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nunc maxisorp酶标板准确度和线性范围测试方法[整理版].doc

nunc maxisorp酶标板准确度和线性范围测试方法[整理…

张巧倩
2018-04-04 0人阅读 举报 0 0 暂无简介

简介:本文档为《nunc maxisorp酶标板准确度和线性范围测试方法[整理版]doc》,可适用于综合领域

nuncmaxisorp酶标板准确度和线性范围测试方法整理版NuncMaxisorp酶标板准确度和线性范围:市场竞争比较摘要在免疫学检测中酶标板的检测精准性和保证酶标板精准性的浓度范围是决定使用哪种酶标板品牌的非常重要因素。本实验采用商业化的ELISA实验方法来分析比较种不同品牌的酶标板的精准性和线性范围。实验证明在所有测试的酶标板中NuncMaxiSorp酶标板具有最广的线性范围(pg待测蛋白mL)。MaxiSorp酶标板也显示出了良好的重复性另外的MaxiSorp酶标板的R超过因此它在所有测试的不同品牌的酶标板中具有最精确的结果。缩写BSA:牛血清白蛋白ELISA:酶联免疫吸附测定HRP:辣根过氧化物酶OD:吸光值PBS:磷酸盐缓冲液TNFalpha:人肿瘤坏死因子a引言在定量实验中例如酶联免疫吸附测定(ELISA)不仅了解待测试剂的最小浓度是非常重要的而且酶标板的精准性及保持测试精准性的浓度范围也同样重要。酶联免疫吸附测定(ELISA)中常使用一次性多孔板而聚苯乙烯板的特性可能改变试剂与固象部分的结合方式。这也反过来影响酶标板在不同反应物浓度时的精准性。保证酶标板准确度的浓度范围(线性范围)和线性曲线的重复性是客户选择酶标板品牌着重考虑的因素。下面的酶联免疫吸附测定(ELISA)实验中我们考察了NuncMaxisorp和其它竞争品牌酶标板的准确性和线性范围。实验方法用商业化ELISA试剂盒中的稀释液来准备包被试剂:将ml的捕获抗体溶液(稀释至μgmL)加入酶标板的每孔中密封酶标板室温下放置过夜。重复洗酶标板次每个孔中加入mL封闭液(gL溶于PBS的牛血清白蛋白溶液)抚育一小时重复上述冲洗步骤。用稀释液将人肿瘤坏死因子a以:梯度稀释浓度从pgmL到pgmL。灵敏度测试用来考察每个品牌的最小可检测浓度。人肿瘤坏死因子a浓度分布详见表。加mL的人肿瘤坏死因子a至每个孔中室温下抚育小时。重复上述冲洗步骤加mL抗体(稀释到ngmL)至每个孔中室温下抚育小时。重复上述冲洗步骤加入mL的辣根过氧化氢酶链霉亲和素溶液(:稀释)至每孔中室温下抚育分钟。经过最后一次冲洗后每孔加入mL的显色剂反应分钟后立即加入mL的终止液。要精确控制显色反应时间以保持每个酶标板的一致性。用分光光度计读取每块酶标板在波长nm下的吸光值间隔nmms延时ms测试时间。检测阈值的计算方式为整板的空白孔(不加人肿瘤坏死因子a)的平均OD值加上两倍的标准偏差。以检测到超过阈值吸光度所对应的最小抗原浓度来评价酶标板的灵敏度。通过线性范围测定来确定每块微孔板保持测量精准性的浓度范围。按以上步骤进行实验所用的酶标板检测结果如表所示每一纵栏的吸光值(吸光值=测得的吸光值空白孔吸光值)取重复孔平均值作为每板的数值。用Excel制作对数坐标的剂量效应曲线并计算出的R以此来评价每块板的线性结果。表酶标板厂家及型号表灵敏度测试中的人肿瘤坏死因子a浓度分布(pgmL)R表示溶液中的实际蛋白质浓度与检测到的吸光值的相关性或者说酶标板的精确性表示完全吻合。每块酶标板的灵敏度测试中的最小浓度作为线性范围的下限。线性范围的上限则选满足相关系数R大于前提下浓度中的最大值。每个品牌都选取三块酶标板做重复实验测得的数值转化成对数值且取每种类型的酶标板的平均值。然后这些数值再被转换成算数值(平均上限=e的对数平均)来得到每个厂家酶标板的线性范围上限。另外的种酶标板(不同品牌其中个为来自竞争对手A的同一系列)在不同抗原浓度下得到的实验数据点被标绘成线性图但是这个范围仅仅覆盖了ELISA试剂盒厂家提供的浓度范围(pgmL)。综合考虑线性范围和R值来判断各个品牌酶标板的精准性。结果和讨论通过计算每个品牌酶标板的线性范围平均下限来评价其灵敏度。与其它竞争品牌相比NuncMaxiSorp酶标板具有最低的线性范围下限为pgmL即灵敏度很高。表给出了一个NuncMaxiSorp酶标板的所有吸光值(吸光值=测得的吸光值空白孔的吸光值)。表格中每个浓度的平均值对应的点图见图。所有平均值的线性回归系数R为(pgmL)。所以这个酶标板的线性范围的上限就是pgmL。三种NuncMaxiSorp酶标板的平均值都为pgmL在所有被测试的酶标板中是最高的。表的第列显示了所有品牌的酶标板的线性范围的上限。图表格数据对应的数值和回归线其中表格显示了各个不同浓度的平均值。对于所有标绘的点计算得到的R值为。表线性范围测试中人肿瘤坏死因子a的浓度分布(pgmL)表其中一块NuncMaxiSorp酶标板的吸光值已经过空白孔的校正(测试的吸光值空白孔的平均吸光值)空白孔的平均吸光值为。表各厂家酶标板的实验结果总结在R,的情况下NuncMaxiSorp酶标板有最大的平均浓度为pgmL。最大浓度数值可参见表及图最右边一列中对应不同R值的各个厂家酶标板百分比数量以剂量效应曲线为基础计算的浓度范围在pgmL。线性范围测试中得到的R值(局限于pgmL)与额外测试每个品牌的酶标板的结果相结合。三种条件下测试得到的酶标板的百分比被分为三类:R,,R,R,所有酶标板的实验结果见表。计量反应曲线的R,对应的酶标板的百分比越高说明该品牌的酶标板的准确性越高。的MaxiSorp酶标板的R超过,因此相比于其它品牌的酶标板它具有非常高的准确性。结论在所有测试的酶标板中NuncMaxiSorp酶标板具有最高的线性范围的上限以及最广的线性范围(pgmL)。的MaxiSorp酶标板的R超过因此它在所有测试品牌中具有最好的线性(在整个浓度范围内)。良好的线性也表明在实验条件下MaxiSorp酶标板具有很高的准确性。重复性测试表明在酶联免疫吸附测定中准确性是选择酶标板的重要考虑因素。因为酶标板越准确地反映出抗原浓度实验结果就越准确。MaxiSorp酶标板在很宽的抗原浓度范围内能保证很高的准确性因此是实验科研的理想选择。

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