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中药制剂中各类化学成分分析.doc

中药制剂中各类化学成分分析

李安得
2018-02-27 0人阅读 举报 0 0 暂无简介

简介:本文档为《中药制剂中各类化学成分分析doc》,可适用于领域

中药制剂中各类化学成分分析第五章中药制剂中各类化学成分分析习题一、选择题(一)单行选择题(分析中药制剂中生物碱成分常用于纯化样品的担体是A中性氧化铝B凝胶CSiOD聚酰胺E硅藻土(用薄层色谱法鉴别生物碱成分常在碱性条件下使用的担体是A三氧化二铝B纤维素C硅藻土D硅胶E聚酰胺(薄层色谱法鉴别麻黄碱时常用的显色剂是A硫酸乙醇溶液B茚三酮试剂C硝酸钠试剂D硫酸铜试剂E改良碘化铋钾试剂(可用于中药制剂中总生物碱的含量测定方法是A反相高效液相色谱法B薄层色谱法C气相色谱法D正相高效液相色谱法E分光光度法(不宜采用直接称重法进行含量测定的生物碱类型是A强碱性生物碱B弱碱性生物碱C挥发性生物碱D亲脂性生物碱E亲水性生物碱(生物碱成分采用非水溶液酸碱滴定法进行含量测定主要依据是A生物碱在水中的溶解度B生物碱在醇中的溶解度C生物碱在低极性有机溶剂中的溶解度D生物碱在酸中的溶解度E生物碱pKa的大小(使生物碱雷氏盐溶液呈现吸收特征的是A生物碱盐阳离子B雷氏盐部分C生物碱与雷氏盐生成的络合物D丙酮E甲醇(生物碱雷氏盐比色法溶解沉淀的溶液是A酸水液B碱水液C丙酮D氯仿E正丁醇(含有下列药材的中药制剂可用异羟肟酸铁比色法测定总生物碱含量的是A黄连B麻黄C防己D附子E黄柏(雷氏盐(以丙酮为溶剂)比色法的测定波长是AnmBnmCnmDnmEnm(苦味酸盐比色法的测定波长是AnmBnmCnmDnmEnm(酸性染料比色法影响生物碱及染料存在状态的是A溶剂的极性B反应的温度C溶剂的pHD反应的时间E有机相中的含水量(酸性染料比色法溶剂介质pH的选择是根据A有色配合物(离子对)的稳定性B染料的性质C有色配合物(离子对)的溶解性D染料的性质及生物碱的碱性E生物碱的碱性(用C柱进行生物碱HPLC测定时为克服游离硅醇基影响可采用A流动相中加二乙胺B调整流速C调整检测波长D调整进样量E改变流动相极性(用C柱进行生物碱HPLC测定时为克服游离硅醇基影响可采用A调整流速B流动相中加入离子对试剂C调整检测波长D调整进样量E改变流动相极性(用C柱进行生物碱HPLC测定时为克服游离硅醇基影响可采用A调整流速B改变流动相极性C调整检测波长D调整进样量E流动相中加入隐蔽试剂(用C柱进行生物碱HPLC测定时为克服游离硅醇基影响可采用A调整流速B调整进样量C调整检测波长D改变流动相离子强度E改变流动相极性(含有的主要有效成分为中药制剂进行分析时供试液制备多利用其用有机溶剂提取。(含有木脂素成分的中药制剂进行鉴别时可利用结构中的颜色反应进行检识如结构中的可与三氯化铁试剂反应、可与Labat试剂反应等。(变色酸比色法是某些木脂素成分结构中有可与反应产生颜色进行比色测定的方法。(由于木脂素结构中均有芳香环而具有因此用高效液相色谱法测定时一般可用。(有机酸类成分按结构分为类、类和类。(有机酸类成分按羧基数目分为、和。(齐墩果酸、熊果酸由于其结构特点应首选法测定也可用和等方法。(酸碱滴定法测定有机酸的含量测定的是含量测定方法可在溶液中进行也可在溶液中进行。(地黄炮制后变黑的原因是由于所含成分发生、等所致。(用高效液相色谱法测定龙胆苦苷的含量其测定波长为獐牙菜苦苷的测定波长为。(具有酚羟基取代的香豆素可与反应产生不同的颜色若酚羟基对位无取代可与产生红色至紫红色颜色反应。(香豆素类成分的结构中由于和形成较强的共轭体系具有较强的紫外吸收λmax在左右。(芍药苷在nm有紫外吸收可用和等方法进行测定。总多糖含量测定通常选用作为对照品。多糖是由个以上的单糖基通过键连接聚合而成的高分子物质。多糖作为杂质除去的方法是在水提液中加入倍量的使其沉淀滤过除去。高效液相色谱法测定糖常采用柱分离。高效液相色谱法测定糖为提高稳定性可采用加入使硅胶柱动态改性。蒽酮比色法测定多糖含量较高的蛋白质对显色反应有一定干扰。萃取法适用于测定中药制剂中性总生物碱的含量但对、或在溶剂处理过程中生物碱不宜采用。中药制剂中的生物碱大多以盐的形式存在提取时常选用、、水等溶剂也可先用浸泡使生物碱盐全部转变成后再用提取。分离生物碱主要选用两相溶剂萃取法两相溶剂中一相为水另一相为与水不相混溶的有机溶剂。水相常用的溶剂有、、及有机溶剂相常用的有、、等。用萃取法测定中药制剂中的脂溶性总生物碱含量操作步骤有、、、、。沉淀法是利用的性质使生物碱转变成沉淀后称其重量间接求出中药制剂中生物碱含量的方法。用沉淀法测定中药制剂中的生物碱含量有、、、等步骤。制备生物碱沉淀时所选用的化学试剂有两类一类是如:等另一类沉淀试剂是如氯化汞只与反应生成沉淀。滴定分析法是利用生物碱能发生反应、反应、反应的性质测定中药制剂中生物碱含量的方法。用于测定生物碱含量的滴定分析法有法、法、法、法和法等。水溶液酸碱滴定法是在水溶液中以或为滴定液用的滴定方式测定中药制剂中生物碱含量的方法。由于生物碱多不溶于水因此通常先将生物碱溶于过量的酸性水溶液中再用强碱滴定液回滴过量的酸称为法或法。用滴定法测定生物碱含量的关键是正确选择指示剂所选指示剂的变色范围应与相当。用紫外可见分光光度法测定生物碱的含量应选择适当的测定条件包括、狭缝宽度、和。测定波长的选择是通过吸收光谱选择、作测定波长这样可获得较高的测定灵敏度。狭缝宽度直接影响测定的和。当透光率在(吸光度约为)的范围内测定结果的相对误差(ΔCC)较小当透光率为(吸光度为)时测定结果的相对误差最小。薄层扫描法测定中药制剂的成分含量操作过程有、、、、、、、。黄酮类成分是指分子中含有结构的一系列化合物其定量分析方法主要有、及等。黄酮类成分存在形式有和两种。含黄酮类成分的中药制剂在测定前预处理的常用方法有、、等。蒽醌类成分的定量分析方法主要有、、及等。中药制剂中皂苷类成分的含量测定可分为、和测定。总皂苷类成分的含量测定方法主要有和。