闪式提取银杏叶中萜类内酯的工艺研究的论文

闪式提取银杏叶中萜类内酯的工艺研究的论文 闪式提取银杏叶中萜类内酯的工艺研究的论文 闪式提取银杏叶中萜类内酯的工艺研究的论文 作者:王平，陈丹龙，朱兴一，忙怡丽，苏为科 【摘要】 目的研究用闪式提取器从银杏叶中提取银杏萜类内酯的工艺。 方法 快递客服问题件处理详细方法山木方法pdf计算方法pdf华与华方法下载八字理论方法下载 用正交实验进行提取方法的研究，用高效液相色谱(hplc)法测定银杏内酯的含量，流动相为甲醇-水(30?70)，流速为0.8 ml/min，用蒸发光散射检测器，柱温为30 ?。结果闪式提取银杏叶萜类内酯的合适工艺为:植物粒径50目，提取时间5 min，乙醇浓度60%，液固比20?1，此条件下萜类内酯提取率平均值可达 1.712 mg/g 。结论闪式提取是一种有效的提取银杏萜类内酯的方 法。 【关键词】 闪式提取; 银杏叶; 萜类内酯银杏ginkgo biloba l.为银杏科银杏属植物，又名公孙树，为现存古代孑遗植物之一，是我国的特 产植物,1,。银杏叶中主要含有银杏内酯以及黄酮类等化合物，具有 益心敛肺、化湿止泻等作用‎‎。银杏内酯作为银杏叶的提取物具有抗凝 血、防治动脉粥样硬化、保护缺血损伤组织、抗休克、抗炎等诸多药 理作用，能有效的抑制多种诱导剂所诱导的血小板聚集，并且银杏内 酯已被认为是高效特异的paf拮抗剂,2,4,。银杏内酯主要包括银杏内酯a，b，c和白果内酯，简称为ga，gb，gc，bb。 目前，对于银杏内酯的提取，主要采用的是乙醇溶液加热回流的方‎‎法。..Comyang chun等 ,5,尝试采用超临界二氧化碳法提取银杏内酯，虽然提取效‎‎果较好，但由于操作繁琐，设备成本高，本方法目前并未得到广泛的 应用。近年来，闪式提取技术是利用高速机械剪切力和搅拌力，迅速 破坏植物细胞组织，使组织细胞内部的有效成分与溶剂充分接触，使 有效成分快速溶解,6，7,，应用该方法对氨基酸、蛋白质、萜类和黄酮类化学物等物质的提取已有文献报道， 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 明其具有缩短提取时‎‎间，提高提取效率，简化操作步骤的特点，但将此方法应用到银杏叶 中银杏内酯的提取的研究尚未见文献报道。本文报道用闪式提取技术 提取银杏叶中银杏内酯，取影响闪式提取的主要因素即粒径大小、提 取时间、乙醇浓度和液固比4个因素，各取3个水平进行l9(34)正交实验，用液相色谱法检测银杏内酯提取率，并以此为评价指标，确定最佳工艺条件。 1 器材 1.1 材料与试剂银杏叶由浙江康恩贝制药股份有限公司提供;银杏 萜类内酯(白果内酯及银杏内酯a、b、c) 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 品购自中国药品生物制品检定所;hplc甲醇为色谱纯试剂;乙醇为分析纯试剂。 1.2 仪器dfy-500摇摆式粉碎机(上海鼎广机械设备有限公司制造);dzf真空干燥箱(上海精宏实验设备有限公司制造);re-52aa旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂制造);fsh22可调闪式提取器(郑州金星科技有限公司制造);waters液相色谱仪(安捷伦科技有限公 司制造)。 2 方法 2.1 银杏萜类内酯的闪式提取采用正交实验l9(34)进行闪式提取银杏萜类内酯的研究，正交实验的因素水平表见表1。称取粉碎后的干燥银杏叶粉末40 g倒入到闪式提取器的铁罐中，加入适量乙醇溶液，打开闪式提取器，破碎细胞壁。实验完成后取出，冷却，过滤，经旋转蒸发仪浓缩至无醇味即得浸膏。 2.2 色谱条件色谱柱为diamonsil(tm)c18(250 mm× 4.6 mm, 5 μm);流动相为甲醇-水(30?70)，流速0.8 ml/min;蒸发光散射检测器(elsd):漂移管温度104 ?，载气流速2.9 ml/min;柱温为30?。表1 因素水平(略) 2.3 线性范围考察分别精密称取对照品ga，gb，gc，bb 各3，3，3，4 mg置于10 ml量瓶中甲醇加至刻度，摇匀即得混合对照品溶液 ，取5，2.50，0.50，0.25，0.05 ml,分别置于10 ml量瓶中加甲醇到刻度，摇匀，即得混合对照品溶液,分别吸取溶液20 μl，注入hplc 仪测定。以对照品浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线， 进行线性回归。 2.4 样品溶液的制备取实验得到浸膏，加10 ml水和1滴2%盐酸，用醋酸乙酯振摇萃取4次(15，10，10，10 ml)。合并后用5%醋酸钠20 ml洗涤，洗涤液用10 ml醋酸乙酯萃取，合并醋酸乙酯萃取液后用水洗涤两次，20 ml/次。合并水层，用10 ml醋酸乙酯萃取，合 并醋酸乙酯萃取液，回收醋酸乙酯后加10 ml甲醇，用于进样。 2.5 精密度实验取最小浓度对照品溶液，重复进样5次，记录色谱峰面积，计算rsd。 2.6 重复性实验精密称取同批银杏叶粉末40 g，共5份，按“样品溶液的制备”项下方法操作，制备样品溶液6份，进行含量测定， 计算rsd。 2.7 稳定性实验取一个样品，每隔2 h进样1次，共进样5次，考察供试品溶液的稳定性。 