黔邵花猪CETP基因多态特征及其与生长性能的相关性

黔邵花猪CETP基因多态特征及其与生长性能的相关性 黔邵花猪CETP基因多态特征及其与生长 性能的相关性 第33卷第3期 2007年6月 湖南农业大学学报(自然科学版) JournalofHunanAgriculturalUniversity(NaturalSciences) Vo1.33NO.3 Jun.2007 文章编号:1007—1032(2007)03—0302—03 黔邵花猪CETP基因多态特征及其与生长性能的相关性 魏麟,姚元枝’,刘胜贵’,向德标. (1.怀化学院生物工程系,湖南怀化418008;2.云南省生物技术与生物多样性人才培养基地,云南昆明 650201,3.湖南农业大学动物科学技术学院,湖南长沙410128) 摘要:应用PCR.RFLP技术对湖南黔邵花猪280头个体的血浆胆固醇脂转移蛋白(CETP)基因436bp进行扩增, 用限制性内切酶AvaII对其酶切可得到3种基因型.应用最小二乘单因素模型 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 不同基因型对初生重,45日龄 重,6月龄日重,体高,体长,膘厚的影响.结果显示:CETP基因Ava?酶切位点的各基因型对各生长性状的影 响差异显着(P<0.05),对膘厚的影响差异极显着(P<0.01),Aa基因型对初生重,45日龄重,6月龄重,体高,体 长等性状的影响较大,AA基因型相对较低.由此可知,CETP基因是影响生长性状的一个重要基因. 关键词:黔邵花猪;血浆胆固醇脂转移蛋白基因;生长性能 中图分类号:$828:S813.24文献标识码:A AssociationanalysisofCETPgenewiththegrowthtraitsinQianshaospottedpigs WEILin?2YAOYuan.zhi.LIUSheng-gui,XIANGDe.biao? (1.DepartmentofBiologicalEngineeringinHuaihuaUniversity,Huaihua,Hunan418008China;2.Cen terof BiodiversityandBiotechnologyinYunnanProvince,Kunming650201,China;3.CollegeofAnimalSci enceand Technology,HNAU,Changsha410128,China) Abstract-Intheresearch,436bpcholesterylestertransferprotein(CETP)genepartialsequenceinQians haospotted pigsaresuccessfullyamplifiedbypolymerasechainreaction(PCR)afteropidmizingtheconditions.Av a?wasused forassociationanalysisofmutationsofCETP.ThreegenotypesofweredetectedbyAvail—RFLPinCET Pgene fragment.Withtheleastsquareanalysisofmodel,allgenetypeofCETPgenehadsignificantinfluencethe traitsofbirth weight,weightof45daysand6months,heightandlengthofbody(P<0.05)andthicknessoffat<0.O 1).Aa genetypesofCETPgenehadsignificanthigherbirthweight,weightof45daysand6months,tallnessandl engthof bodythanAAgenotypeinthepigs.Basedontheabovemetionedresults,porcineCETPgenehadagreateff ectonthe growthtraitsinQianshaospottedpigs. Keywords:Qianshaospottedpigs;CETPgene;growthtraits A~CETP基因由位于16号染色体(16q12.16q21) 的25kb基因编码,与卵磷脂胆固醇酰基转移酶基 因和结合珠蛋白基因邻近,由16个外显子和15个 内含子组成Il】.猪CETP基因定位在6号染色体 (1/2p14).p15[21上.研究f3表明,6号染色体上许多 基因,如盐藻糖基转移酶基因(FUT1),氟烷基因 (HAL),激素敏感脂肪酶基因(HSL)等与背膘厚度, 瘦肉率和脂肪含量等性状相关.由于CETP在脂肪 代谢转运蛋白中的重要作用和在染色体上所处的 收稿日期:2006.1010 基金项目:国家自然科学基金项目(30270072,304600 55);云南省自然科学基金项/~(2002C0064M) 作者简介:魏麟(1974.),男,湖南邵阳人,硕士,怀 化学院讲师. 位置,笔者把CETP基因作为一个与生长性能相关 的候选基因来研究,利用猪血样本,采用PCR.RFLP 技术,应用限制性内切酶AvaU酶切CETP基因第1 内含子436bpDNA片段,分析该位点多态性在黔 邵花猪猪群中的分布特征,并研究其酶切位点与生 长性能的相关性,现将结果报道如下. 1材料和方法 1.1样品来源 湖南黔邵花猪的血液样品采集于地方猪280头 个体,采集时与等体积的DNA保存液混合,带回 实验室,一70?冰箱保存备用.育种群个体记录资 料详细,其经济性状有:初生重,45日龄重,6月 第33卷第3期魏麟等黔邵花猪CETP基因多态特征及其与生长性能的相关性303 龄体重,体高,体长,膘厚. 1.2DNA的提取和定量 血液DNA的提取采用 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 蛋白酶K酚/氯仿 DNA提取方法【7】.DNA的定量利用核酸/蛋白定量 仪定量.定量后的DNA稀释至12.5lxg/mL以备PCR 扩增用. 1.3CETP引物 设计 领导形象设计圆作业设计ao工艺污水处理厂设计附属工程施工组织设计清扫机器人结构设计 与PCR扩增 参照史宪伟等【8序列为:CETP上游引物: 5’-TCGTGTGCCGCATCACCAAG一3;CETP下游引 物:5’-TGTGCTCAGGCTAACCCAAC一3,由上海 生工公司合成.