皂苷元的含量测定方法主要有、和。单体皂苷的含量测定方法主要有和。皂苷显色的常用试剂有、、、。测定挥发油中主成分的含量测定方法有、、和等。挥发油总量的测定有甲和乙两法。甲法适用于测定的挥发油乙法适用于测定的挥发油。香豆素类成分的含量测定方法有、、、等。有机酸的含量测定方法主要有、、、等。三、名词解释样品参比平行操作参比四(简答题(某中药复方口服液加生物碱沉淀试剂有沉淀产生是否说明该口服液含有生物碱成分,为什么,(某中药复方口服液加浓氨水及氯仿振摇后取氯仿层蒸干残渣加稀盐酸使溶解滤过滤液加生物碱沉淀试剂有沉淀产生是否说明该口服液含有生物碱成分,为什么,(当采用硅胶薄层色谱法鉴别生物碱成分时为什么常有斑点Rf值较小或斑点明显拖尾的现象,可采用哪些方法克服,用碱调节pH使供试液中生物碱成分沉淀析出后称重的方法属于直接重量法当中药制剂中的生物碱成分为酚性生物碱时应如何选择碱化试剂为什么,用直接重量法进行中药制剂中生物碱成分测定的优缺点是什么,用加试剂产生沉淀的重量法进行中药制剂中生物碱成分测定的优缺点是什么,酸性染料比色法测定中药制剂中生物碱成分时为什么要防止有机相中带入水分,(酸性染料比色法测定中药制剂中生物碱成分时为什么其介质的pH是成功与否的关键,酸碱滴定法用于中药制剂中生物碱成分的含量测定时如何选择溶剂介质,(雷氏盐比色法测定生物碱成分时需注意哪些问题,用原型硅胶柱对中药制剂中生物碱成分进行HPLC测定有何特点,用气相色谱法测定中药制剂中挥发性生物碱时制备样品供试液时应注意什么问题,简述聚酰胺薄层色谱分离黄酮类化合物的原理和特点。简述黄酮类化合物在不同溶剂中的溶解特性。简述盐酸镁粉反应鉴别中药制剂中黄酮类化合物的方法和步骤。二陈丸中橙皮苷的鉴别:取本品g加甲醇mL置水浴上加热回流分钟滤过滤液浓缩至约mL作为供试品溶液。另取橙皮苷对照品加甲醇制成饱和溶液作为对照品溶液。吸取上述两种溶液各µL分别点于同一用氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上以醋酸乙酯甲酸水(::)为展开剂展开展距约cm取出晾干再以甲苯醋酸乙酯甲酸水(:::)的上层溶液为展开剂展开展距约cm取出晾干喷以三氯化铝试液置紫外光灯(nm)下检视。供试品色谱中在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的荧光斑点。()简述二次展开的意义和操作注意事项。()简述喷以三氯化铝试液的作用和反应机理。简述皂苷类化合物在不同溶剂中的溶解特性。启脾丸中人参皂苷Re、人参皂苷Rg的鉴别供试品溶液制备方法:取本品g切碎加硅藻土g研匀加氯仿mL超声处理分钟滤过药渣备用挥干溶剂加甲醇mL加热回流小时滤过滤液蒸干残渣加甲醇mL使溶解将甲醇液加在中性氧化铝柱(,目g内径,mm)上用甲醇mL洗脱收集洗脱液蒸干残渣加水mL使溶解用水饱和的正丁醇振摇提取次每次mL合并正丁醇液用正丁醇饱和的水洗涤次每次mL取正丁醇液蒸干残渣加甲醇mL使溶解作为供试品溶液。简述上述主要操作步骤的依据和目的。简述三萜皂苷类单体成分定量方法及各方法的特点。简述醌类化合物在不同溶剂中的溶解特性。简述“碱提取酸沉淀法”提取和纯化蒽醌类成分的依据。简述中药制剂中游离蒽醌成分含量测定方法。简述中药制剂中结合蒽醌成分含量测定方法。简述HPLCELSD检测人参皂苷等成分的优点。挥发油中的主要成分可分为几类,并举例说明。挥发油成分物理性状是什么,挥发油成分化学反应法的显色依据是什么,(TLC定性鉴别的条件是什么,(用GC法定性鉴别的依据是什么,(如何测定样品中的总挥发油含量,(用GC法定量的条件是什么,(哪些成分可用HPLC定量,(哪些成分不适于用HPLC定量,(简述酸碱滴定法在有机酸类成分分析中的应用。(简述高效液相色谱法在有机酸分析中的应用。(气相色谱法在有机酸分析中的作用如何,(有机酸类成分薄层鉴别时常用的显色剂是什么,作用原理是什么,(环烯醚萜苷类成分的测定方法有哪几种,(香豆素类成分的显色反应机理是什么,(香豆素类成分的测定方法有哪几种,(单萜类与二萜类成分在分析方法上的区别是什么,多糖一般如何分类,多糖的主要鉴别方法有哪些,总多糖的主要含量测定方法有哪些,试比较萃取法与沉淀法测定生物碱含量时各自的优缺点。目前小檗碱含量最常用的测定方法有哪些,并写出基本测定程序和测定条件。写出目前测定人参皂苷含量的方法有哪些,并写出基本测定程序。叙述如何测定正骨水、满山红油滴丸中总挥发油的含量,五、论述题(根据生物碱通性论述对中药制剂中生物碱成分进行分析时供试液制备常用方法及特点。(论述生物碱沉淀反应在中药制剂分析中的应用。论述雷氏盐与生物碱的反应在中药制剂中生物碱成分分析中的应用。论述用分光光度法测定中药制剂中生物碱成分时生物碱的碱性对条件选择的影响。论述用分光光度法测定中药制剂中生物碱成分时溶剂介质pH对分析方法有何影响。(论述用色谱法进行中药制剂中生物碱成分分析时溶剂pH对分析结果有何影响。当使用化学键合相硅胶为固定相进行中药制剂中生物碱成分的HPLC分析时硅胶表面残留的游离硅醇基对色谱行为有何影响,如何克服,止喘灵注射液处方组成为麻黄、洋金花、苦杏仁、连翘请设计用薄层色谱法鉴别其中l麻黄碱的方法。(样品供试液制备可根据方法原理用流程表示薄层色谱法请注明选用的吸附剂及薄层原理、展开剂极性及显色剂名称)(止喘灵注射液处方组成为麻黄、洋金花、苦杏仁、连翘请设计用薄层色谱法鉴别其中洋金花的方法。(样品供试液制备可根据方法原理用流程表示薄层色谱法请注明选用的吸附剂及薄层原理、展开剂特点及显色剂名称)(论述含有麻黄的中药制剂中总生物碱含量测定的方法及样品供试液制备方法(样品供试液制备方法可根据原理用流程表示)。在中药制剂黄酮类单体成分分析中试论述如何根据其结构特征和理化性质确定分析条件和方法。在中药制剂皂苷类单体成分分析中试论述如何根据其结构特征和理化性质确定分析条件和方法。在中药制剂蒽醌类单体成分分析中试论述如何根据其结构特征和理化性质确定分析条件和方法。