胚胎植入期二硫化碳暴露致小鼠子宫内膜细胞dna损伤与凋亡的研究

胚胎植入期二硫化碳暴露致小鼠子宫内膜细胞dna损伤与凋亡的研究 胚胎植入期二硫化暴露致碳 小鼠子膇膜膇胞内DNA膇膇凋亡的究与研 密 膇: 学号:功,膇彩 ◎ 厶 茹膇孑 膇士位膇文膇文膇目学:丕侈礁入瑚;膇膇破暴景歇,膇膇售 内旧匀研袤暇‘膇月函功膇‘?引膇云?最膇膇刊膇呷 弋;膇‖; “ ’叩阢,‰砌, 夕彩巴,砒比膇膇易汐膇‖ 似“?如以口膇膇 作 膇 膇 膇 膇 合作膇膇 年 汐/口 月日原膇性明?声 声明:所呈交的位膇文学,是本人在膇膇的指膇下,独 立膇行究所取得的成果。除文中已膇注明引用的容外研内,本膇文不包含任何其他人或集已膇膇 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 或撰膇的科成果。膇本文的个体写研研 究作出重要膇的人和集献个体,均己在文中以明方式膇明。本明确声的法律膇任由本人承。担 膇文作者膇名:芝&膇皇 期:塑』盆冽盔 膇于位膇文使用授膇的明学声 本人完全了解山膇大有膇保留、使用位膇文的膇定学学,同意学校保留或向家有膇部膇或机送交膇文的膇印件和膇子版国构,允膇膇文被膇膇和借膇;本人授膇山膇大可以本位膇文的全部或部分学将学 内数容膇入有膇据膇膇行膇索,可以采用影印、膇印或其他膇制手段保存膇文和膇膇本位膇文。学 保密膇文在解密后膇遵守此膇定 日 膇文作者膇名:芝膇三膇膇膇名盔:乏趣 期:塑盆膇目?英文摘要躯 常膇膇略膇膇明 引 言?. 正文部分??。 第?部分胚植入期暴露致小鼠胚胎毒性究。眙研 第二部分胚胎植入期暴露致小鼠子膇膜膇胞膇膇究内研 第三部分胚胎植入期暴露致小鼠子膇膜膇胞凋亡的究内研?膇膇。 膇新不足与?. 参献考文??~ 致射?. 攻膇位期膇膇表的膇膇文目膇学学.山膇大膇士位膇文学学 ??.?...?... ......??...??.?.??.?..?...?..??.?.?..?.?...?..??.. ?山膇大膇士位膇文学学 ?中文摘要 研究背景 二硫化 碳,是工膇上常用的有机溶膇,也是生膇人 造膇膇、璃膇等膇多化物膇的原材料。此外玻学,在橡硫化、谷物熏蒸、浮膇、胶 石油精制、石溶解以及油脂提取等工膇生膇膇程中都有可能接。由于我蜡触 国装国是服生膇大,膇行膇于膇膇密集型行膇属,膇人多从数众,特膇在人造膇、人造毛等膇膇企膇中,女工占相大的比例。当 具有多系膇毒性,可引起中神膇系膇和周膇神膇系膇的慢性膇膇枢,膇膇膇系膇、膇系膇、前庭功能、心血管系膇和生殖系膇都有一定的影。在膇听响 生殖毒性的究中膇膇研,可膇致男工性功能障碍,睾丸萎膇,精子目数减少、活膇力下降和畸形精子增多;接女工多膇月膇周期常、触异痛膇、膇期延膇、血量增多,更膇重的可引起膇孕女工自然流膇、死胎死膇等膇象。本膇膇膇膇欲生育的作膇女工膇行前瞻性究膇膇研,作膇女工受孕膇膇延膇,使膇作膇女工膇得一次膇床可膇膇妊娠的概率明膇降低;外膇膇另早早孕膇失率增加,近半受数精卵不能正常着床而膇失。膇明膇胚胎早期膇育有膇膇作用。膇了膇一步膇膇的胚胎毒性并探膇其毒作用机制,本膇膇膇建立了小鼠膇物模型。膇物膇膇膇膇,卵泡膇育期和胚胎植入期暴露,均可膇致小鼠胚胎膇育障碍和胚胎植入目数减少,膇膇胚胎植入期是致胚胎膇并个育毒性的一敏感毒作用位点,但是目前膇于胚胎植入障碍机制不尚清内楚。已知良好的子膇膜容受 性 是胚胎膇利植入的前提件条,但膇于子膇膜容内研受性的膇膇究膇道甚少,尚缺 少用于膇膇和膇价早期生殖膇膇效膇的敏感膇察指膇。以上膇膇膇膇膇性暴 露女工膇膇保膇 措施 《全国民用建筑工程设计技术措施》规划•建筑•景观全国民用建筑工程设计技术措施》规划•建筑•景观软件质量保证措施下载工地伤害及预防措施下载关于贯彻落实的具体措施 的修膇和膇施至膇重要。山膇大膇士位膇文学学研究目的 建立植入期暴露致胚胎毒性膇物模型,膇膇植入期暴露膇子膇膜膇内胞膇膇和膇胞凋亡的影作用响,分析小鼠胚胎毒性、子膇膜膇胞膇内膇和膇胞凋亡程度与暴露强度之膇膇系,以揭示植入期暴露致胚胎毒作用 机理,膇暴露女工膇膇膇膇保膇措施的修膇和膇施提供理膇依据。研究方法 .膇膇膇膇 .胚胎植入期小鼠暴露,孕天 膇察胚胎毒性; .膇取胚胎植入期小鼠子膇膜内,制膇膇膇胞以建立利用小鼠子膇膜膇内胞膇膇膇膇的究方法研,利用外膇膇膇膇其膇膇致膇膇的体敏感性;.胚胎植入期小鼠暴露膇膇体内, 膇取子膇膜内,制膇膇膇胞膇液,用技膇膇膇膇膇; .胚胎植入期小鼠暴露,制膇 子膇膜膇胞内,用流式膇胞膇/染色法膇定膇胞凋亡; .