引物扩增黔邵花猪CETP基因片段 436bp的DNA序列. PCR的反应体积为25,内含lxPCRbuffer, 1.5mmol/LMgC12,0.2mmol/L每种dNTP,O.15 ~tmol/L上游和下游引物,25模板DNA.PCR的 反应条件为:94?预变性3min,40个循环(94? 45S,62?45S,72?45s),72?后延伸5min. 1.4基因型分析 取5LPCR扩增产物,加1LAva1I酶(2.5 U/),1.5p_L10xbuffe,1p_L0.1%BSA,加水至14 ,在37?恒温酶切过夜.产物于1.2%的琼脂糖 凝胶中5OV电泳2h,然后凝胶成像系统拍照. 1.5统计数据 应用SAS软件,根据最小二乘线性模型【9】:单 因素最小二乘法模型为:Yij=p+af.4-e,其中,Y为 性状观察值,为总体均值,a为基因型的效应,eff 为随机误差,假定服从?(O,)分布.分析CETP 基因型对黔邵花猪群初生重,45日龄重,6月龄体 重,体高,体长,膘厚等生长性状的影响. 2结果与分析 2.1PCR扩增产物及基因型的分析结果 PCR扩增产物见图1.PCR所扩增的CETP基因 片段长度为436bp,通过DNAStar软件分析Ava1I酶 切位点只有1个,酶切后产生241bp和195bp2个片 段,当此酶切位点因变异(c_?G)而消失时,两片段 合并产生436bp的片段,定义等位基因为A(436bp) 和a(241bp+195bp).酶切结果见图2. M为2kb分子量标iE;112为CETP基因扩增产物,大小436bp; l3为阴性对照,无污染 图1CETP基因扩增产物电泳图谱 Fig.1GelpictureoftheproductionofPCRamplificationforCETPgene Ml23456789 M为2kb分子量标记;1,6,8基因型为纯合子AA;3,4,5,9 基因型为杂合子Aa;2,7基因型为纯合子aa 图2AvaII酶切436bp的PCR产物的琼脂凝胶电泳图谱 Fig.2AgaresegelilIlageofdigested436bpPCRproductionwithAva11 2.2CETP基因AvaII酶切位点的基因型及等位基 因频率 根据不同基因的位点酶切产物电泳图进行基 因型判定,计算出湖南黔邵花猪的CETP基因核苷 酸位点的基因频率及基因型频率,如表1. 表1CETP基因AvaII酶切位点的基因型频率及等位基因频率 Table1Genotypefrequenciesandallelefrequenciesandheterozygosity ofCETPgenebytherestrictionenzymesAva?inQianshao spottedpigs 由表1可以看出,湖南黔邵花猪CETP基因其 3种基因型AA,Aa,aa均能检测出,其等位基因 a在群体中略占优势. 2.3AvaII酶切位点的不同基因型与生长性状的 相关性 CETP基因Ava1I酶切位点的不同基因型的平 均数,标准偏差以及差异显着性检验结果如表2. 304湖南农业大学学报(自然科学版)2007年6月 表2CETP基因Avail酶切位点的不同基因型对各生长性状的影响 Table2EffectofallelegeneateachAva? restrictionsiteongrowthtraitsofQianshaospottedpigatdifferentages 同列比较,标有不同小写字母为差异显着;大写字母为差异极显着 由表2可以看出,CETP基因AvaII酶切位点的 不同基因型对体长的影响不显着,对初生重,45日龄 重,6月龄重,体高等性状的影响存在显着差异(P< 0.05),对膘厚的影响存在极显着差异(P<0.01).Aa 基因型对初生重,45日龄重,6月龄重,体高及膘 厚等性状的影响较大. 3讨论 从本研究的结果可知,湖南黔邵花猪CETP基 因AvalI酶切位点能影响各个阶段的生长性状,在 早期生长阶段性状(如初生重,45日龄重)的优良与 否,特别是初生重对猪以后的生长发育和疾病抵抗 力具有很重要的作用.应用单因素模型对CETP基 因与黔邵花猪生长性状的相关性进行分析,首次证 明CETP基因是影响生长性状的一个重要的基 因.从而推断:CETP基因不仅是一个脂肪代谢中 的重要基因及疾病抵抗力基因,而且还是一个影响 生长性状的重要基因. 可能CETP基因与位于同一染色体上的其他基 因类似,与经济性状相关,与影响猪生长性状的主 效基因或与主基因相连锁,CETP基因对生长性状 效应确定是否是该基因的直接效应,还有待于进一 步的研究. CETP基因AvaII酶切位点可以作为中国地方 猪品种中研究该基因与性状关系的遗传标记[1刚,同 时应继续研究CETP基因其他区域(如编码区)的多 态性,探明该基因与经济性状之间的关系. 本研究得到云南省生物多样性与生物技术人才 培养基地提供的技术指导.在采样中得到了湖南怀 化市石门乡畜牧站彭祖安站长的帮助,谨致谢忱. 参考文献: 【1】YamashitaS,IshigamiM,AraiT,eta1.veryhighdensity lipoproteinsinducedbyplasmacholesterylestertransfer protein(CETP)haveapotentantiatherogenicfunction[J]. AnnNYAcadSci,1995,748:606—608. 【2】YerleM,EchardG,RobicA,eta1.Asomatichybridpanel forpigregionalgenemappingcharacterizedbymolecular cytogenetics[J].CytogenetCellGenet,1996,73:194—202. 【3】HarbizI,ChowdharyB,ThomsenPD,eta1.Assignment oftheporcinecalciumreleasechannelgene,acandidate forthemalignanthyperthermiallocus,tothe6p1l-q21 segmentofchromosome6[J】.Genomics,1990,8: 243.248. 【4】MellinkCH,Lahbib—ManssaisY,YerleM,eta1. 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