人参养荣丸由人参、白术、茯苓等药味组成试设计该制剂中人参二醇、人参三醇鉴别方法。(一清颗粒中黄芩苷HPLC测定法中系统适用性试验为:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂甲醇molL磷酸二氢钠缓冲液(用磷酸调节pH至)(:)为流动相检测波长为nm。理论板数按黄芩苷峰计算应不低于与相邻峰的分离度应符合要求。mgmL黄芩苷对照品溶液重复进样(µL)峰面积分别为。()写出理论板数与分离度的计算式柱长为cm理论板高不低于多少,()计算重复进样的相对标准偏差。(试设计测定牛黄解毒片中大黄游离蒽醌和总蒽醌含量的方法(供试品溶液制备方法和显色方法等)牛黄解毒片中大黄、黄芩的一般理化鉴别中分别鉴别哪类成分,其变色机理是什么,将下述实验操作过程与结果按药典要求描述出来:样品g研细醋酸乙酯mL盐酸mL超声处理min滤过滤液蒸干加mL醋酸乙酯溶解残渣得供试品溶液大黄对照药材g同法制成对照药材溶液大黄素对照品甲醇溶解mgmL对照品溶液点样量:供试品溶液L对照药材溶液L对照品溶液Lμμμ薄层板:硅胶G薄层板展开剂:甲苯醋酸乙酯甲酸(::)上层液显色剂:氨蒸气中熏结果:显相同颜色斑点简述挥发性成分的分析特点。简述显色反应的机制。定性鉴别的方法有几种,TLC的作用地位如何,简述GC–MS联用在挥发性成分中的作用和地位。挥发性成分的定量首选方法是什么,为什么,HPLC和TLCS在挥发性成分中的应用如何,常用GC中的定量方法是什么,为何不用归一化法,试比较桉油精和桂皮醛的分析特点。(论述薄层扫描法在有机酸类成分分析中的作用和地位。(齐墩果酸和熊果酸的结构特点是什么,为什么用超临界流体色谱法测定时有较高的灵敏度,(香豆素类成分的荧光性质在分析中的意义是什么,(从梓醇的结构特点设计分析方法。(从栀子苷的结构特点设计其分析方法。(计算分光光度法可用于有机酸的测定作用和地位如何,(论述环烯醚萜苷类成分的定性方法。(荧光法测定环烯醚萜苷类成分的原理是什么,六、计算题分光光度法测定益母草注射液中总生物碱的含量。标准曲线的绘制:精密量取水苏碱标准品的molL盐酸溶液(每ml含水苏碱mg)ml、ml、ml、ml、ml分别置于ml烧杯中均用molL盐酸溶液稀释至ml置冰浴中加入硫氰酸铬铵溶液沉淀过滤抽干后用丙酮溶解转移至ml量瓶中并稀释至刻度在nm处测定吸收度数据如下:浓度C(mgml)吸收度(A)样品测定:精密量取益母草注射液ml置ml烧杯中按上述操作测定其吸收度为。()请对标准曲线实验数据进行一元线性回归列出回归方程()计算益母草注射液中总生物碱的含量(以盐酸水苏碱计)。×molL芦丁的乙醇溶液(使用cm比色皿)在波长nm处的吸收度为。()试计算芦丁在波长nm下的吸收系数(E)。()已知益心酮片中含有芦丁取样称重为g提取物用乙醇溶解转移至ml量瓶中用乙醇稀释至刻度。使用cm的比色皿在波长nm处的吸收度为。试计算益心酮片中芦丁(CHO)的含量。附参考答案一、选择题(一)A型题(A(D(B(E(C(E(B(C(DBACDABEDC(ECBACCEACCCCABEAACDEBB(C(D(A(E(A(C(E(B(D(D(A(C(D(E(DDCB(C(A(D(D(C(A(B(D(C(A(D(E(A(E(B(BADCADDABECABADABAADEBACAAAAC(二)多项选择题(BEACDABCDACDEABDACDABDBCDABCDABDEBEBEADECDEABCBCDACDBCABDACDABCDEABCDABCDABCEABCBCDACDACDEABCDEABDABCDBCDEABCDEABDABCDEABCDEABCABCDEABCABCDEABCDEABCEACDABCDCDEACABCDBCDABABCDABCDABCABCDABCDEABCDEABCDEABCE(三)配伍选择题(D(E(A(D(B(C(A(D(EBACBEDBCCAA(A(D(C(E(B(C(B(A(E(D(B(E(B(A(C(A(D(B(C(C(A(C(B(E(ECBDEDCBEDA(四)配伍选择题CBDBBABDDDADCBBBACBDABDABDCBCDCBDDADCBCCBADBBABCDCACCADDCDDDBAAAD二、填空题(蛋白质多肽鞣质(吸收波长颜色(介质pH值酸性染料的种类有机溶剂的选择(pH阳离子阴离子有机溶剂(偏低偏高定量结合(碱性大小(pKa)(氢键氢键(反相乙腈水甲醇水(阳离子交换树脂生物碱盐阳离子(有挥发性对热稳定(挥干展开剂背景深反差小(日光紫外光喷显色剂黄芩苷葛根素淫羊藿苷桂皮酰基苯甲酰基甲醇钠醋酸钠氯化铝大大大薄层色谱法高效液相色谱法人参皂苷Rg人参皂苷Re人参皂苷Rb人参皂苷Rb人参皂苷Rg丁醇戊醇硫酸乙醇溶液大黄酚大黄素丹参酮A苯醌萘醌菲醌蒽醌大还原反应配合反应黄酮重量法比色法氢氧化钠氢氧化铵混合碱液二羟基蒽醌正丁醇(萜类化合物、脂肪族化合物、芳香族化合物(丁香酚、ß,丁香烯、乙酰丁香酚(nm(nm、nm、nm、nm(GC、TLCS、HPLCGC(内标法、外标法(挥发油测定器(闪蒸气相色谱法(化学反应法、TLC、GC、GC–MS与GC–FTIR联用分析(亲脂性低极性(功能基(取代基)酚羟基亚甲二氧基(亚甲二氧基变色酸浓硫酸(紫外吸收紫外检测器(脂肪族芳香族萜(单羧基酸二羧基酸三羧基酸(超临界流体色谱法高效液相色谱法薄层扫描法(总有机酸水非水(环烯醚萜类水解聚合(nmnm(三氯化铁试剂重氮化试剂(羰基芳环nm(高效液相色谱法薄层扫描法(葡萄糖(十苷(乙醇(氨基键合硅胶(四乙酸胺(色氨酸脂溶挥发性遇热易分解破坏易水解的酸水乙醇碱水游离形式有机溶剂水硫酸水溶液盐酸水溶液氢氧化钠水溶液乙醚氯仿石油醚取样提取萃取称重计算生物碱能与某些化学试剂产生沉淀取样沉淀称重计算生物碱沉淀试剂碘化铋钾选择性较强的试剂颠茄类生物碱酸碱中和沉淀配位水溶液酸碱滴定非水溶液酸碱滴定双相滴定络合滴定沉淀滴定强酸强碱直接或间接反滴定剩余滴定被测生物碱等当点时的pH测定波长吸收度读数范围参比溶液吸收系数大干扰少的波长