胚胎植入期小鼠暴露,制膇 子膇膇膇石蜡切片,用方法膇定膇胞凋亡。 .膇膇膇物及分膇: 清膇膇?性成熟昆明膇小鼠,雌性重膇体.;雄性小鼠 .,膇膇膇膇。雌鼠与雄鼠:合膇受孕。膇到膇栓日膇即孕天 ,按体随重机分膇。 .促排卵膇理: 腹腔注射 。 ,后腹腔注射 .染毒膇理: 染毒膇膇:.,膇次暴露; 染毒膇量:. 即./膇低膇量,. 膇中膇量,. 膇高膇量;溶膇膇橄膇油; 染毒方式:腹腔注射; 染毒容膇:./重。体 山膇大膇士位膇文学学 .膇膇方法: .膇膇胞凝胶膇泳技膇:考方法参稍作改膇,建立适用于膇膇子膇内膜膇胞的膇膇方法。膇光膇微膇采集膇像,系膇自膇分析各膇指膇,.膇膇膇件分析数据。 .流式膇胞膇膇膇胚胎植入期子膇膜膇胞凋亡内:制膇子膇膜膇胞膇内液,流式膇胞膇 /染色法膇定膇胞凋亡程度。 .脱氧苷核酸末端膇移介膇的缺口末端膇膇法膇膇膇胞凋亡:制膇石蜡切片后,根据膇氏公司膇膇盒膇明膇膇膇胞凋亡程度。.膇膇分析方法 采用 .建立据膇数,膇量膇果均以?表示;方差膇性膇采用膇膇;方差不膇膇采用.膇膇量膇膇;采用最小膇著差 膇膇方法膇行膇本膇比膇。膇膇膇膇两两学水准膇定膇.。研究膇果 .胚胎植入期暴露致小鼠胚胎毒性究膇果研 胚胎毒性:高、中、低膇量暴露膇小鼠胚胎植入目明膇数降低,分膇比膇照 膇减少了.%、.%和.%尸..;膇胚重明膇降低,分膇比膇照膇减少了.%、.%和.%.;胚胎膇重均明膇降低,分膇比膇照膇减 少了.%、.%和.%.;校正胚胎植入后数,各膇的胚胎均重与膇照膇相比差无异学膇膇意膇尸.。 母体毒性:胚胎植入孕鼠的重体胗增加膇和肝膇重量膇化均不明膇.,母体毒性膇小。 .胚胎植入期暴露致小鼠子膇膜膇胞膇膇的究膇果内研 体外膇膇膇果:建立膇膇胞凝胶内膇泳技膇膇膇子膇膜膇胞膇膇的膇膇方法,在膇光膇微膇下可膇正常膇胞和膇膇典型彗星膇胞膇像。不同暴露膇量%、 的 %、、、、膇与照膇相比,差异均有膇 %、 膇意膇学火.。 %、、、暴露膇与量 之膇回膇系分膇膇数..、.、.、.、..。 体内膇膇膇果:低、中、高膇量暴露膇的膇膇指膇 %、 山膇大膇士位膇文学学 %、、、膇与照膇相比膇,差异学均有膇膇意膇尸.。中膇%、 量、高膇量暴露膇的比膇照膇增加了.和.倍..。 %、、、暴露膇与数量的回膇系分膇膇..、.、.、.、.,差异学有膇膇意膇.。 .胚胎植入期暴露致小鼠子膇膜膇胞凋亡的究膇果内研 植入期小鼠子膇膜膇胞凋亡膇果内: /染色法膇膇小鼠子膇内膜膇胞凋亡率膇膇,中膇量和高膇量暴露膇膇与照膇相比,凋亡率分膇增高.%、.%,差异学有膇膇意膇.。 方法膇膇小鼠子膇膜膇胞凋亡内况率的膇化情膇膇,中膇量和高膇量暴露膇的凋亡率与膇照膇相比,凋亡率分膇增高.%、.%,差异有膇膇 学意膇..,此膇果和 /染色法膇膇的膇果相一致。 膇膇 .胚胎植入期暴露可膇致明膇的胚胎毒性,表膇膇各暴露膇量小鼠胚胎植入目明膇数减少,存在胚胎膇失膇象。 .胚胎植入期暴露可造成子膇膜膇胞膇膇和子膇膜膇胞凋亡内内,子膇膜膇胞膇膇程内确度增加呈膇出明的膇量反膇膇系。提示胚胎植入期暴 露可能通膇膇膇子膇膜膇胞影其容内响受性,膇致胚胎植入障碍。膇膇膇:二硫化碳;生殖毒性;膇膇;凋亡;植入: , , ,. . . ., 膇 ,. .. , ? ? . .. , , .. 山膇大膇士位膇文 ’ 学学 . .. , .: ., . .:.:. . . :: /, . ,. ./,. ./ . .. , . ./ . : . 山膇大膇士位膇文学学 , 晰 ’ .,, . .. . .,. . : , .%,.% .%;.%,.% .%;.%,.% .%.. , .. . 啦皿丘膇 哇膇出孚 磋膇 州畦膇膇弘 .. .. : %, %, , , , . %, %,,, .,.,.,. .,尸.. : : %, %, ,. . , . . .,.. %, %,,, 山膇大膇士位膇文学学 一.,.,.,. .膇.. . 膇 : 也 ./, .%.%, ., .,...% .%, . . . .. “? .. , . ., . : ; ;;二硫化碳 黝 .硫代膇膇膇.膇酸膇膇胞凝胶膇泳技膇 孕膇血清促性腺激素 人膇毛膜促性腺激素 半数致死膇量 八方差分析膇孕天核酸末端数脱氧苷膇移介膇的缺口末端膇膇法碘化丙膇 山膇大膇士位膇文学学 引 言 胚胎植入期二硫化暴露致碳 小鼠子膇膜膇胞膇膇凋亡究内与研 二硫化碳 ,是一膇工膇上广泛膇用的有机溶膇和化工 原料,主要用于粘胶膇膇生膇。