制作优良实验动物组织免疫组化染色标本的有效方法

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制作优良实验动物组织免疫组化染色标本的有效方法 ,,, ,年全国病理技术新进展研讨会论文汇编洗，能全部收集使用。,(涂片镜检面积小，只有,,;,，阅片时省时，省力，快速，不宜漏诊。,(对免疫细胞化学检查，特殊染色检查更具优越性，根据需要可涂多张涂片，进行反复多种方法检查，大大减轻患者的痛苦。缺点:制片时标本需要静置,,,,,,，再上机制片，所以制片时间比清洗后的普通图片的时间相对延长，此外,,,MATCH_ word _1714059056880_0的耗材较贵，曾加了患者的检查费用，不适用于每一个患者。经清洗后的普通涂片，检查优点在于:在于成本较低，适合于每一位患者。低渗氯化钾的酒精完全破坏红细胞，还能较好地保持其他细胞的完整性而且对癌细胞有固定作用，有利于肿瘤细胞阳性检出率。由于红细胞对于低渗的耐受性较肿瘤细胞差，血性穿刺液和低渗液充分混匀后，红细胞即肿胀破坏溶解，应此穿刺液经低渗浓集后无红细胞的细胞碎片，癌细胞的集中，常形成大团，又由于癌细胞对低渗耐受性好，同时低渗液中的酒精对癌细胞有固定，保护的作用。因此低渗浓集后，癌细胞结构保存完好，染色清晰【,】，加之无红细胞背景，使涂片癌细胞分布均匀质量显著提高，降低了漏诊率和误诊率。缺点:不利于反复制片和不能进行反复多种方法检查。总之，,,,,的细胞学方法，两种制片方法，特别是能很好保存细胞成分，使涂片满意率上升，阳性率上升，敏感性和特异性无大差异，应用上述两种方法同时检查，可弥补其各自存在的不足，应该推广使用。 ,,,(制作优良实验动物组织免疫组化染色标本的有效方法刘育艳山西医科大学细胞生理学教育部重点实验室在医学科学实验中，大多数组织标本来源于大鼠、小鼠、兔、狗等实验动物。动物组织较人体组织稚嫩柔软，含水量多纤维成分少，在制作组织切片及免疫组化染色标本时，最好采用不同于人体组织的处理方法，在动物组织的固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、染色的每个操作程序中，根据不同动物种属，选择各自最佳的处理方法，避免组织过度脱水变脆易碎、难以切出完整的切片，免疫组化染色易脱片、背景着色重等不良后果的发生，保证高质量制片及免疫组化染色一次成功。现将方法介绍如下: ,、固定免疫组化染色标本最好选用,,,中性甲醛固定液固定动物组织。中性甲醛不仅能完好地保存组织细胞生存时形态结构，还能更好地防止组织细胞内抗原的弥散及移位。动物器官柔软细嫩，应将整个脏器放入固定液中整体固定,一小时后再取材，组织块大小;,(,;,,,(,;,,,(,;,，投入十倍于组织块体积的固定液中继续固定组织仁,,小时。 ,、脱水应用乙醇脱水剂梯度脱水。动物组织质地柔嫩含水量大，为防止组织过度收缩变硬，必须从低浓度乙醇梯度开始脱水:,,哆扛,,,,一,,,—,,,一,,,,乙醇。每一步脱水时间不能过长，,,,以前各步,,分钟，最后两步,,,,乙醇各步,,分钟即可。 ,、透明应用二甲苯两步透明法:前步按照,:,等量乙醇二甲苯混合液，后步为,,,,,”甲苯。每步透明,,分钟，要严格控制时间，防止组织变脆易碎。 ,、浸蜡组织浸蜡采用低熔点(,,(,,?)石蜡，浸蜡温度最好保持在,,?恒温条件下进行。温度过高易破坏组织内抗原活性，温度不够蜡液难以浸入组织深部。浸蜡分三步:第一步,份二甲苯,份石蜡混合液，后两步为纯石蜡液，每步各,,分钟即可。 ,,, ,,, ,年全国病理技术新进展研讨会论文汇编 ,、包埋应选用低熔点(低于,,。,)石蜡包埋组织。包埋时注意选择组织块的切面，实质性组织选最大面积，管腔组织选横断面，皮肤等囊皮组织要立埋，保证全方位暴露组织的形态结构。 ,、切片切片是标本制作成败的关键步骤。保证刀片锋利无缺口，细心修切充分暴露组织切面后，连续切制数张,(,微米厚的薄片，用挂胶载破片择优捞取，,,?烤片,(,小时。 ,、免疫组化染色染色前切片脱蜡要彻底脱净，采用,(,,,,,,封闭组织细胞中的内源性过氧化物酶活性，修复抗原要根据各种不同抗原的属性，选择热修复法、蛋白酶消化法或联合应用这两种方法，优选适合的抗体浓度，获得最强的特异性染色。动物组织背景着色比较重，应加强每步洗片力度，在,,,缓冲液中加入,(,,,,,,,,,,表面活性剂减轻背景，尤其注意一抗孵育后的洗涤时间,分钟×,次，达到最弱的背景着色目标。,,,显色时间不超过,分钟，苏木素复染要浅染，避免覆盖免疫组化特异性核染色，保证免疫组化染色阳性结果的完整体现。每次免疫组化染色最好同时选用阴、阳性对照片，确保每一次实验的准确成功率。 ,,,((荧光原位杂交技术在现代病理中的多方应用龚方纯山西省肿瘤医院病理科荧光原位杂交(,，,,)技术问世于,,年代后期，其曾多用于染色体异常的研究，近年来随着,，,,所应用的探针钟类的不断增多，特别是全染色体探针及染色体原位抑制杂交技术的出现，使,，,,技术不仅在细胞遗传学方面，而且还广泛应用于肿瘤学研究，如基因诊断基因定位等。荧光原位杂交技术是一种重要的非放射性原位杂交技术。它的基本原理是:如果被检测的染色体或,,,纤维切片上的靶,,,与所用的核酸探针是同源互补的，二者经变性(退火(复性，即可形成靶,,,与核酸探针的杂交体。将核酸探针的某一种核苷酸标记上报告分子如生物素、地高辛，可利用该报告分子与荧光素标记的特异亲和素之间的免疫化学反应，经荧光检测体系在镜下对待测,,,进行定性、定量或相对定位分析。,(实验流程载片,,”,,,度的变复性液内变性,,,, ’, ,,,、,,,、,,,,乙醇序列脱水各,,,, 上预制备探针混合物(按试剂说明书提供配方) ，滴加于载片上封式 , 退火温度下(试剂说明书中有具体温度)杂交,(,,小时 ,, 载片于,(,,,,,,,(,,,,(,, ,,度洗涤约,,, ,,,

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