灵敏度工作曲线的线性范围,,样品预处理测定波长的选择供试品及对照品溶液的配制点样展开显色扫描绘制标准曲线计算含量CCC(C为苯环)分光光度法薄层扫描法高效液相色谱法苷苷元pH梯度萃取法色谱法沉淀法紫外可见分光光度法荧光分光光度法薄层扫描法高效液相色谱法总皂苷测定皂苷元测定单体皂苷紫外可见分光光度法重量分析法薄层色谱法高效液相色谱法紫外可见分光光度法薄层色谱法高效液相色谱法浓硫酸高氯酸硫酸醋酐芳香醛硫酸气相色谱法薄层色谱法紫外分光光度法高效液相色谱法相对密度在以下相对密度在以上比色法紫外分光光度法薄层扫描法高效液相色谱法滴定分析法紫外可见分光光度法薄层扫描法高效液相色谱法三、名词解释若样品基体有颜色而显色剂不与样品基体显色在测定波长下也无吸收时可按与显色反应相同的条件在没有显色剂存在的情况下供试液加各种辅助试剂作为参比溶液消除样品基体中共存组分对测定的干扰。用不含待测组分的样品按照与样品测定相同的条件与样品平行操作测定时用前者作参比溶液称为平行操作参比。四、简答题(由于中药复方中尚有蛋白质、多肽及鞣质等也可以与生物碱沉淀试剂生成沉淀为假阳性结果所以不经净化处理直接加试剂有沉淀产生不能确定制剂中含有生物碱成分。(经净化处理加氨水碱化使生物碱游离用氯仿萃取可用排除蛋白质、多肽氯仿蒸干用酸将生物碱溶解滤除酸不溶物(如鞣质)排除干扰成分后再加试剂生成沉淀可以确定中药制剂中含有生物碱成分。(由于硅胶本身有弱酸性对碱性物质吸附较强故可使Rf较小或影响分离使斑点拖尾克服的方法如展开剂中加入适量有机碱、在饱和氨蒸气下展开以及用碱液铺制薄层板等方法。(酚性生物碱可溶于苛性碱水溶液故碱化时如选用氢氧化钠(钾)酚性生物碱可溶于水不沉淀析出从而影响结果。一般选用除苛性碱之外的碱类如氢氧化氨、石灰水等。(优点:计算简单、不用换算因数等。缺点:使用上有一定局限性如挥发性生物碱、对热不稳定生物碱、在碱性下加热可水解的生物碱均不能采用。此外操作易乳化、费时、取样量大等均是该法的不足之处。优点:取样量小、灵敏度高等。缺点:计算复杂、操作繁琐等。混入水可使有机相混浊或混入酸性染料影响测定结果。如果介质pH偏高染料能以离子状态存在但生物碱不能如果介质pH偏低生物碱可以生物碱盐状态存在而染料却不能两种情况均不能使生物碱与染料定量结合生成离子对。故选择合适的pH使生物碱和染料均以离子状态存在两者才能结合为有色离子对。酸碱滴定法有水溶液与非水溶液两种方法之分主要根据生物碱碱性强弱选择溶液碱性弱的生物碱一般选用非水溶液酸碱滴定法。雷氏盐试剂室温下即易分解故需新鲜配制并在低温进行反应液的浓度不能过低注意杂质干扰雷氏盐丙酮液吸收值随时间有变化故应尽快测定。用原型硅胶柱对中药制剂中生物碱成分进行HPLC测定分离原理属于吸附色谱法可以排除酸性及中性杂质的干扰利用生物碱碱性不同进行分离生物碱的亲脂性对分离影响不大流动相组成比较简单。主要注意采用冷提方法避免加热防止挥发性生物碱损失最后需用氯仿等低极性有机溶剂为溶媒制备成供试液。聚酰胺薄层色谱用于分离含游离酚羟基的黄酮苷和苷元效果较好。其原理是黄酮类成分含有酚羟基而聚酰胺分子中含有酰胺基二者形成氢键。由于各种黄酮类成分取代基团的性质、多少和位置的不同与聚酰胺形成氢键的能力有所差异而得到分离。聚酰胺对黄酮类成分的吸附能力较强因而展开剂就需要有较强的极性。一般来说展开剂中大多含有醇、酸、水或三者兼有。黄酮类化合物的溶解度因结构及存在状态(苷或苷元、单糖苷、双糖苷或三糖苷)不同而有很大差异。一般游离苷元难溶或不溶于水易溶于甲醇、乙醇、醋酸乙酯、乙醚等有机溶剂及稀碱液中苷元分子中引入羟基数越多将增加在水中的溶解度而羟基经甲基化后则增加在有机溶剂中的溶解度。黄酮类化合物的羟基糖苷化后水中溶解度即相应加大而在有机溶剂中的溶解度则相应减小。黄酮苷一般易溶于水、甲醇、乙醇等强极性溶剂中但难溶或不溶于苯、氯仿等有机溶剂中。糖链越长则水中溶解度越大。将中药制剂用适当方法提取分离制成供试品液取,mL加入数滴盐酸然后加入少量镁粉或锌粉(必要时加热)数分钟后出现红,紫红色说明含有黄酮、黄酮醇、二氢黄酮或二氢黄酮类化合物。为了避免中药提取液本身颜色的干扰可注意观察加入盐酸后升起的泡沫颜色如泡沫为红色即示阳性。进行二次展开可有效地增大极性黄酮类成分在硅胶G板上的分离度二次展开时第一次展开用的展开剂极性较强展开后须将薄层板上溶剂完全挥干。三氯化铝显色后检视荧光有效地增大其检测的灵敏度黄酮类化合物分子中多有下列结构故常可与铝盐、铅盐、锆盐、镁盐等试剂发生配合反应生成有色络合物。皂苷一般可溶于水易溶于热水、含水稀醇、热甲醇和热乙醇中几不溶于或难溶于乙醚、苯等极性小的有机溶剂。皂苷在含水丁醇或戊醇中溶解度较好且又能与水分成二相可利用此性质从水溶液中用正丁醇或戊醇提取皂苷借以与亲水性的糖、蛋白质等分离。三萜皂苷元能溶于石油醚、苯、乙醚、氯仿等有机溶剂而不溶于水。本品为丸剂含蜂蜜等辅料加硅藻土作分散剂研匀有利于溶剂的提取加氯仿将制剂中非极性干扰成分提取并弃去加甲醇将制剂中皂苷等极性较大的成分提取上氧化铝柱纯化洗脱液蒸干后加水溶解再用水饱和正丁醇提取得皂苷提取部位作皂苷鉴别用供试品溶液。()薄层色谱法样品经适当的提取、纯化后用薄层色谱法分离可排除其他组分的干扰常用于测定中药制剂中的皂苷元或单体皂苷定量方法可采用薄层洗脱比色法或薄层扫描法。薄层扫描时须用硫酸乙醇溶液显色显色斑点易褪色因而方法的稳定性和重现性较差。()高效液相色谱法大多数三萜皂苷类成分如人参皂苷、三七皂苷等可利用其在紫外区的末端吸收来检测但灵敏度相对要低。若中药制剂中所含三萜皂苷类成分本身具有较强的紫外吸收如甘草酸、远志皂苷等可用HPLC法分离并用紫外检测器检测。近年来蒸发光散射检测器这一通用型质量检测器的技术日渐成熟使得高效液相色谱法检测三萜皂苷类成分的文献报道越来越多。在用ELSD检测时系统平衡快(大约分钟)基线相当稳定重现性、灵敏度均较好且通过自然对数拟合峰面积值与进样量之间呈良好的线性关系因而结果较准确而用UV检测系统平衡慢(~小时)基线不稳定再加上人参皂苷Rg和人参皂苷Re为末端吸收(其UV光谱图与流动相相似)因而重现性、灵敏度均较差因此当样品含量较低时结果不准确与ELSD所测结果相差较大。