在此膇程中,性膇膇与碱素反膇,膇生膇膇素磺碳原酸膇和三硫酸膇;膇膇膇槽生成粘胶膇,通膇硫酸凝固膇人造膇膇,膇放出多余的。外另,也用于璃膇和玻碳四膇化制造,橡硫化胶,谷物熏蒸、衣物去膇膇、石油精制、清蜡国装漆、石溶解等【】。我是世界上最大的服生膇基地,膇生膇行膇接人多触数众,特膇是膇膇工膇以女工接膇触主。主要通膇呼吸道膇入人体内,皮膇膇入量少很,常可忽略不膇。膇呼吸道吸收的有%被吸收。吸收的有%%呼从气出中排出,而以原形尿液从中排出者不足%,也有少量母乳从、唾液和汗液中排出;/%在体内膇化,以代膇膇物的形式从尿中排出。其中,一硫代膇膇膇.膇酸,是的主要代膇膇物。 .一 膇生部膇定膇膇的膇膇内加膇平均容膇膇度.:是/。在 “膇于印膇《高毒物品目膇》的通知”中其将列膇高毒物膇,膇定其短膇膇接触容膇膇度.膇 /。 是多系膇毒物【羽,膇神膇、心血管、生殖、膇、膇膇、血听液、肝膇、膇膇等多系膇均有毒性作用,但是膇膇暴露多膇膇神膇、心血管和生殖系膇。是膇神膇毒物,中毒主要表膇膇神膇系膇受膇,膇期密切接可出膇多触 膇性周膇神膇病,神膇.肌膇膇改膇或中毒性膇病等膇床表膇。有人膇道,暴露能引起作膇工人的、膇神膇的膇膇腓踝运速度下降,且具有明膇的膇量反膇膇系【刀。宋福永等【研究膇膇,膇慢性染毒能膇引起大鼠明膇的神膇行膇学改膇,出膇周膇神膇系膇和中神膇系膇的功能常枢异,所引起的神膇毒性于周属膇中枢混合型神膇病膇,明膇膇害中神膇系膇枢,膇物共膇失膇明膇,震膇明膇,膇生率高,膇似于帕金森膇合症,症状僵状膇重的膇物出膇直症。膇萍【】通膇流行病学异膇膇膇膇膇膇慢性膇度中毒的患者中高血膇、高血脂、心膇膇常的膇生率均膇著高于膇照膇,可膇膇期高膇度接可膇心血管系膇膇生影。触响 山膇大膇士位膇文学学 自本世膇七十年代起,二硫化的生殖毒性已引起膇多者的膇注碳学,膇行并了大量的究。外均有膇研国内道,可膇致男性接者的性功能触改膇【膇。蔡世雄】掣膇:名在膇度膇.匕./的作膇膇境下工作的膇膇男工膇 行膇膇膇果膇示,精子畸形率%者多达.%、精子活膇率%者多达.%,均高于膇照膇,.;精子数万/者多达.%。 等【】膇名 接工膇大于年的男工膇行膇膇触,膇膇其子代流膇率和活胎的比膇与父代等【膇道,雄性大鼠吸入 接膇触度相膇。 /舌,第周精 子数减量膇著少,在周的并内减吸入期持膇少。 膇女性生殖机能有一定的影。可以膇致接女工的月膇周期影响触异】,主要表膇膇月膇周期延膇或膇短、月膇紊乱、痛膇、膇期延膇、血量增多,以月膇膇多膇合症膇期延膇、膇量膇多、周期膇短膇膇常膇,少数人表膇膇月膇膇少。膇国掣研元究膇膇,接膇触平均膇度膇. /,平均工膇膇. 年的女工月膇常异达率高.%,是膇照膇的.倍,且工膇越膇其常异率越高。】也膇道了接的女工月膇常触异率高于膇照膇。工膇小于年的【】膇道了 作膇女工月膇常异患病率膇高,而且以周期常常膇。异 名膇期接膇触度膇.~./的作膇女工膇膇膇生率膇.%,高于 膇照膇的.%膇照膇人,膇膇膇膇提前,膇期接膇月膇周期触乱紊的膇生率增加.,性欲降低:.,膇膇膇膇女性的性激素分泌也有 影响,如血中清雌膇、雌二醇、孕膇和.膇孕膇分泌明膇降低氏.。此外,膇女性生殖膇局也有一定的影。有膇料膇响示,接可使女工易膇生触 自然流膇,尤其是妊娠周以的内研早期自然流膇。】的究膇示,接年以 触膇度膇/的作膇女工流膇危膇增加。膇道接触 上的女工,自然流膇率高达%,比膇照膇高倍。 【】也做了相似的膇道。膇国元等【】膇膇名作膇女工,膇膇膇的她自然流膇率膇.%,明膇高于膇照膇.%,人。但是 】通膇社自然流区 膇率研究膇膇,作膇女工的自然流膇率膇.%,膇与照人群无明膇差膇。】将个胶上海市膇膇生膇名作膇女工暴露膇膇厂与至少膇年膇名膇膇女工生厂状况育比膇,也未膇膇自然流膇率增高。膇于是否膇致其接女工膇生触自然流膇,尚学学无一致膇膇。膇物膇膇膇膇膇生殖膇胞有一定的山膇大膇士 位膇文 膇膇作用。膇等青【用/膇度膇性成熟昆明膇雌性小鼠膇行吸入染毒,膇果膇示,可使雌鼠卵母膇胞染色畸体膇率增高.%。曾膇民等【】用不同膇度的膇性成熟雌性鼠一次性灌胃、、 /和 多次吸入、、/染毒,收集卵母膇胞和受精卵作膇胞膇膇学 分析,膇膇 卵母膇胞染色非整倍率体体一次性灌胃染毒的膇.%、.%、.%;多次吸入染毒的分膇膇.%、.%、.%,分膇与各自的膇照膇.%、.%比膇,差异学有膇膇意膇.。一次性灌胃膇膇的 小鼠受精卵雌原核染色非整倍率体体膇.%、.%、.%,后膇膇膇两与照膇.%比膇,差异学也有膇膇意膇..。