2.8 回收率实验取已测知含量的样品5份，分别精密加入对照品适量，依hplc法测定，计算回收率，rsd。 2.9 最佳工艺验证按照优化工艺条件操作，测定银杏萜类内酯含量。 3 结果 3.1 hplc结果及标准品线性关系在前述色谱条件下，各种银杏内酯能够很好地分离(见图1)，以对照品浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，进行线性回归。回归方程为:白果内酯y=0.563 12x-2.567 32，r=0.998;银杏内酯a y = 0.34856x- 3.15764，r=0.997;银杏内酯b y = 0.456 78x- 4.456 24，r=0.997;银杏内酯c y=0.323 55x- 3. 13，r=0.999。 3.2 闪式提取银杏萜内酯正交实验结果在本实验范围内见表2，各因素对提取效果的影响程度依次为:a(颗粒大小) b(提取时间) c(乙醇浓度) d(液固比)。a因素影响差异有高度显著‎‎性，b和c因素影响差异有显著性。比较k值，得较好的因素水平组合为a2b1c3d2，与单因素实验的最优因子组合一致。即颗粒大小为50目，提取时间为5 min，乙醇浓度为60%，液固比为20?1。 3.3 精密度实验结果取最小浓度对照品溶液，重复进样5次，记录色谱峰面积，计算得的rsd为 1.34%。 3.4 重复性实验精密称取同批银杏叶粉末40 g，共5份，按“样品溶液的制备”项下方法操作，制备样品溶液5份，进行含量测定，计算rsd为 1.56%。 3.5 稳定性实验 取一个样品，每隔2 h进样1次，共进样5次，记录色谱峰面积，计算所得rsd为 0.34%。 3.6 回收率实验取已测知含量的样品5份，分别精密加入对照品适 量，依hplc法测定。银杏萜内酯平均回收率为9 8.75%，rsd为0.83%。本研究的hplc测定法的回收率较好，方法是可行的。 表2 正交试验结果(略) 3.7 工艺验证实验根据优化的正交实验结果颗粒大小为50目，提取时间为5 min，乙醇浓度为60%，液固比为20?1，进行3批银杏叶的萜类内酯提取率分别是 1.700， 1.716， 1.720 mg/g。平均提取率为 1.712 mg/‎‎g，说明正交 设计 领导形象设计圆作业设计ao工艺污水处理厂设计附属工程施工组织设计清扫机器人结构设计 筛选的工艺是合理的。 4 讨论 闪式提取银杏叶萜类内酯实验中，各因素对萜类内酯提取率的影响程度依 次为:a(颗粒大小) b(提取时间) c(乙醇浓度) d(液固比)，并由此得到合适的提取工艺条件:植物粒径50目，提取时间5 min，乙醇浓度60%，液固比20?1，此条件下萜类内酯提取率平均值可达 1.712 mg/g。本文首次报道了用闪式提取银杏中的萜类内酯的研究，利用高速机械剪切力和搅拌力，迅速破坏植物细胞组织，使组织细胞内部的萜类内酯与溶剂充分接触，使有效成分快速溶解。该提取适用于工业化生产的放大工艺正在进一步‎‎研究中。 【 参考文献 】 ,1,庄向平,虞杏英,杨更生，等. 银杏叶中黄酮含量的测定和 提取方法,j,. 中草药, 1992, 23 (3) : 122. ,2,wu yuzhou, li shuqin, cui wei et al. ginkgo biloba extract improves coronary blood flow in healthy elderly adults: role of endothelium-dependent vasodilation,j,. phytomedicine, 201X, 15 (3) : 16 4. ,3,elaheh nooshinfar, reza lashgari, abbas haghparast et al. nmda receptors are involved in ginkgo extract-induced facilitation on memory retention of passive avoidance learning in rats,j,. neurosci. lett., 201X, 432 (3) : 20 6. ,4,rodríguez m., ringstad l., sch?fer p. et al. reduction of atherosclerotic nanoplaque formation‎‎ and size by ginkgo biloba (egb 761) in cardiovascular high-risk patients,j,. atherosclerosis, 201X, 192 (2) : 43 8. ,5,yang chun, xu yanrong, yao weixi. extraction of pharmaceutical ponents from gin‎‎kgo biloba leaves using supercritical carbon dioxide,j,. j. agric. food chem., 201X, 50 (4) : 84 6. ,6,邓引梅,宋发军,崔永明，等. 甘草叶总黄酮提取工艺,j,. 中南民族大学学报, 201X, 27 (1) : 12 7. ,7,刘延泽. 植物组织破碎提取法及闪式提取器的创制与实践 ,j,. 中国天然药物, 201X, 6 (5) : 40 1.