游离醌类多溶于乙醇、乙醚、苯、氯仿等有机溶剂微溶于或不溶于水。但结合成苷后极性增大易溶于甲醇、乙醇中在热水中也可溶解但冷水中溶解度大大降低并几乎不溶于苯、乙醚、氯仿等非极性溶剂中。蒽醌类化合物分子中多具有酚羟基故具有一定酸性在碱性水溶液中易溶但加酸酸化时又可重新沉淀析出所谓碱提取酸沉淀即是根据这个道理进行的。中药中含有游离蒽醌的量一般不高且为脂溶性的故此部分多用弱极性溶剂如乙醚、氯仿等提取后加碱比色测定。方法是称取中药或中药制剂适量在索氏提取器中用氯仿回流提取至无色。氯仿提取液移入分液漏斗中以氢氧化钠氢氧化铵混合碱液分次提取至无色合并碱液用少量氯仿洗涤氯仿弃去碱液调整至一定体积若不澄清可用垂熔漏斗过滤滤液在沸水浴中加热分钟用冷水冷却至室温分钟后比色测定以二羟基蒽醌为对照品计算含量。蒽醌苷类极性较强可以用极性溶剂提取通常是取游离蒽醌测定项下的药渣将苷提出水解成苷元后再测定也可将药渣先行酸水解然后用非极性溶剂提取苷元后测定或取待测样品先行酸水解然后用非极性溶剂提取苷元后测定其结果为总蒽醌含量从中减去游离蒽醌含量即得结合蒽醌的含量。大多数三萜皂苷类成分如人参皂苷、三七皂苷等可利用其在紫外区的末端吸收来检测但灵敏度相对要低。蒸发光散射检测器(ELSD)这一通用型质量检测器的技术日渐成熟使得高效液相色谱法检测三萜皂苷类成分的文献报道越来越多。在用ELSD检测时系统平衡快(大约分钟)基线相当稳定重现性、灵敏度均较好且通过自然对数拟合峰面积值与进样量之间呈良好的线性关系因而结果较准确而用UV检测系统平衡慢(~小时)基线不稳定再加上人参皂苷Rg和人参皂苷Re为末端吸收因而重现性、灵敏度均较差因此当样品含量较低时结果不准确与ELSD所测结果相差较大。(挥发油中主要成分可分为三类即萜类、脂肪族化合物和芳香族化合物。萜类化合物如薄荷醇、薄荷酮、龙脑、樟脑等脂肪族化合物如异戊醛、甲基正壬酮等芳香族化合物如丁香酚、桂皮醛、丹皮酚等。(挥发油在通常情况下为油状液体多数比重小于比重一般在,之间沸点在,之间折光率在,之间。不溶于水而溶于大多有机溶剂。(化学反应法的显色依据是挥发油中所含的不同类型的化学成分具有不同的官能团与不同的试剂可产生不同的颜色反应从而判断所含的化学成分类型。如当挥发油中含有酚类成分时加入三氯化铁的乙醇溶液可产生蓝色、蓝紫色或绿色反应当含有羰基化合物时加入苯肼或苯肼衍生物、羟胺等试剂可生成结晶性的衍生物当含有醛基化合物时加入硝酸银氨试液可发生银镜反应若含有不饱和化合物时加入溴红棕色即褪去等。用这些溶液颜色的变化来判断某些官能团的类别。(挥发油的TLC鉴别常用的吸附剂是硅胶和氧化铝也可用硝酸银薄层因为萜类化合物可依据其双键数目和位置不同与硝酸银形成π配合物难易及稳定性的差异而得以分离。常用的展开剂以非极性溶剂为主如石油醚、正己烷、苯、乙醚、四氯化碳、醋酸乙酯等。常用的显色剂可据所含成分而决定如茴香醚,浓硫酸为通用显色剂与挥发油中多种成分可形成鲜艳的颜色若含不饱和化合物时可用高锰酸钾水溶液若含羰基化合物可使用–二硝基苯肼试剂若含有酚性物质可用三氯化铁试剂若含有酸类物质可用溴酚蓝试剂等。(GC法是挥发性成分的定性方法之一。挥发油中所含成分复杂当用TLC分离效果不好或含量较低时可用GC法进行定性鉴别。鉴别的依据是同一物质在相同的色谱条件下具有相同的保留参数故常用对照品对照法进行定性即在相同的色谱条件下测定供试品与对照品的保留时间以确定某组分的存在与否。(若某样品中含有较多的挥发油可测定其总挥发油含量作为质控指标之一。总挥发油的测定采用挥发油测定器用蒸馏法测定。根据挥发油的相对密度不同可分别测定相对密度在以下和以上的挥发油含量。(用GC法测定挥发油的含量常用填充柱载体多用硅藻土或高分子多孔小球固定液用聚乙二醇类、硅氧烷类、阿皮松类和聚酯类也可用毛细管柱。检测器常用氢火焰离子化检测器(FID)。定量方法多采用内标法或外标法。(挥发油的组成复杂如萜类、脂肪族类、芳香族类等。从结构特点上看可分为有共轭结构的分子式或无共轭结构的分子式。无共轭结构的分子只能用GC法或TLC法测定含量而有共轭结构的分子可用HPLC法(UV检测器)进行含量测定如丁香酚、桂皮醛、茴香脑等均可用HPLC法进行定量分析。(挥发油成分按结构分类可分为饱和化合物和不饱和化合物在不饱和化合物中又分为有共轭结构和单一双键结构两类有共轭结构的具有紫外吸收可用HPLC法测定有单一双键不具共轭结构的如樟脑、蒎烯等具末端吸收用HPLC法测定时灵敏度较低。饱和化合物如薄荷醇、桉油精等无紫外吸收所以后两类均不宜采用HPLC法测定而宜采用GC法测定。(酸碱滴定法适合于测定总有机酸类成分由于中药中有机酸类成分酸性弱在水溶液中滴定突跃不明显可用非水溶液滴定法。滴定溶液颜色较深时影响观察沉淀终点采用电位法指示终点。(有机酸类成分有一部分具有紫外吸收如芳香族酸类所以可用高效液相色谱法测定。常见的有绿原酸、没食子酸、桂皮酸、丹参素、阿魏酸等。(某些低级脂肪酸或芳香酸具有挥发性可用气相色谱法测定而不具有挥发性的某些有机酸如亚麻酸、蜂王酸可用衍生化法生成甲酯或甲基化衍生物而具有挥发性也可用气相色谱法测定。(当用薄层色谱法鉴别有机酸类成分时常用的显色剂为pH指示剂如溴甲酚绿、溴甲酚紫、溴酚蓝等这些指示剂当遇到有机酸时在不同的pH值下显示出不同的颜色从而可进行有机酸的鉴别。(环烯醚萜苷类成分的母核都具烯键和醚键有些双键与其它双键共轭具有较强的紫外吸收不是共轭双键的也有末端吸收故此类化合物可用高效液相色谱法测定。也可用薄层色谱法分离后经显色剂显色用扫描法测定。某些环烯醚萜苷类成分具有荧光还可用荧光法测定也可用适当的显色剂显色后用分光光度法测定但此法专属性要比其它方法差。(香豆素类成分是内酯的衍生物因此在用显色反应鉴别时可利用其结构特点如与异羟肟酸铁反应而显红色具有酚羟基的香豆素可加FeCl试剂使其呈色若酚羟基的对位无取代时可与重氮化试剂生成红色偶氮染料也可利用内酯环在碱性条件下被水解后生成的酚羟基如果其对位无取代基时可与Gibbs试剂反应产生蓝色。