可膇,能膇膇小鼠卵母膇 胞及受精卵雌原核染色非整倍率增加体体。 本膇膇膇【‘】采用前瞻性究膇膇作膇女工研触受孕膇膇延膇名接作膇女工第月膇周期个妊娠率膇.%,前月个累膇膇膇妊娠率膇.%,年内累膇膇膇妊娠率膇.%,均明膇低于膇照膇的.%,.%和.%, 膇分膇膇.,.和.,作膇女工的受孕膇膇随触着接膇度增 加而延膇。作膇女工早早孕膇失率膇.%,明膇高于膇照膇的.%,差异有膇膇意膇。由于学学研流行病究膇膇作膇女工自然流膇和早早孕膇失率均明膇增高。本膇膇膇’膇健康昆明膇小鼠予以卵泡期、胚胎植入、胚胎植入后期腹腔注射染毒./构建膇物模型,膇果膇膇,卵泡期和植入期染毒,小鼠子膇和胎膇膇量比膇照膇明膇膇减,差异学有膇膇意膇.。胚胎植入期染毒膇小鼠胚胎膇膇失高数于膇照膇,差异学有膇膇意膇.。本膇膇膇的一膇膇膇膇果膇另示,卵泡膇育期和胚胎植入膇期染毒均可膇致膇胚重量减,膇膇膇照膇分膇减少了%和%,差异学有膇膇意膇. 和.。胚胎植入膇期染毒膇胚泡植入膇和子膇数数与减腺膇照膇相比少,差异学有膇膇意膇.。由此可膇,除了通膇影响卵母膇胞膇致膇育毒性以外,胚胎植入期也是毒性作用的一另个敏感位点。小鼠在孕前期和胚胎植入期染毒,可膇致明膇的胚胎毒性,尤以胚胎植入期膇毒作用最膇敏感。同膇我膇膇膇膇,可膇致胚胎植入期胚胎和子膇膜内达异粘附性分子表常,膇可能是膇致胚胎植入障碍的重要机制之一。 胚胎植入又着床称,是一膇膇的膇程个,需要胚胎子膇都膇在生膇膇与育的 山膇大膇士位膇文学学 膇膇膇段,也就是子膇膜容内状与受性膇内受精卵膇育同步。而子膇膇膜容受性是指在着床窗期,子膇膜接内状受胚胎着床的一膇膇合膇,包括子膇膜内厚度、腔上皮、腺上皮及膇膇的膇育状内状膇及子膇膜的血供膇,此膇子膇膜内受激素、膇胞因子、黏附分子及糖蛋白等多膇因素的膇膇,膇生一系列的膇化,如子膇内膜血管增加,局部水膇,使整合素、白膇胞介素.、自血病抑制因子?、肝素?表皮生膇因子..等内皮腺分泌活膇加强等,膇而到达具有容受胚胎着床的能力【。 在膇胚泡植入障碍机制的究中研,采用植入期小鼠子膇膜膇胞内,若植入期子膇膜膇胞存在膇膇或是膇生凋亡内,就干会响内膇膇胞功能膇而影子膇膜容受性的形成和膇持,从体内母的子膇膜容受性的角度,探膇外膇境有毒物膇膇胚胎植入的影。响 山膇大膇士位膇文学学 技膇路膇 性成熟雌性小鼠交配受孕 上 上 .染毒 制名 膇膇胞 上 上 、 胚胎 子膇 膇膇胞外体染毒 上 上 制膇膇膇胞 制膇石蜡切片 上、 , 上可 膇膇子膇膜膇胞 膇定子膇膜膇胞内内 膇察胚胎 膇膇 凋亡情况 毒性 膇胚胎植入期二硫化暴露致小鼠子膇膜膇胞膇膇凋亡究碳内与研技膇路膇膇第一部分胚胎植入期暴露致小鼠胚胎毒性究研 本膇膇膇通膇前瞻性流行病学膇膇膇膇,在自然流膇率等妊娠膇局无明膇异常的前提下,暴露的作膇女工受孕膇膇延膇,早早孕膇失率增高。膇物膇膇膇膇,暴露可膇致胚胎植入目数减少,胚胎植入期是毒作用的一个敏感膇膇,但是前期究膇研示,暴露膇量膇. 即./,膇膇暴露 天,孕鼠仍存在膇微的母体研将毒性。本次究膇大膇本含量,膇立不同暴露膇量,旨在膇一步确响膇膇胚胎植入的影、比膇不同膇量染毒膇胚胎膇育毒性作用差异,以探膇膇育毒性作用机理。 .材料方法与 .膇膇膇物 膇用膇膇清.性成熟昆明膇小鼠,由山膇大膇物膇膇学室提供膇物合格膇膇号:膇。雌性重膇体?;同膇雄性膇膇膇膇, 雄性?。小鼠自由膇食,自然采光,室控温制在左右,湿度%%。在膇膇前小鼠适膇膇膇膇境一周。按体随将重机雌性小鼠分膇膇。.膇膇膇器与膇膇 分析膇膇天津市广学成化膇膇有限公司膇品;孕膇血清 和人膇毛膜促性腺激素膇杭州膇物膇品厂膇品;三蒸水;橄膇油。.染毒膇膇 . ..染毒膇膇:根据小鼠的胚胎植入膇生在受孕后的第.天到第.天 .】,所以本次膇膇的染毒膇膇定膇.染毒。 ..染毒膇量和溶膇:根据前期工作得到雌性小鼠膇腹腔注射的./,膇膇本次膇膇的膇量膇. 即./膇高膇量, . 膇中膇量,. 膇低膇量。以橄膇油作膇溶膇,溶液均膇在染毒当日配置。 ..染毒方式和容膇:采用腹腔注射染毒,根据孕鼠染毒当体确天重定的用量,每天注射膇膇膇体./重。体 山膇大膇士位膇文学学 ..膇照膇膇理:根据小鼠的重注射所体需的橄膇油,膇理方式同染毒膇。.促排卵膇理 雌性小鼠腹腔注射,后腹腔注射,按雌雄:合膇, 次日膇膇膇栓堵在小鼠膇道口膇的白色蜡膇物膇,膇到膇栓日膇膇孕第天,膇膇 重。膇膇合膇三体天未膇膇栓者,弃去。 .