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平板菌落计数法[优质文档].doc

平板菌落计数法[优质文档]

冷冷清清凄凄凉凉
2018-01-04 0人阅读 举报 0 0 0 暂无简介

简介:本文档为《平板菌落计数法[优质文档]doc》,可适用于综合领域

平板菌落计数法优质文档平板菌落计数法农资周瑶实验原理平板菌落计数法是将待测样品经适当稀释之后其中的微生物充分分散成单个细胞取一定量的稀释样液接种到平板上经过培养由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。统计菌落数根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。但是由于待测样品往往不易完全分散成单个细胞所以长成的一个单菌落也可能来自样品中的或更多个细胞。因此平板菌落计数的结果往往偏低。为了清楚地阐述平板菌落计数的结果现在已倾向使用菌落形成单位(cfu)而不以绝对菌落数来表示样品的活菌含量。平板菌落计数法虽然操作较繁结果需要培养一段时间才能取得而且测定结果易受多种因素的影响但是由于该计数方法的最大优点是可以获得活菌的信息所以被广泛用于生物制品检验(如活菌制剂)以及食品、饮料和水〔包括水源水〕等的含菌指数或污染程度的检测。实验方法、样品稀释液的制备准确称取待测样品lg放入装有ml无菌水并放有小玻璃珠的ml三角瓶中用手或置摇床上振荡min使微生物细胞分散静置s即成稀释液再用ml无菌吸管吸取稀释液lml移入装有ml无菌水的试管中吹吸次让菌液混合均匀即成稀释液再换一支无菌吸管吸取稀释液ml移入装有ml无菌水的试管中也吹吸三次即成l稀释液以此类推连续稀释制成、、、、、等一系列稀释菌液。放菌液时吸管尖不要碰到液面即每一支吸管只能接触一个稀释度的菌悬液否则稀释不准确结果误差较大。用稀释平板计数时待测菌稀释度的选择应根据样品确定。样品中所含待测菌的数量多时稀释度应高反之则低。通常测定细菌菌剂含菌数时采用、、稀释度测定土壤细菌数量时采用、、稀释度测定放线菌数量时采用l、、稀释度测定真菌数量时采用、、稀释度。、平板接种培养平板接种培养有浇注平板培养法和涂布平板培养法两种方法。()浇注平板培养法(以细菌为例))取样用三支ml无菌吸管分别吸取、、和的稀释菌悬液各ml对号放入编好号的无菌平皿中每个平皿放ml。不要用ml吸管每次只靠吸管尖部吸ml稀释菌液放入平皿中这样容易加大同一稀释度几个重复平板间的操作误差。)倒平板尽快向上述盛有不同稀释度菌液的平皿中倒人融化后冷却至左右的培养基约毫升,平皿置水平位置迅速旋动平皿使培养基与菌液混合均匀而又不使培养基荡出平皿或溅到平皿盖上。待培养基凝固后将平板倒置于恒温培养箱中培养。由于细菌易吸附到玻璃器皿表面所以菌液加入到培养皿后应尽快倒入融化并己冷却至左右的培养基立即摇匀否则细菌将不易分散或长成的菌落连在一起影响计数。()涂布平板计数法:平板菌落计数法的操作除上述倾注倒平板的方式以外还可以用涂布平板的方式进行。二者操作基本相同所不同的是后者先将培养基融化后倒平板待凝固后编号并于左右的温箱中烘烤min或在超静工作台上适当吹干然后用无菌吸管吸取稀释好的菌液对号接种于不同稀释度编号的平板上并尽快用无菌玻璃涂棒将菌液在平板上涂布均匀平放于实验台上min使菌液渗入培养基表层内然后倒置于的恒温箱中培养h。涂布平板用的菌悬液量一般以ml较为适宜如果过少菌液不易涂布开过多则在涂布完后或在培养时菌液仍会在平板表面流动不易形成单菌落。、计数培养h后取出培养平板算出同一稀释度三个平板上的菌落平均数并按下列公式进行计算:每毫升中菌落形成单位(cfu),同一稀释度三次重复的平均菌落数×稀释倍数×一般选择每个平板上长有个菌落的稀释度计算每毫升的含菌量较为合适。同一稀释度的三个重复对照的菌落数不应相差很大否则表示试验不精确。实际工作中同一稀释度重复对照平板不能少于三个这样便于数据统计减少误差。由各个稀释度计算出的每毫升菌液中菌落形成单位数也不应相差太大。平板菌落计数法所选择倒平板的稀释度是很重要的。一般以三个连续稀释度中的第二个稀释度倒平板培养后所出现的平均菌落数在个左右为好否则要适当增加或减少稀释度加以调整。实验特点优点:记录的都是活菌易操作缺点:微生物营养条件不一致培养基并不能是所有微生物都生长稀释度不够大可能不会形成单个菌落不易计数

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