(香豆素类成分的测定方法与其结构特征有关香豆素类成分可与多种显色剂显色所以可用分光光度法测定。香豆素类成分中的羰基和芳环形成共轭体系具较强的紫外吸收故又可用高效液相色谱法测定。大多数香豆素类成分具有强烈的荧光所以也可用荧光法或薄层荧光法测定有一些小分子的香豆素成分如蛇床子素、欧前胡素、花椒毒素等具有挥发性所以还可以用气相色谱法测定。(萜类化合物在自然界分布很广单萜和倍半萜是构成中药挥发油的主要成分如薄荷醇、樟脑、龙脑等可用气相色谱法测定。而二萜类成分是形成树脂的主要成分多不具有挥发性但结构中多含有双键所以可用高效液相色谱法测定。多糖一般分为两类一类为水不溶的主要是形成动植物的支持组织如纤维素、甲壳素等分子是直糖链型另一类为动植物的贮存养料可溶于热水成胶体溶液如淀粉、肝糖元等多数为支糖链型。多糖水解后进行()薄层色谱法和纸色谱法鉴别()滤纸电泳、玻璃纤维电泳、醋酸纤维薄膜电泳和凝胶电泳等电泳方法()HPLC法鉴别()气相色谱质谱联用等。DNS比色法系利用二硝基水杨酸与多糖水解后的还原糖生成有色物质进行测定苯酚硫酸法系利用苯酚硫酸试剂可与游离的或多糖中的己糖、糖醛酸起显色反应己糖在nm波长处、戊糖及糖醛酸在nm波长处有最大吸收吸收度与糖含量呈线性关系。蒽酮硫酸法系利用多糖与硫酸发生脱水反应生成糠醛或其衍生物与蒽酮试剂缩合生成有色物质进行测定。试比较萃取法与沉淀法测定生物碱含量时各自的优缺点。目前小檗碱含量最常用的测定方法有哪些,并写出基本测定程序和测定条件。写出目前测定人参皂苷含量的方法有哪些,并写出基本测定程序。叙述如何测定正骨水、满山红油滴丸中总挥发油的含量,五、论述题(常用制备方法多根据生物碱碱性(可与酸成盐)及溶解性(多数游离生物碱易溶于有机溶剂难溶于水生物碱盐易溶于水、极性有机溶剂难溶于低级性有机溶剂)固体制剂可先用醇类提取提取液浓缩浸膏加酸溶解滤过酸不溶物酸水液调pH以上加低极性有机溶剂如氯仿萃取萃取液浓缩至适量。液体制剂(固体制剂)可直接碱化后用低极性有机溶剂如氯仿提取提取液浓缩至适量。如果杂质多可将浓缩液通过氧化铝柱等净化。(可作为生物碱的定性鉴别生物碱与沉淀试剂生成的沉淀组成恒定时可用重量法进行含量测定生物碱与沉淀试剂生成的沉淀组成恒定有颜色且易溶于某种溶剂时可用分光光度法比色测定含量如雷氏盐比色法、苦味酸盐比色法等。(可作为生物碱的定性鉴别方法生物碱与雷氏盐在弱酸下可生成组成恒定的沉淀沉淀干燥后可用重量法测定含量此外该沉淀易溶于丙酮、甲醇等溶剂其丙酮溶液在,nm波长处有吸收、甲醇溶液在nm波长处有吸收可用比色法测定含量。(生物碱碱性强弱对自身的光吸收没有影响因此对直接比色的测定方法无影响在加入试剂显色后特定波长下测定的分光光度法中生物碱碱性强弱对酸性染料比色法中介质pH的选择有影响。如强碱性生物碱在弱酸条件下(pH较高)即可以盐的形式存在而弱碱性生物碱则需要在强酸条件下(pH较低)才可以盐的形式存在因此生物碱碱性强弱是介质pH选择的主要影响因素。(酸性染料比色法溶剂介质的pH偏低则染料不能以离子状态存在pH偏高生物碱不能以离子状态存在两者均不能使染料与生物碱生成有色离子对影响比色生物碱与苦味酸在弱酸或中性条件下生成苦味酸盐沉淀该沉淀加碱调pH至碱性可使沉淀分解释放出试剂用含有试剂的水液比色测定在pH弱酸条件下用氯仿可将生物碱苦味酸盐提出用生物碱苦味酸盐的氯仿液比色测定雷氏盐与生物碱需在弱酸条件下生成沉淀直接称量沉淀测定或用丙酮溶解沉淀比色法测定。(由于生物碱碱性不同在不同pH条件下存在状态不同用色谱法分析生物碱成分时,流动相的pH可影响物质的分离度、峰形及Rf或t。如硅胶薄层色R谱当斑点Rf较小、斑点拖尾时在展开剂中加有机碱使展开剂偏碱性可使Rf增加斑点集中改善分离效果。高效液相色谱法分析生物碱成分时偏碱性或偏酸性的流动相分离效果比中性流动相好。(由于硅醇基酸性较大生物碱类成分可与其牢固地键合从而影响色谱行为使保留时间延长、峰形变宽、拖尾。为了克服游离硅醇基的影响可采取以下措施:()改进流动相:在流动相中加入硅醇基抑制剂或称改性剂竞争或部分阻断硅醇基的影响在合适的pH下流动相中加入低浓度离子对试剂可通过与生物碱类成分生成离子对而掩蔽其碱性基团使之不会与固定相表面的硅醇基作用也可以在流动相中加入季铵盐试剂能在较短的保留时间内得到很好的分离色谱峰重现性好也不拖尾在流动相中加入一定浓度的电解质缓冲盐通过改变流动相离子强度稳定pH值及促进离子对相互作用而起到改善峰形及分离效果的作用。()固定相改进:封尾技术可以使填料的键合更彻底。一般是在键合反应结束后用三甲基氯硅烷(TMCS)等进行后续处理尽量减少残余羟基增加单体覆盖度。(该题是将样品碱化后用低极性有机溶剂提取选择对照品及显色试剂以排除洋金花生物碱的干扰。供试品溶液制备:注射液样品直接碱化后用亲脂性有机溶剂提取提取液浓缩加适量甲醇溶解作为供试品溶液另取盐酸麻黄碱对照品加甲醇溶解为对照品溶液。将以上溶液分别点于同一块硅胶G薄层板上低极性偏碱性展开剂展开(或在饱和氨气环境下低极性有机溶剂展开)挥尽溶剂后以茚三酮试剂显色。该薄层色谱为吸附色谱。(该题是将样品直接碱化后用低极性有机溶剂提取选择对照品及显色试剂以排除麻黄生物碱成分的干扰。供试品溶液制备:注射液样品直接碱化后用亲脂性有机溶剂提取提取液浓缩加适量甲醇溶解作为供试品溶液另取莨菪碱对照品加甲醇溶解为对照品溶液。将以上溶液分别点于同一硅胶G薄层板上低极性偏碱性展开剂展开(或在饱和氨气环境下低极性有机溶剂展开)挥尽溶剂后以改良碘化铋钾试剂显色。该薄层色谱为吸附色谱(该题主要注意麻黄中生物碱有挥发性、与生物碱沉淀试剂不反应等特性总生物碱含量测定不能采用重量法、直接分光光度法、雷氏盐比色法、苦味酸盐比色法等可用水溶液酸碱滴定法、酸性染料滴定法及酸性染料比色法等测定总生物碱含量。固体制剂供试液制备既可直接加碱碱化制剂粉末后用低极性有机溶剂浸提、超声提取等也可以先用醇回流提取提取液回收乙醇酸水溶解滤过滤液碱化后用低极性有机溶剂萃取。