膇本采集 膇膇期膇膇膇雌鼠重体; 膇椎臼脱膇死不同膇量膇孕鼠,剖腹取子膇、卵巢及肝膇,系膜和脂剥离肪膇膇后膇膇吸干;子膇从数角剪膇子膇壁膇每只子膇角的胚泡植入目数;膇子分析天平量称子膇和胚泡膇重量,同膇取称卵巢及肝膇重量。 .膇膇方法学 .建立据膇数,膇量膇果均以?,表示;方差膇性膇,膇行,膇膇: 方差不膇膇,采用膇膇量膇膇【,,最小膇著差膇膇 方法膇行比膇。膇膇膇膇两两学水准膇定膇.。 .膇文中涉及的膇膇名膇 ?胚胎毒性:通常指外源性理化因素造成的孕着床体前后直到器官形成期膇束的所有毒性。 ?母体毒性 :是指化毒物膇学体母膇生的膇膇作用,表膇 膇增重慢、功能常、膇减异状床症,甚至死亡。目前常用增重慢和减来死亡率表 示。 ?胚胎植 :胚泡植入是哺乳膇物生殖中的膇膇膇膇,是从内号将受精卵植入子膇膜膇始的一系列膇胞、分子信膇膇膇程。胚泡自己包埋膇子膇膜的内个称整膇程膇植入,也称着床。 ?胚胎植入期:胚从泡膇入子膇到植入完成的一段膇膇。小鼠一般膇孕...天。 .膇果 .植入期不同膇量暴露膇所有孕鼠的影响 在胚胎植入期 .天以不同膇量暴露,膇膇期膇膇物无死亡膇象,且生膇良好。天和 天孕鼠重和体体体孕鼠重增加膇 天重一天体重在各膇之膇比膇,差异学均无膇膇意膇。但是,中膇量暴露膇山膇大膇士位膇文学学 的孕鼠肝膇重量低于膇照膇,同膇也低于低膇量暴露膇,差异学有膇膇意膇氏.。中膇量暴露膇和高膇量暴露膇的孕鼠卵巢、子膇重量与膇照膇相比,低于膇照膇,差异学有膇膇意膇氏.。低膇量暴露膇的孕鼠肝膇、卵巢、子膇重量与膇照膇相比差膇不大。膇然孕鼠低膇量. 暴露未膇明膇的母体毒性,但是高膇量. 卯和中膇量. 暴露膇母仍体 有膇小毒性。同膇也提示肝膇、卵巢、子膇是毒作用的靶器官,膇表。.植入期不同膇量暴露膇有胚胎植入孕鼠的影响 表在分析暴露膇所有有胚胎植入孕鼠雌鼠合膇后,次日膇膇有膇栓的膇孕鼠影膇膇膇响,低膇量暴露膇各膇膇察指膇和膇照膇相比,差异均无膇膇意膇学.。中膇量暴露膇和高膇量暴露膇除了子膇重量低于膇照膇分膇降低.%和.%。.外;其他各膇指膇膇然低于膇照膇, 但是差异没学有膇膇意膇.。 .植入期不同膇量暴露膇无胚胎植入孕鼠的影响 膇植入期暴露不同膇量的无胚胎植入的孕鼠的据膇行方数差分析膇膇,各个体体膇量暴露膇重、重、子膇重量都低于膇照膇,但是差异没学有膇膇意膇.。膇与照膇相比,低膇量暴露膇的肝膇重量降低了.%;中膇量暴露膇中的重体增加膇、肝膇重量分膇降低了.%、.%;高膇量暴露膇中的重体增加膇、肝膇重量、卵巢重量分膇降低了.%、.%和.%,差异学均有膇膇意膇:.。此外,高膇量暴露膇的卵巢重量低于低膇量暴露膇,差异学有膇膇意膇氏.,膇表。 .植入期不同膇量暴露膇胚胎膇育和胚胎植入的影响 暴露不同膇量的后,各膇的植入目、膇胚重数量、胚胎重量均低于膇照膇,差异学有膇膇意膇尺.。中膇量暴露膇和高膇量暴露膇的子膇重量分膇比膇照膇低.%和.%,差异学有膇膇意膇.。但是校正胚胎植 入目膇其影后数响,不同膇量暴露膇的胚胎均重胚胎重量/植入目膇数与照膇相比,差无异学胗膇膇意膇.,膇表。以染毒膇量作膇自膇量, 以胚胎植入目作膇数因膇量膇做回膇分析,膇膇胚胎植入目数与染毒膇量成膇膇性相膇.,.。 膇姐 葛.出【. 寸.。。。膇.。.?。.暑. .。.。』.膇膇器 膇., 。【。.千 . ”。。.。。。.。。.芊譬。 .?。.。尊。.。.寸 . 膇蝴基士 葛。芊?. ?岔.。州寸?..【卜.。膇??卜. ..千。. .一 . 最膇靶薄 葛.千. 。.走?. .。口. 寸.卅.。双扑糖膇捺忙昧膇 峪卜.一 .人 膇跫 。膇.【衰 。卜.。?. 心. 千?裔 口.刊卜. 膇秘迥扑扑膇隧膇 善醯膇膇忙蕊靛靶略膇膇嘲罹匠膇 .一 .人 膇堆 ?.膇芯. 。卜.坩.。心. 莆.。 卜.。州.懈 ? ”.【 ? 寸【 膇膇臀 阻 暴黑 膇膇 舞匿捉 鼎皓嘴膇膇膇 鼎嘴膇嘲罹警 膇皓膇膇膇恒嘲基螺。最.啐事?。燃 。双扑霸糖膇螺忙膇梢.羞膇膇膇膇肇冥襄匪胛靛: .羞器鼎匿靛膇喇.。膇膇膇膇螺。景昌.凰 ?嗽。?. . .?. 膇膇膇士 卜?.膇式曩惝埝膇膇膇 .寺?. 卜.尊..【卜.?。. ”.【. . 膇蛙 .膇卜.?.制卜.??.尊?.寸 ?卜..寸 寸.制?.寸 膇秘迥扑扑怕膇隧 銎膇 卜.』。口奇. 膇蛞.【 .??. ?膇..【州?卜.寸.直.寸寸.膇 忒. .卅?. ? 卜 蜃醯暖警耳忙幢嘴窖静靶靛靶?膇膇匠膇群 纂膇稃 陬 蒹 膇膇 黑匪霞 黑暗膇膇膇 廿《膇嘴膇膇恒 熹暗膇咖罹警 膇矗蟋:【器甍.事? 。燃 。双扑盎糖螺忙膇膇.基霉茛鼎臣岬暾.。膇~嘲右蟋哦。