可溶性细胞外AGEs可以与多种不同的细胞表面受体结合

可溶性细胞外AGEs可以与多种不同的细胞 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 面受体结合,其中对糖尿病并发症最重要的受体是高级唐基因化终产物受体(receptor for advanced glycation endproducts,RAGE)。这种受体可与包括AGEs在内的很多配体结合,RAGE的激活可刺激NADPH氧化酶和其他细胞内信号转导通路。活化的NADPH氧化酶产生大量的细胞质和细胞外超氧化物,超氧至少表明3-NT是糖尿病心肌细胞损伤的一个标记分子。体功能障碍与ROS的形成密切相关,并被认为在DCM的发生发展中起关键作用。此外,CA2+通道数量减少改变了心肌细胞膜CA2+-ATP 酶的活性,并且心肌细胞膜NA+-CA2+交换功能降低亦与ROS相关。 关键词:糖尿病心肌病,金属硫蛋白,内质网应激,凋亡 近来发现除循环RAS以外,在人体其他器官或组织局部还存在着独立的RAS,如心脏本身存在RAS,它并不依赖循环中的肾素、血管紧张素和血管紧张素转换酶(ACE),而是通过局部的自分泌、旁分泌和细胞内分泌系统独立发挥生物学作用。心肌组织中的ACE可使血管紧张素I(AngI)近一步转变为血管紧张素II(AngII),而血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)则可有效的抑制这种变化。心脏中多种细胞如心肌细胞、成纤维细胞、内皮细胞等均能合成AngII。AngII 主要通过其受体(AT1和AT2)发挥作用。心血管组织局部RAS在维持心血管正常结构及功能方面起重要作用,同时也参与多种心血管疾病的发病过程。研究认为糖尿病早期即存在心脏局部RAS激活,表现为心肌组织血管紧张素原、肾素、AT1、AngII含量增加,ACE及AT2活性增强,AT1数目及亲和力均增加。AngII在DCM发病中的作用机制主要包括:AngII对心肌细胞及非心肌细胞的作用:肥厚心肌中肾素、AngI、AngII、ACE和AT1表达增强,这提示心脏局部RAS的异常表达参与了心肌肥厚的发生。AngII可能在引起心肌肥厚的诸多因素中起重要作用。研究发现AT1主要分布于心肌成纤维细胞上,AngII直接作用于心肌成纤维细胞,通过细胞表面的AT1刺激心肌成纤维细胞增生及胶原代谢产生AGE交联。这可能破坏胶原蛋白的降解能力,导致胶原蛋白的积累或纤维化。胶原蛋白交联和弹性蛋白交联以及由此产生的纤维化可以引起心肌僵硬和舒张功能受损。 氧化型胆固醇所致的氧化损伤。氧化型胆固醇是一种具高度毒性的胆固醇氧化衍生物。在STZ诱导的糖尿病大鼠心脏中,7-β-羟基胆固醇和7-酮基胆固醇均显著增加,且同时伴随心肌氧化损伤。在维持心肌结构的完整性上,纤维状胶原蛋白起着关键作用。细胞外胶原蛋白的量是由基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMPs)及其抑制剂(tissue inhibitor of metalloproteinase,TIMPs)介导的合成和降解平衡决定的。MMPs在心肌重塑和心脏衰竭的病人和动物模型心脏中活性增加。胶原蛋白合成和MMPs调控紊乱被认为是糖尿病心脏功能障碍的关键因素。在糖尿病大鼠组织及体外培养暴露于高糖的内皮细胞中MMPs 活性显著增加。胶原蛋白合成及MMPs活性的增强均与ROS的形成有关,证据表明如果ROS的形成被抑制,则由高糖诱导的MMPs也可能被阻止。以上数据表明,由高血糖诱导ROS和RNS引起的氧化应激涉及DCM的发病。 心脏抗氧化能力下降。线粒体呼吸链是心肌细胞中重要的能量释放系统,氧化还原反应在此系统中持续发生。线粒体产生的超氧自由基,如NADPH氧化酶产生的超氧自由基能产生高活性自由基,从而损害细胞的DNA、蛋白质和脂质。因此有效的抗氧化系统,如SOD、过氧化氢化物又能与NO结合,形成高活性及破坏性过氧化亚硝酸盐。