口服液、注射剂等液体制剂可直接加碱碱化后用低极性有机溶剂萃取。酊剂、酒剂等挥去醇后用适量水稀释加碱碱化低极性有机溶剂萃取。净化方法可通过三氧化二铝小柱等方法。黄酮类化合物是指基本母核为苯基色原酮(phenylchromone)类化合物现在则是泛指两苯环通过中央三碳链相互联结而成的一系列化合物。在植物体内大部分与糖结合成苷一部分以游离形式存在。多数黄酮结构中存在有桂皮酰基(cinnamoyi)及苯甲酰基(benzoyi)组成的交叉共轭体系故在~nm波长区域内有强烈的吸收带此是光谱法及色谱光谱法分析的基础。大多黄酮及其苷类含有游离酚羟基可与聚酰胺形成氢键可用聚酰胺色谱法进行分析。黄酮类化合物在紫外光区有较强的吸收使用HPLC法检测灵敏度甚高。在黄酮类成分分析中供试品液的制备可视其溶解特性而定。一般黄酮苷类以及极性稍大的苷元(如羟基黄酮、双黄酮、橙酮、查耳酮等)一般可用丙酮、醋酸乙酯、乙醇、水或某些极性较大混合溶剂进行提取其中用的最多的是甲醇水(:)或甲醇一些多糖苷类则可以用沸水提取。大多数黄酮类苷元宜用极性较小的溶剂如用氯仿、乙醚、醋酸乙酯等提取而对多甲氧基黄酮类游离苷元甚至可用苯进行提取。大多数三萜皂苷类成分如人参皂苷、三七皂苷等可利用其在紫外区的末端吸收来检测但灵敏度相对要低。若中药制剂中所含三萜皂苷类成分本身具有较强的紫外吸收如甘草酸、远志皂苷等可用HPLC法分离并用紫外检测器检测。近年来蒸发光散射检测器这一通用型质量检测器的技术日渐成熟应用效果较好基线稳定重现性好灵敏度高。皂苷的含量测定一般需要用适当的溶剂提取。由于皂苷在极性溶剂中溶解度较大因此提取溶剂可为各种浓度的甲醇(,)、乙醇、异丙醇、丁醇、戊醇。提取后经分离得到总皂苷成分分离可用有机溶剂如水饱和的正丁醇萃取也可用大孔吸附树脂、氧化铝等处理后溶剂洗脱。中药制剂中蒽醌类单体成分在紫外及可见光下均有强吸收测定时一般要将样品水解后再进行测定测定方法主要有薄层扫描法和高效液相色谱法。薄层扫描法为蒽醌类成分常用定量分析方法经层析分离后可在可见光、紫外光及荧光下扫描测定。高效液相色谱紫外可见光检测器测定蒽醌类单体成分具有灵敏、准确、简便等特点在含蒽醌类化合物的中药制剂分析中应用日趋增多。中药制剂中含有游离蒽醌的量一般不高且为脂溶性的故此部分多用弱极性溶剂如乙醚、氯仿等提取。苷类极性较强可以用极性溶剂提取通常是取游离蒽醌测定项下的药渣将苷提出水解成苷元后再测定也可将药渣先行酸水解然后用非极性溶剂提取苷元后测定或取待测样品先行酸水解然后用非极性溶剂提取苷元后测定其结果为总蒽醌含量从中减去游离蒽醌含量即得结合蒽醌的含量。供试品溶液制备:取本品适量切碎加硅藻土研匀加硫酸溶液充分研磨提取充分离心取酸水液置水浴上加热回流小时放冷用石油醚(,)振摇提取充分合并石油醚液挥干残渣加无水乙醇使溶解即得。对照品溶液制备:取人参二醇、人参三醇对照品分别加无水乙醇制成每mL含mg的溶液即得。薄层层析:吸取供试品溶液、对照品溶液分别点于同一硅胶G薄层板上以氯仿乙醚为展开剂展开取出晾干。检视:喷以硫酸乙醇溶液在加热至斑点显色清晰置紫外光灯(nm)下检视。()n=(tW)RR=(tt)(WW)RRH==mm()RSD=()对照品溶液测定:以二羟基蒽醌为对照品精密称取一定量加甲醇溶解。取对照品液一定量蒸干加氢氧化钠氢氧化铵混合碱显色以氢氧化钠氢氧化铵混合碱液为空白在nm波长处测定。()游离蒽醌的测定:取牛黄解毒片去糖衣研细精密称定重量精密加入氯仿一定量水浴上回流提取吸取滤液一定量用蒸馏水洗涤数次至水层无色弃去水液。氯仿层用氢氧化钠氢氧化铵混合碱液振摇萃取数次直至混合碱液无色合并碱液用氯仿洗涤数次至氯仿层无色弃去氯仿层。将混合碱液在水浴上加热数分钟至氯仿挥尽冷却移入mL量瓶中并稀释至刻度放置以氢氧化钠氢氧化铵混合碱液为空白在nm处测定。计算游离蒽醌的含量(相当于二羟基蒽醌含量)。()总蒽醌的测定:精密称取游离蒽醌项下的牛黄解毒片粉一定量加molL硫酸mL直火回流放冷加入氯仿水浴回流放冷吸出氯仿液再加氯仿反复操作至氯仿无色为止。合并氯仿层液用蒸馏水洗涤数次至水层无色弃去水液。氯仿液用氢氧化钠氢氧化铵混合碱液振摇萃取数次至碱液无色合并用氯仿洗涤数次至氯仿层无色弃去氯仿液。将碱液置水浴上加热至氯仿挥尽冷却移入mL量瓶中用混合碱液稀释至刻度放置以氢氧化钠氢氧化铵液为空白在nm处测定。计算结合蒽醌的含量(相当于二羟基蒽醌含量)。大黄:为蒽醌类成分羟基蒽醌类在碱性溶液(氢氧化钠等)中会引起颜色改变并加深多呈橙、红、紫红色及蓝色。黄芩:黄酮类成分盐酸镁粉与黄酮类成分发生还原反应生成阳碳离子而显色。取本品g研细加醋酸乙酯mL盐酸mL超声处理min滤过滤液蒸干残渣加醋酸乙酯mL使溶解作为供试品溶液。另取大黄对照药材g同法制成对照药材溶液。再取大黄素对照品加甲醇制成每mL含mg的溶液作为对照品溶液。照薄层色谱法试验吸取上述供试品溶液Lμ对照药材溶液L对照品溶液L分别点于同一硅胶G薄层板上以甲苯μμ醋酸乙酯甲酸(::)上层液为展开剂展开取出晾干置氨蒸气中熏至斑点显色清晰。供试品色谱中在与对照药材和对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点。(挥发性成分一般分子量较小具挥发性主要集中在挥发油中。挥发油中挥发性成分比较复杂在进行鉴别时用TLC有时难得到满意效果可用GC法定性或者用毛细管气相色谱法进行定性可使难分离的组分得以分离。在进行定量分析时利用其挥发性的特点采用GC法进行测定GC法具有分离效率高灵敏度高等优点能满足大多挥发性成分的要求。也可以采用GC–MS联用技术对挥发性成分进行定性或定量分析。(显色反应在挥发油成分分析中主要用于定性鉴别可用于溶液的颜色反应也可用于TLC的显色。其反应机理是利用挥发性成分结构中所具有不同的官能团可与某些试剂在一定条件下呈色如含有酚性结构的物质可与三氯化铁产生颜色反应生成具有蓝色、蓝紫色或绿色的物质具有醛基结构的化合物可与硝酸银氨试液发生银镜反应等。可利用不同的显色反应来鉴别所含成分的类别。