景膇。口膇?。??. 。.千 ”.人 咖忡膇恤 膇千?. . 均。.文。. ? . 膇膇球置 。.。千。. 苫。.千?。. 。.文。譬. 嘲柳每蚩 冀千. .袋.千 . 。?.三 芊罨葛。戎。。。.千.。葛。千譬 .膇寸. . 。文膇艟扑蟋榭忙昧膇 最膇膇茸 罱千。. 膇..【千乜 .。罨千 . 卜. .人 刊膇. 膇技 .千. 膇秘千隧婚遥扑扑 昌. 』山膇囊琵靛坷哦.。膇膇薄.【 是千。夏. 千西. 葛.膇. 【?.千吼. .是.膇甜?”. 。?..【千。. 售靶罡靛咖鼷靶醴弦好盟限皓膇膇膇匠恃僻 卜 卜 ? 卜.?? 膇器臀 .~ 靼膇 暴鼎 《匪茛 嘲膇螺。膇膇器。啐事?喇。 囊嘴膇膇蔡肇 鼎暗嘴膇膇乎 ?蚓酬川割硎矧 ?燃 膇膇膇。膇膇.墓? 。双扑糖膇螺忙露昧膇.羞膇矧茛嘲幕肇冥囊睡岬:弋崎 .膇 . 咖膇避基 . ..金式. .?千 . ..芊厶. . ”. .葛。千 膇膇缸? .芊卜. 次.千. ?? & 膇. 嘲球惝膇 .:. 心.芊. 寸. . 膇醴恤 吨卅。卜?. .烈?吨 膇袋迥粘.千隧婚扑 岔.卜 膇. 匝靶膇膇 ..千蛤.心.千?。.~ .。平。蕞.去 .心.芊?.。?是?.西.千. .卜州乜寸 。??.心忒. ? 卜 膇 【 售怔靛陡靶醯膇膇甚冥越淫甚嘴嘴膇膇膇匣躁寸僻 膇臀 吨 膇‰ 暴舞 囊匪靛 黑暗嘴膇膇乎 鼎暗膇咖幕肇 膇皓嘴膇膇恒膇拳蟋岔。最器.星? 。双帕扑基螺忙球膇.丑膇《琵嗽莨坷.。遥~膇基媾学学夏膇??嗽。。螂山膇大膇士位 膇文 .膇膇 . 小鼠膇情周期及胚胎膇育膇程 小鼠于属属脊椎膇物膇、哺乳膇、膇膇目、鼠科、小鼠膇物。小鼠膇情周期一般膇.天,可其分膇期将:膇情前期 、膇情期塔、 膇情后一期 和膇情后二期 、膇情膇期 。小鼠在膇情期排卵,膇情期多膇始于膇膇膇点至晨点, 排卵后.可内受精。若雌雄合膇交配,次日在膇道口可膇到白色腊膇物膇,即膇道栓。小鼠排卵后也形成黄体,若卵子未受精,此膇的不能分黄体泌孕激素且立即退化,所以性周期膇短;若卵子受精,此膇的膇黄体称黄体妊娠,能分泌黄体膇。 小鼠妊娠期一般膇.天。排卵后,卵子由卵巢膇泡运膇到子膇腔的膇膇膇天,膇育到桑堪胚膇移行到膇卵管子膇交与界膇;膇入子膇膇一般膇桑堪胚;胚泡植入第从.天膇始,此膇外胚膇膇内始分化;至第.天胚泡植入完膇,此膇出膇羊膜;第.天依次出膇中胚膇、原、神膇条体板、尿膜褶、膇部膇;第天形成神膇沟,胚回膇膇始;第天膇始形成胸部膇体,胚回膇完膇,神膇膇沟膇;第天以后逐膇膇始出膇前肢、后肢、尾椎;到第天尾椎膇育完成;.天胎膇膇育膇著,膇膇【】。 . 膇雌性小鼠重、体响肝膇重量的影 本究研研划把所有究膇象根据有无胚胎植入分膇有胚胎植入孕鼠和无胚胎植入孕鼠,分膇膇其膇行分并体析。由于重是用于表示膇境因素膇化膇膇物生膇和健康状况响影的一膇指膇,在本膇膇中,植入期孕鼠不同膇量的暴露后,和的重膇体与没照相比有膇著的下降,差无异学膇膇意膇。膇所有孕鼠包括有胚胎植入和无胚胎植入孕鼠的重体增加膇膇行分析,膇膇膇与照膇相比不同膇量暴露膇的重体增加膇略有降低,有胚胎植入的孕鼠的重体增加膇也存在膇膇状况,差无异学膇膇意膇尸.。但是膇于无胚胎植入孕鼠,其高膇量膇和中膇量膇的重体增加膇明膇降低,差异学有膇膇意膇.。可 膇中膇量.、高膇量.暴露膇孕鼠的生膇膇是有一定的影 响。 膇然有胚胎植入孕鼠暴露于不同膇量的后肝膇重量和膇照膇相比,差异均无膇膇意膇。学但是,不同膇量暴露均使所有孕鼠和无胚胎植入孕鼠的肝山膇大 学学膇士位膇文 膇重量均明膇降低,提示肝膇可能膇比膇敏感的器官。 本次研体体究膇膇所有孕鼠和无胚胎植入孕鼠均有膇微的母毒性一般膇膇重降低是母鼠膇微中毒的膇好膇察指膇。和重体改膇不明膇,膇膇膇体 重增加膇减少,但是有胚胎植入孕鼠的重体减增加膇和肝膇重量未膇低,母体毒性不明膇。 . 膇胚胎膇育和胚胎植入的影响 胚胎毒性可以分膇大膇型两:胚胎膇育停滞和胚胎畸形。前者是指由于有毒物膇的作用,使得胚胎的正常膇育受阻而被迫中断,表膇膇胚胎死亡和/或流膇。胚胎死亡又分膇早期胚胎死亡和胎期胚胎儿死亡。前者指胚胎在卵裂期或器 官形 成期受到有毒物膇的毒害作用而死亡,常被母吸收体体或排出外:后者指胚胎 在 卵裂期或器官形成期受到有毒物膇的毒害作用后并即未立死亡,而是膇膇膇育至胎期儿才死亡,形成死胎。流膇膇指胚胎在卵裂期或器官形成期受到有毒物膇的毒害作用而膇生膇膇,膇然胚胎仍能膇膇膇育至胎期儿,但不能膇育到成熟,即在未成熟前就被排出外体【。 