由于NO是一种重要的细胞信号分子,过氧化亚硝酸盐的形成导致NO的水平降低破坏了正常细胞信号。超氧化物也能转化为另一种 高活性ROS,这种羟自由基可以破坏蛋白质、脂类和核酸。通过升高胞内自由基及激活多个信号通路,活化RAGE的受体上调应激相关的转录因子NF-KB69并修正整个细胞的基因表达,在转基因高表达RAGE的啮齿目DCM动物模型中,可以降低Ca2+流失及延长Ca2+储存,心脏局部肾素-心血管紧张素(RAS)系统激活。虽然CHOP在生理状态下很少被检测到,但是在ERS状态可被强烈诱导。利用过表达和CHOP基因定位突变的研究表明,在ERS中CHOP可促进细胞凋亡。辅酶Q是线粒体能量代谢的一个重要组成部分,也是一个潜在的抗氧化剂。在糖尿病大鼠心脏的线粒体中,维生素E的浓度增加,但是辅酶Q9、辅酶Q10的浓度明显下降。研究发现糖尿病时Na+-K+-ATP酶和Ca2+-ATP酶活性异常。糖尿病可以抑制心肌肌酸激酶(CK)的火星,由于该酶含基易被氧化,因此这种变化也与ROS的形成相关IRE1-XBP1和ATF6通路可以上调CHOP、PERK-eIF2a通路选择性上调ATF4,ATF4可激活CHOP及氨基酸代谢、转运及氧化还原反应中涉及的其他基因。CHOP基因的活化石由3个内质网应激的感应蛋白即PERK,IRE-1和ATF6介导的。对于CHOP导致凋亡的下游靶目标仍然不清楚。 ASK1/JNK途径:在ERS的促凋亡期,持续活化的PERK可以上调TRAF2,进而激活ASK1,引起JNK激活,最终导致细胞凋亡。活化的IRE-1胞质酶结构域招募接头分子TRAF2并与ASK1共同形成IRE-1-TRAF2-ASK1复合物,继而亦激活JNK及下游线粒体/APaf-1依赖的caspase。此外,JNK抑制激酶(c-JUN-N-terminal inhibitory-kinase,JIK)与活化的IRE1相互作用,并进一步促进TRAF2和IRE-1的协同与磷酸化。ASK1会诱导细胞的凋亡,而在Ask1-/-的细胞中,ERS则不能诱导JNK的激活以及细胞凋亡,表明ASK1石ERS诱导JNK 的激活以及细胞凋亡所必需的。JNK磷酸化Bcl2抑制其抗凋亡活性,也可以磷酸化Bim增加其促凋亡功能。ASK1也可激活P38进而磷酸化修饰CHOP调节细胞的凋亡,因此在ERS过程中,PERK和IRE-1可能通过调节CHOP活性增加彼此的促凋亡效果。Caspase途径:caspase-12是caspase亚家族成员,其氨基端与caspase-1及caspase-11分别有39%和38%的同源性,高水平表达在肌肉、肾、肝组织中,在脑组织中有适量表达。Caspase-12定位于内质网外膜,是介导ERS凋亡的关键分子,在死亡受体或线粒体凋亡途径中均不被活化。Caspase-12缺陷鼠能抵抗ERS引起的凋亡而其他死亡刺激仍可诱导其发生凋亡,这表明caspase-12与ERS介导凋亡的机制有关,而与非ERS介导的凋亡无关。Caspase-12与其他的caspases一样一无活性的酶原形式存在。在ERS的促凋亡器中,活化的PERK能激活caspase-12,激活后,在啮齿类动物(但不包括人类)中,caspase-12从内质网移位至细胞质,在细胞质内剪接并激活caspase-9,活化的caspase-9激活caspase-3等效应,caspases,caspase-3不需要线粒体的放大而导致细胞凋亡。Caspase-12对caspase-9的激活与线粒体凋亡途径成分Apaf-1和细胞色素C的释放无关。Caspase-4被认为在人类完成这一功能。另外,延长的内质网应激与内质网储存的Ca2+释放有关,这可以干扰线粒体引起氧化应激。Ca2+诱导的氧化应激可以诱导细胞凋亡和NF-KB的激活。增加的胞职内Ca2+可以激活钙蛋白酶,后者可以蛋白水解酶Bcl-XL(抑制其活性)及caspase-12(激活)。在光治疗中内质网Ca2+消耗后,细胞凋亡迅速启动,并且在线粒体中严格需要BAX/BAK。 