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植物基因组DNA提取步骤.doc

植物基因组DNA提取步骤

wu飞wu
2017-10-19 0人阅读 举报 0 0 暂无简介

简介:本文档为《植物基因组DNA提取步骤doc》,可适用于高等教育领域

植物基因组DNA提取步骤植物基因组DNA提取实验操作步骤取植物新鲜组织约mg或干重组织约mg加入液氮充分研磨。(植物细胞有细胞壁,液氮可以让细胞冷冻起来,变得很脆,这样容易破细胞壁。同时,液氮的超低温可以大大降低酶活性,防止降解。注:、液氮的温度是不要冻伤自己的手带上手套。、用一个保温杯大一点的把液氮取出来放在保温杯里盖上盖子。、然后用液氮将研磨棒和研钵预冷。、将样品快速放入研钵中快速研磨在液氮挥发完之前再加入液氮一定不要让液氮挥发完或者样品呈现那种黏糊的状态这样样品中DNA容易降解。、等到样品呈现细粉末状态了基本就可以了用药勺把样品迅速舀到ml离心管里。)将研磨好的粉末迅速转移到预先装有μL预热缓冲液GP的离心管中(实验前在预热的GP中加入巯基乙醇使其终浓度为)迅速颠倒混匀后将离心管放在水浴min水浴过程中颠倒离心管以混合样品数次。(水浴时间依实验具体情况而定看样品裂解情况具体看裂解液变得清澈透明为止)加入μL氯仿充分混匀,rpm(~,×g)离心min。注:若提取富含多酚或淀粉的植物组织可在第步前用酚:氯仿:进行等体积抽提。小心的将上一步所得水层上相转入一个新的离心管中加入μL缓冲液GP充分混匀。将混匀的液体转入吸附柱CB中,rpm(~,×g)离心s弃掉废液。(吸附柱容积为μL左右可分次加入离心。)向吸附柱CB中加入μL缓冲液GD(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),rpm(~,×g)离心s倒掉废液将吸附柱CB放入收集管中。向吸附柱CB中加入μL漂洗液PW(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),rpm(~,×g)离心s倒掉废液将吸附柱CB放入收集管中。重复操作步骤。将吸附柱CB放回收集管中,rpm(~,×g)离心min倒掉废液。将吸附柱CB置于室温放置数分钟以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。注意:这一步的目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除漂洗液中的乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切、PCR等)实验。将吸附柱CB转入一个干净的离心管中向吸附膜的中间部位悬空滴加μL洗脱缓冲液TE室温放置min,rpm(~,×g)离心min将溶液收集到离心管中。注意:洗脱缓冲液体积不应少于μL体积过小影响回收率。洗脱液的PH值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液应保证其pH值在范围内(可以用NaOH将水的pH值调到此范围)pH值低于会降低洗脱效率且DNA产物应保存在以防DNA降解。为增加基因组DNA的得率可将离心得到的溶液再加入吸附柱CB中室温放置min,rpm(~,×g)离心min。

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