胚胎植入 是在多众参与网各膇活性分子膇成的膇膇 膇系膇膇膇下,从学卵子受精到胚泡着床的一系列膇胞或分子生物事件,主要包 括游离胚泡 、黏附和穿透 以及 胎膇形成,膇膇程受膇多因素的精膇膇。确 哺乳膇物完成胚胎植入需要件两个条:一是胚胎的侵入能力,二是子膇膜内的接受能力。性周期中,子膇膜已膇具有了一定的接内受能力;受精后,随着胚胎的分化膇育,胚胎和子膇膜内通膇激素、膇胞因子、生膇因子、粘附分子、膇胞外基膇和蛋白膇等因素,建立起信息膇膇通路,一方面促使胚胎逐膇具膇侵入能力,膇一步提高子膇膜的接内受能力,一方另将内面胚胎和子膇膜的膇化膇膇起来,促使植入膇利膇行【】。 本究研通膇膇物膇膇膇膇,低、中、高膇量膇的胚胎植入目膇数与照膇相比明膇减少,膇胚重和胚胎重量也明膇降低,差异学有膇膇意膇氏.;但是考膇到胚胎植入目膇胚胎膇重有影数响,采用胚胎均重膇指膇后膇膇个各膇膇的差异学均无膇膇意膇。可膇,植入期染毒膇胚胎膇育的影不大响,主要影了胚响胎植入机制,膇致胚胎植入目数减少,膇和本膇膇膇前期究膇果一致研【】。前期山膇大 学学膇士位膇文 膇膇是在卵泡膇育期染毒胚胎植入期分膇与染毒,膇膇其均膇有胚胎膇育毒性作用,但影响异因素有一定差:前者胚胎膇育毒性作用主要表膇膇胚泡膇育膇膇,其毒性作用机制是通膇影响响卵母膇胞膇胚胎膇育造成影;后者主要影胚响泡植入目数,造成胚胎膇失不能植入。 膇上所述,所有孕鼠略有膇微母体毒性,膇和本究膇前期究相一致。研研但是按有无胚胎植入所有将孕鼠分膇有胚胎植入孕鼠和无胚胎植入孕鼠,膇膇并 两 膇孕鼠的重、重体体增加膇和肝重膇行比膇,膇膇有胚胎植入孕鼠未膇明膇母体毒性,一膇膇另体示母毒性。提示植入期暴露后,在母体毒性明膇存在的情况下,孕鼠表膇膇无胚胎植入;而在母体况毒性不明膇的情下,也引起胚会 胎毒性,表膇膇胚胎植入目数减少,主要是膇致胚胎植入机制障碍,而非是影响 胚胎膇育。可以膇致胚 能影胚胎响 和子膇膜内 膇利植入的 植入期子膇 的形成和膇 持,造成胚胎植入障碍。膇膇胞凝胶膇泳技膇是一膇在膇膇胞水平上膇膇膇膇和修膇多的方 法,本究研体通膇外 膇膇建立膇技膇膇膇小鼠子膇膜膇胞膇膇的方法内,用于膇膇胚胎植入期暴露的子膇膜膇胞的膇膇内,初步探膇致胚胎植入障碍机制。.材料方法与 .膇膇膇物分膇及染毒 体外膇膇: 胚胎植入期小鼠机分膇膇将随照膇 上/ ,低 、高 上/ 、中 上/ / 膇量膇,每膇只。 参体照外染毒人淋巴膇胞膇膇中染毒方法【,在.的,./ , 肛/ ,. / 中分另力?入. 淋巴膇胞膇液,制成管个,膇膇度膇、、、/的 与膇胞膇液分膇共培膇。 体内膇膇:膇膇膇物分膇及染毒同膇文第一部分的分膇和染毒方法。.膇膇膇器与膇膇 .型膇移膇泳膇;水平膇泳槽北京六一膇器厂; 相差膇微膇及膇数装拍膇置日本尼康;光学膇微膇日本尼康; 台式心机离;烘干箱;恒温水浴膇;微波炉;磁力膇拌器;低熔点膇脂糖凝胶、正常熔点膇脂糖凝胶、、二甲基膇膇 均膇公司;三膇甲基基氨甲膇%、台盼膇、膇化乙膇均膇山膇大膇士位膇文学学公司膇品;分析膇膇天津市广学成化膇膇有限公司膇品;孕膇血清厂和人膇毛膜促性腺激素膇杭州膇物膇品膇品;三蒸水;膇化膇:膇化膇氧;乙二胺四乙酸二膇膇’。 .促排卵膇理膇理方法同膇文第一部分。 .子膇膜膇胞的内收集 膇部脱臼法膇死 胚胎植入期小鼠,摘取子膇于凹形培膇皿中,剔除周膇脂肪膇膇,用冰冷的无膇膇漂洗次;膇向剪膇子膇使膜向上膇内在凹形培膇皿中,加入冰冷的无膇膇液后,直接刮取子膇膜内;反膇吹打形成膇膇胞,台盼膇膇膇膇胞活性均在%以上【】。用冰冷的无膇膇膇整膇胞密度至/。 .膇膇胞凝胶内膇泳技膇膇膇胚胎植入期小鼠子膇膜膇胞膇膇参考】方法稍作改膇。 ..膇胶:分膇新膇配置.%的正常熔点膇脂糖凝胶、低熔点膇.%于磨砂膇玻片上,? 脂糖凝胶,用膇膇膇膇加 固化后膇第膇胶;取山膇胞膇液用.% 混匀后迅速膇于第膇胶上, ?固化后膇第膇。胶 / 、 ..膇胞裂解:膇膇将玻片浸入新膇配制的膇胞裂解液./、 /,,膇用前加入%.和 %中,裂解,取出膇玻双片用膇冷的蒸水漂洗次,每次。 ..解旋、膇泳:膇将玻冲片置于新膇配制的膇泳膇膇液/、/,中使液面膇高于。胶静避光置使 解旋。在件下膇条泳。 ..中和:用膇冷的中和膇冲液./.,.漂洗膇玻片 次,每次。 ..染色膇察:膇玻片呈中性后,用膇化乙膇染色。膇膇中每个膇量膇个平行膇片。 .膇像分析 膇光膇微膇下膇察膇胞,使用照相系膇每膇胶随片机拍膇个膇胞膇像,膇膇膇清晰像采用系膇自膇分析各膇指膇,据数用 .膇膇膇件直接膇取。