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以高劑量(15 mg/kg)內毒素(endotoxin, lipopolysaccharide)予大鼠股靜脈注射,進入週邊血液循環,內毒素會刺激免疫細胞,使之釋
放引起發炎的細胞介素(inflammatory cytokines),在0.5-2.0 h 之後,會引發腸道發生廣泛的發炎反應,這是由於許多小靜脈發生血漿滲漏
(plasma leakage)而造成,我們用印地安墨汁(India ink)標識滲漏小靜脈(leaky venules),然後做好腸道的整裝標本(whole mount),以形態計量學...
考生编号
以高劑量(15 mg/kg)內毒素(endotoxin, lipopolysaccharide)予大鼠股靜脈注射,進入週邊血液循環,內毒素會刺激免疫細胞,使之釋
放引起發炎的細胞介素(inflammatory cytokines),在0.5-2.0 h 之後,會引發腸道發生廣泛的發炎反應,這是由於許多小靜脈發生血漿滲漏
(plasma leakage)而造成,我們用印地安墨汁(India ink)標識滲漏小靜脈(leaky venules),然後做好腸道的整裝標本(whole mount),以形態計量學方法,算出滲漏小靜脈的面積密度,藉以評估血漿滲漏程度,
為正常者的2.5-5.0倍(見圖C、圖D)。
消化道發炎,常引起黏液分泌(mucus secretion),小腸黏膜表面的上皮組織(epithelial tissue)有很多儲存黏液的杯狀細胞
(mucus-storing goblet cell)(見圖A、圖B)。在內毒素引起發炎之時,
引發黏液之分泌作用之程度,要以病理組織切片,做顯微研究分析。
研究內毒素引起的小腸杯狀細胞之黏液分泌作用
(1)動物實驗:大白鼠在以戊巴比妥(50mg/kg體重)行腹膜腔內注射麻醉之後,予其股靜脈注射一劑印地安墨汁(1ml/kg體重),接者又從靜脈注射一劑內毒素(15mg/kg),待1小時之後,切開胸腔由左心室灌注含
甲醛、戊二醛的0.05 M phosphate buffer, pH7.4,進入血液循環為時
數分鐘之久,此舉為了固定器官系統的組織細胞,以便取下器官,做
病理組織學研究。以上為注射內毒素的實驗組,內毒素的溶劑為生理
食鹽水(saline),對照組動物予以靜脈注射saline(1 ml/kg),也是待1
小時之後灌流固定,取下小腸研究之。
(2)小腸切片之製備:實驗組與對照組各取一段約0.5cm 常的小腸組織,依次以70%、80%、90%、100%丙酮各脫水1小時,殘後用塑膠包埋劑glycol methacrylate滲透、包埋,然後用裝在切片機的玻璃刀,
切製厚度為3 , m 的塑膠切片,以Alcian blue染色,接著用periodic acid處理,最後用Schiff reagent染色,這種組織化學染色法,可以展
現杯狀細胞。
(3)小腸整裝標本之製備:取3cm常的實驗組與對照組老鼠的小腸管,
予以縱向剪開,夾在兩個載玻片之間,用99.5%酒精脫水數天,使之
展平,再進一步用100%酒精脫水數天及用油溶性溶劑滲透使之透明
後,封膠做成整裝標本,此舉為了展現滲漏小靜脈。
(4)顯微相片之製備(見圖A、B、C與D)。
(1)提供給每位同學2張橫切面小腸切片,一片為對照組(注射完saline 1 h 之後),另一片為實驗組(注射完endotoxin 1 h 之後)厚度為3 , m,已用Alcian blue 及periodic acid – Schiff reagent染色過。
(2)提供給每位同學1張彩色顯微相片,圖A、圖B為小腸切片200倍的顯微圖片,展現絨毛的組織結構及細胞種類,杯狀細胞儲存黏液(糖蛋白),Alcian blue 及periodic acid – Schiff reagent將之染成紅色或藍色。圖C、圖D為小腸整裝標本的40倍的顯微圖片(註:沒有提供此整裝標本)。
(3)提供給每位同學1台光學顯微鏡,在顯微鏡下研究小腸杯狀分泌活
動,區別釋放黏液杯狀細胞、未釋放黏液杯狀細胞,釋放黏液杯狀細
胞將黏液排放至絨毛之間空隙(space between villi如圖A、圖B),其細胞質突出深入絨毛空隙,有的細胞已將細胞質裡的黏液排空。未釋
放黏液杯狀細胞,則是細胞質裡充滿黏液,沒有突入絨毛間隙的現象。
每一玻片選一切片,各舉出三個絨毛間隙的下列數據:
每一絨毛間隙的釋放黏液杯狀細胞數目
每一絨毛間隙的未釋放黏液杯狀細胞數目
每一絨毛間隙的杯狀細胞總數(包括以上兩者)
釋放黏液杯狀細胞數目的百分比%
未釋放黏液杯狀細胞數目的百分比%
在三個絨毛間隙的杯狀細胞以上數據的平均值
實驗結果之紀錄、圖解、討論與結論
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