 阳性血清是在健康牛皮下接种含虫血3次,以不同时间 间隔采集.阴性血清采自人工感染前的健康牛.特检血清分别 采自安全区和流行区 1.5溶血素和补体 均鞠自成都兽医药厂 1.6朴体结台试验方法 按文献[6]介绍的方法进行. 2结果 2.1抗原性状和效价测定 共制各4批抗原,觑色为乳白色,涂片经甲醇面定,姬姆 萨染色后检查有密集的环形泰勒虫,虫体形态较完整,棱清 晰.经超声粉碎后颜色变拨经抗原效价测定,4倍稀释后与 320倍稀释的阳性血清呈”卅{8倍稀释后与I60倍稀释了阳 性血清呈”“-两种稀释度的抗原与阴性血清呈”一. 22抗原的敏感性和特异性测定 人工感染2头牛,其血涂片发现虫体,感染后5d血清用 CFT检测时生部为阳性栗自新疆的?份已知感染牛血清, 40份呈阳性反应,检出率为9756对人工感染前的l0份 和安全区的35份牛血清检测,全部为阴性. 为证实环形泰勒虫抗原的特异性.用该抗原与几种主要 寄生于牛血液的寄生虫阳性血清进行了文叉试验结果表明. 环形泰勒虫抗原与边缘边虫(A枷声fdmarginJe),职芽巴 贝斯虫(dln’gemina),牛巴贝新虫(,{.borisJ,l犬贝斯 虫(口.major),伊氏锥虫(Trypano~oma…?),和日本分体吸 虫(Schisto,~omaJaponlcum)的阳性血清无交叉匣应.在3恃瑟 氏泰勒虫(丁.sergenti)感染牛血清中,份在l0倍稀释的时出 现抖”,另外2份只在5倍稀释时出现”1_”. 23环形泰勒虫抗原与正常红细胞抗原的比较 本试验所用抗原分离于红细胞.为证实该抗原只含虫体 抗原成分而不含血红蛋白.以同样的方法制备了所谓红细胞 抗原并进行了两者比较.用环形泰勒虫抗原检测接种红细胞 的牛血清,没有出现阳性匣应;用红细胞抗原检测接种红细胞 牛血清,均为阴性反应.只有环形泰勒虫抗原与其感染动物的 阳性血清呈阳性反应 2.4试验牛感染环形泰勒虫后的抗体消长 用含虫血接种2头健康牛,其中头在感染后60d死干 环形泰勒虫病.经检测,感染前血清均为阴性,感染后血清中 抗体消长情况如下图r , U%\~,891fi 5102030蚰50607080901201501g0210240柏 图1环形泰勒虫感染牛抗体消长曲线 2.5野外血清检测 利用CFT检测野外血清,流行区有较高的阳性率.安全 区全部为阴性,其它地区有不同程度的阳性率,表明环形泰勒 虫在这些地区有分布,其结果如下袁: 表1野外血清CFT检测结果 中啻兽医科技1996年第26卷第7期11 //三{—:, 牛隐孢子虫病人工病例与自然病例的比较试验 薛登民张友 (西北农业大学陕西杨凌?12100)(陕西省畜牧兽医研究所) 橘鬣民’8ts{e (西安市草滩农场第三奶牛场) 1A摘要对来自西安地区不同奶牛场的9头腹泻病牛翌临床观察, 病理剖检,并从肠道粪便中分离到隐抱子虫.用分一摘要对来自西安地区不同奶牛场的9头腹泻病牛翌临床观察,病理剖检,并从肠道粪便中分离到隐抱子虫.用分 离到的虫株接种新生健康犊牛9头.凡工感染聩牛均发病并表现出比较典型的隐袍子虫病症状I对凡工感染病犊敢粪 便卯囊再分离和病理学辁查,不但重新分离重腹泻,特别 收稿日斯1995一Iz—ol 是在Paneiera(1971)和Nime(1976)先后发现犊牛和儿童隐孢 子虫病以后.才弓【起』,们的广泛注意叫.现在,隐孢子虫病巳 成为全球性的』,畜共患的原虫病.我国对此病的研究起步较 晚.近年来才陆续有报道.q.1952年前后,西安地区发生一 种奶牛腹泻症,起初仅限于个别奶牛场,以后几乎波及西安地 3讨论 Malhotra等认为,用CFT检测环形泰勒虫感染,早期 检出率高,检出持续时同长本试验制备的抗原性状,稳定性 良好,可以保存于4?冰箱,对环形泰勒虫感染牛的检出率高, 与常见的血谊寄生虫无交叉反应,敏感性,特异性良好.在3 份瑟氏泰勒虫阳性血清中,只有1份出现明显的交叉反应这 一 结果与Dhar等.的报道相一致,他们认为环形泰勒虫与其 他泰勒虫之间有较大的血清学差异 Konyukhov等.甩红细胞虫体抗原检测发病恢复牛血 清,认为抗体可持续9个月.Hooshmand-Rad”甩裂殖体抗原 检测免疫牛时,抗体只维持1O0d本试验使用红细胞中的虫 体抗原检测出健康牛在感染环形泰勒虫后5d的血清中即有 抗体出现,检出持续期在8十月以上,因此该方法既可用于早 期诊断,也可用于检测感染恢复的带虫牛,为进出t2检痤,流 行病学调查及免疫监测提供了一种工具. 利用补体结合试验检测野外牛血清,发现环形泰勒虫分 布广阳性率高.阳性牛有时虽然没有明显临床症状,但贫血, 消瘦,长期带虫成为该病的传染源.因此.可甩CFT对这些牛 定期检测,及时治疗 参考文献 LWeilandG.Species-specficserodiagnosisofequinepiro— plasmainjectionby1T~eansoIcomp]ementfixationtest (CFT),immmunofluorescenee(IIF).andenzyme-tinked lmmmunosorbentassay(ELISA),VetParasito】.1986,20: 43,48 2BoseR,JorgensenWK,DalglieshRJ,eta1.CurrentState andfuturetrendsinthediagnosisofbabesiosls.VetPara— sitol,1995,5761,74 3NationalVeterinaryServiceLaboratoryPiropasmosis, durine,andglanderscomp]imentfixationtest-micro method.AmesIowa:UnitedStatesDepartmentofA~gri— CLIhure,1992.1,30 4~arnettSF,ParasiticProtozoa,Vo】4.NewYork.Aca. demicPress.1977,107,I10 5马世君,尚君凯,谭立新,等.牛环形泰勒焦虫补反抗体测 定.兽医科技杂志.1983.(1o)27,29 6张其才.吕文顾,窦惠芳,等.补体结合试验诊断边虫感染 牛的研究.中国兽医科技,1993,23(5)8,9 7MalhotraDV,DhatS,GautamOP,eta1.Comparativeef. currentimmunoe]ectrophoresisandcom— fieacyofcounter— p]ementfixationtestaforthedetectionofTheileriaannul— lataantlhodiesinexperimentallyinfectedbovinecalves, IndJVetMed,l956,6(1):31,33 8DharS,Gautam0P.SpeciesdifferentiationofTheileria bymean~ofcomplementfixationtest.1ndVetJ,1977, 54-21 9KonyukhovMP,PoluboyarinovaGV.Thero]eoICFT andprolongedCFTinrevealingtheimmunityinanimat havinghadtheilerlosis,Veterinariya,1967,10:56,58 l0Hooshmand—radP,Hashemi—FishakiR.Com【mement—fix— ingantibodiesincattleexperimentatlyinfectedwith Theileriaannu]ataorvaccinatedwithtissuecu]ture.Br VetJ.1971,127{21,24