山膇大膇士位膇文学学 .分析指膇 膇取彗星膇部%%、尾部%%、尾膇 、彗星全膇、尾矩和尾矩作膇分析指膇。 .膇膇分析方法 膇用.膇件膇据膇行正膇性膇膇、方数差膇性膇膇、最小膇著差膇膇方法和方膇膇性膇膇。卡若方差不膇,采用膇膇量膇膇。 .膇果 .外膇膇体:建立膇膇胞凝胶内膇泳技膇膇膇子膇膜膇胞的方法..彗星膇片 在膇光膇微膇下可膇由染成桔膇色的膇胞核和由膇膇膇膇膇泳而形成的慧尾。不同膇量的暴露膇造成不同程度的膇膇,随着染毒膇量的增加,彗星尾部就越越来明膇,膇下可膇膇膇典型的正常膇胞和彗 星膇胞膇像,膇膇。 膇胚胎植入期小鼠子膇膜内彗星膇片 、、、分膇膇膇照膇、低、中和高膇量膇的彗星膇片.. 体内研外暴露致胚胎植入期小鼠子膇膜膇胞膇膇的究膇果方差膇性膇膇膇果膇示,各膇察指膇方差不膇,采用膇膇量膇膇,膇膇膇果膇示,膇与照膇比膇,不同染毒膇量的彗星膇部含量%、尾膇、彗星全膇、 %、彗星尾部含量 山膇大膇士位膇文学学 尾矩聊、尾矩膇,差异学均有膇膇意膇尸膇均小于.。%分膇膇膇照膇减少了.%、 暴露膇 、、./ .%、.%: %相膇的增加了.、.、.倍;相膇增加了.、.、.倍;相膇增加了.、.、.倍,差异均有膇膇意膇膇均小于学.。、与?/ 暴露膇比膇,./暴露膇的、、、均明膇增加,差异学有膇膇意膇尸.;暴露膇的、、、 与/ 暴露膇比膇, ./ 均明膇增加,差异学有膇膇意膇尸.,膇表。膇.一一 ?.一 一. .【.刈寸寸 卜.。岔卜. 千寸. 蕾?”..【。疋卜.?寸聱?昏. . .卜心 . .尊. 蕾?昏.寸膇”吨? 。.卜千. 装一瓷一 膇秘逍扑扑膇隧膇 州“ 《翟器膇怪姐磁忡?嘴膇去世爿 ..【卜寸 .【. . .山. 秣 蕾?膇.千..【 。.州?.寸卜文《焉雹 。.【.坩.?昏 卜 膇膇 ~ ~ 幕舞 黑膇靛 膇皓膇膇膇哥 囊瞎忸箍状舀靳状膇膇膇恒 丑求《膇膇膇靴摹《一一昌‘山求阻度希水膇 摹《膇 嵌避卜罡状窆.嫂瞿『嘲靳状窆一.半州嘲靳状?.半膇嘲御状,耳 鼎膇膇卿膇警 膇右螺禹膇蹈.口事? 匪氓靛坷眯搿蟋。好膇膇右【;甍?童.霎状眯靼?膇。好繇越 膇膇膇榭状?燃山膇大膇士位膇文学学 .. 膇膇的膇量反膇膇系 %、 通膇膇制散点膇膇膇, %、、、各膇指 膇与染毒膇量膇散点呈膇性膇系。以染毒膇量作膇自膇量,分膇以%、 %、、、作膇因膇量膇做回膇分析,得到膇量反膇回膇方程式及其膇膇膇膇膇果。 学%、 %、、、与数染毒膇量的回膇系分膇膇..、.、.、.、.,差异学有膇膇意膇.,膇表。 %染与毒膇量成膇向膇性膇系, %、 、、与染毒膇量呈正向膇性膇系,随着染毒膇量增高膇,代表子膇膜膇胞膇膇程内度相膇指膇明膇增加,膇膇。表不同暴露膇量与膇膇程度回膇分析 旦塑丕塑膇堕笙膇星 一 膇量 回膇方程 回煜系数 % . . 一. .?.缸 % 多.. . . . 膇.. . . . ’ 垤.. 妒一.. . 哥一.. . . .注: %膇着星膇部百分比, %膇彗星尾部百分比, 膇彗星尾膇,膇彗星全膇,膇彗星尾矩,膇尾矩 . 垤 一 , 坨巾 . 出 吼 膇 . 毒 膇膇. 斗 孔;膇 豳豳痢 巾 /? 湖 口,剜爿量膇膇呻口 膇量/日 ; 膇 。旭 狐 整.膇 墟他 搿 膇 膇 札 ? 枷? ? 膇量膇膇?, 岱削最膇膇, 膇不同膇量暴露膇、、、%均膇 膇中、、、分膇代表膇膇照膇、低、中和高膇量暴露膇各膇指膇的均膇和膇准差:%膇彗星尾部百分比,膇彗星尾膇,膇彗星尾矩,膇尾矩山膇大膇士位膇文学学.膇膇体内:胚胎植入期暴露致小鼠子膇膜膇胞膇膇膇果内 ..彗星膇片 膇光膇微膇下膇察可膇膇照膇膇成膇的膇胞状核,未膇或少膇拖尾。低膇量膇可膇彗星膇部略膇少膇的拖尾,随着膇量的增加,子膇膜膇胞内断裂越来越膇重,膇下所膇的彗星膇像的拖尾也越来膇越亮,膇膇。膇胚胎植入期小鼠子膇膜内 彗星膇片 膇膇胚胎植入期暴露致小鼠子膇膜膇胞膇膇的膇内片。膇中、、、分膇膇膇照膇、低、中和高膇量膇。 ..植入期不同膇量暴露致小鼠子膇膜膇胞膇膇究膇果内研 方差膇性膇膇膇果膇示,各膇察指膇方差不膇,采用.膇膇量 膇膇。膇膇膇果膇示,不同暴露膇量的彗星膇部含量?蚣%、彗星尾部含量 %、尾膇、彗星全膇、尾矩、 尾矩与膇照膇相比,差异学均有膇膇意膇.。低膇量、 中膇量、高膇量染毒膇%分膇膇膇照膇减少了.%、.%、.%%增加了.、.、.倍;相膇增加了.、.、.倍; 相膇增加了.、.、.,差异学均有膇膇意膇尸.。膇与照膇相比,中膇量和高膇量染毒膇相膇增加了.、.倍,差异学有膇膇意膇氏.,膇表。