(常用的定性鉴别方法有化学反应法、TLC法、GC法、GC–MS与GC–FTIR联用分析等方法。化学反应法较简便但专属性差干扰因素多GC法及GC–MS、GC–FTIR等联用技术要有一定的仪器设备普及性差TLC法是挥发性成分常用的定性鉴别方法具有分离效率高专属性强应用范围广操作简便等特点但当挥发油中所含成分复杂用TLC难以获得满意效果时应用受到限制。(GC–MS联用技术是挥发油成分分析中常用的一种联用技术利用GC的高分离功能MS仪作为GC的检测器具有测定分子量、快速定性和推断结构的高鉴别能力特别适合于混合物中未知组分的定性鉴别。还可修正色谱分析的错误判断利用多离子检测技术可以检出部分分离甚至未分离开的色谱峰以增加定性鉴别的准确性和可靠性也可以利用归一化法对其主要成分进行定量分析。(挥发性成分的首选定量方法应是GC法GC法具有分离效率高并采用氢火焰离子化检测器(FID)检测灵敏等优点FID是有机物的通用检测器不受化学成分性质和结构差异的影响所以对所有有机物都有响应。而HPLC(紫外检测器)只对具有共轭体系的分子结构有响应。TLCS由于分辨率低对于复杂物质的分离难以满足定量要求故GC法是挥发油最常用的定量分析方法。(HPLC和TLCS均可用于挥发油成分的分析但不及GC法应用广泛。当某挥发性成分含有共轭结构的分子时可用HPLC进行定量分析但若不含共轭结构的物质就不能使用HPLC法进行分析。若成分简单采用TLC分离较好图谱清晰也可用TLCS进行测定TLCS的特点是应用广泛由于可使用广泛的显色剂所以绝大多数化合物都可进行检测但TLC分离是其关键只有TLC分离达到定量分析要求才可用于定量测定。(GC法中的定量方法常用内标法和外标法。一般的定量分析是要求准确分析出样品中的某成分的绝对含量所以常用对照品对照法进行测定而不用归一化法分析其相对含量。内标法的优点是可减小进样误差但内标物不能影响分离效果加入内标物后给复杂组分的分离增加了分离难度是其缺点。外标法的优点是操作简便不需内标物但进样误差较大是其缺点。应根据样品的具体情况选择定量方法。(桉油精是萜类的含氧衍生物不具有不饱和结构而桂皮醛是芳香族化合物具有较强烈的紫外吸收特征其λ为nm所以前者只可以用GC法max或TLC法进行分析而后者不但可用GC法、TLC法还可以用HPLC法进行分析。(有机酸类成分中有一些不具紫外吸收的酸类物质利用薄层扫描法测定可获得很好效果其方法是选择合适的展开系统再用合适的显色剂显色后测定如脂肪酸中的苹果酸、丁二酸、丙二酸、酒石酸等可用溴酚蓝、溴甲酚绿等pH指示剂显色萜类物质如齐墩果酸、熊果酸可用硫酸乙醇、磷钼酸试剂等显色显色后可产生颜色均匀、稳定的斑点再进行扫描测定。一些具有荧光的物质如阿魏酸、绿原酸也可不经显色直接进行测定。(齐墩果酸和熊果酸都具有双键但不具有共轭双键所以具有末端吸收若用HPLC(紫外检测器)检测时灵敏度较低。超临界流体色谱法是以超临界流体为流动相它既不是气体也不是液体兼有气体的低粘度液体的高密度以及介于气、液之间的较高的扩散系数等特征并且可以使用GC的检测器(FID)这样就既具有HPLC的高分离性能又具有GC(FID)的高灵敏度的通用检测器的性能特别适合于象齐墩果酸、熊果酸这样一类挥发性差紫外检测器检测不灵敏的一类化合物的分析。(香豆素类成分大多具有荧光性质可利用其荧光性质进行定性、定量分析。在定性分析中可以采用溶液荧光法但干扰因素较多适合于药材鉴定也可用薄层荧光法即TLC分离后置紫外光灯下观察斑点荧光此法可用于制剂分析具有较高的专属性和灵敏度。在定量方面可先测定样品的荧光光谱选择测定(发射)波长用光谱法测定也可利用TLC分离后不经显色直接测定其荧光强度具有较高的灵敏度和专属性。(梓醇属于环烯醚萜苷类成分对热、酸较敏感结构中有一双键所以只能产生末端吸收λ约为nm。在进行含量测定时可利用末端吸收用HPLCmax(紫外检测器)测定如果在TLC上可得到较好的分离也可用TLC分离经显色后用TLCS测定。(栀子苷中具有α、β–不饱和羰基结构具有较强的紫外吸收λmax为nmLgε为所以可用HPLC(紫外检测器)法测定具有较高的灵敏度也可用TLC分离后用扫描法测定吸附剂可用硅胶GF进行荧光熄灭测定也可用显色法测定荧光熄灭测定不必显色误差较小。(计算分光光度法(双波长、三波长、导数、正交函数分光光度法等)具有不经分离可直接测定混合物中的某一组分的优点但其测定条件要事先选定而且是在干扰组分相对固定基础上选择好测定条件后才具有普遍意义。但中药制剂由于众多原因干扰组分(阴性)很难达到以上要求所以计算分光光度法在中药制剂中的应用受到限制在一定条件下可测定某样品中的成分含量不具有普遍意义。(环烯醚萜苷类成分的定性方法常用薄层色谱法以硅胶G和硅胶GF为吸附剂。具有共轭双键的物质紫外吸收波长较长在硅胶GF板上可产生荧光熄灭可用硅胶GF为吸附剂如栀子苷、龙胆苦苷、獐牙菜苦苷等不具共轭双键的可用硅胶G吸附剂用硫酸乙醇、茴香醛试液、香草醛硫酸试液和对二甲氨基苯甲醛–硫酸溶液等为显色剂显色后鉴别。也可用聚酰胺薄膜色谱进行鉴别。(环烯醚萜苷类中的某些成分具有荧光但荧光强度较弱如龙胆苦苷等可加入荧光增强剂使其荧光强度增强如加入脲素增溶的β–环糊精(CD)溶液其原理是β–CD具有中空圆锥形结构腔内的疏水区微环境改变可达到增溶作用。龙胆苦苷可嵌入β–CD所具有的中空圆锥结构中使其在胶囊中溶解度增大相互碰撞几率减小荧光量子产率提高有利于荧光强度的增加进而提高测定的灵敏度。六、计算题()设一元线性回归方程:A=bCaC=A=C=A=CA=Cn=An=l=C(C)n=l=A(A)n=ccAAl=CACAn=CA根据公式得b=ll=a=AnbCn=CAccA=C()利用上述一元线性回归方程得C=(A)=’C=C×=mgml()A=C=L=利用公式A=kCLE=kM得E=kM=()利用公式A=kCLC=AKlm=CVM=(×××)××=益心酮片中芦丁(CHO)的含量为:m×,=
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