综述,糖尿病心肌病与金属硫蛋白的保护目前认为由于葡萄糖异常代谢而引起的氧化或氮化应激是糖尿病诱发心肌病关键的原因。因此,DCM的抗氧化治疗已成为一种颇具吸引力的侧罗。一些临床抗氧化治疗糖尿病性心血管疾病的实 验正在进行,但并未得到有益的结果,因为很难保持恒定的血浆抗氧化剂的浓度,并且无法控制抗氧化剂分布到靶点,如心脏;再者,在所有糖尿病并发症中起到关键作用的是超氧化物的过量表达,而典型的抗氧化剂如维生素C和维生素E 对超氧化物并不能起到良好的清除作用。因此,新的低分子量化合物如SOD类似物曾经被考虑作为良好的抗氧化剂。然而,这些特异清除剂在清除氧化物的同时又能产生新种类的氧化物质。如图3所示,SOD可以转变成为氧化氢和超氧化物。如果过氧化氢不能被充分地转化为水,它会转化为氢氧基,引起大分子的损伤,如蛋白质,脂质和DNA。因此,必须寻找一种内源性的、非特异性的高效抗氧化剂(能清除几乎所有的氧化产物)去清除这些活性基因,这可能比应用外源性的特异性的抗氧化剂能更有效地预防DCM。金属硫蛋白(metallothionein, MT)正好符合这个 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 。 MT的生化特征:MT是细胞内一组低分子量(6-7千道尔顿)、富含半胱氨酸(61-62个氨基酸中的20个氨基酸为半胱氨酸)、无芳香或组氨酸残基的金属结合蛋白。MT有四种异构体,但MT-I和MT=I主要存在于人类和动物的心脏等器官内。MT半胱氨基酸残基的严格保守性确保了其结合金属的特性。在胜利条件下,MT主要是与必需金属锌离子(Zn2+)或铜离子(Cu2+)结合。例如在新生儿的发育过程中,在体内通过半光氨基酸硫配体形成高和金属基鳌合簇。体外金属结合研究表明,MT存在与Cd2+、Hg2+、Bi3+、Pt2+、Ag+、As3+、Au+、Co2+和Fe2+等金属结合的差异性,此外,一些重要金属与MT结合决定其蛋白构象亦存在差异性。在其完全金属化后,哺乳动物的MT具有两个截然不同的金属基螯合簇从而形成两个不同的结构域:N端的β结构域和C端的α结构域。体内各种金属超负荷可引起MT显著上调,并且由于Zn与MT的亲和力较低,镉(Cd)和铜(Cu)在体内的增高可以取代Zn而与MT结合。虽然Cu也是人体内的必需微量元素,但当其在组织内积累过量则有毒性。事实上,由于锌具有诱导MT的特性,因此补锌已成为治疗威尔逊病的一线治疗方法,由此也体现而来MT在预防铜中毒方面的重要性。游离的铜有毒性,其与铜蓝蛋白或MT结合后便可降低其毒性。因此,有症状的威尔逊病的治疗不再是以清除积累的Cu为目的,而是将血液中游离铜浓度转化为正常化从而达到治疗铜中毒的目的。由此可见通过诱导MT的Zn治疗可以安全有效的解除游离铜造成的毒性。MT结合的铜可以储存在肠道粘膜并通过粪便排出体外。 在氧化还原稳态中的作用在组织中以两种状态存在:去金属蛋白-前MT(硫蛋白,apo-MT),一斤金属化蛋白-MT。最近Krezel和Maret 证明 住所证明下载场所使用证明下载诊断证明下载住所证明下载爱问住所证明下载爱问 了apo-MT在体内以及体外的两种形式。因此,MT有三种存在状态:一种是与七个Zn2+结合的MT,另外两种是apo-MT,或者完全还原(硫蛋白,TR)或者完全氧化(硫堇,TO)。Krezel和Maret认为MT的这三种状态之间是互相作用的。TR和TO 形成了氧化还原对,并且TR/TO取决于细胞的氧化还原电位。TR与Zn2+结合形成金属化MT,在氧化物质如NO和过氧化氢作用下MT释放出Zn2+,增加可利用的游离Zn。游离Zn可以对细胞信号产生多重影响,其作用是通过对金属反应元件结合转录因子-1(MTF-1)的结合,进而激活转录基因以调节细胞Zn 的动态平衡及于抗氧化反应,由于其螯合和还原能力,TR或者终止Zn信号或者参与TR与TO的氧化还原反应。同时也表明,多中心好通路可以调控的TR 水平,这反过来又影响Zn的氧化还原信号及Zn介导的基因表达(抗氧化防御)。此外,与Zn结合的MT,通过氧化剂氧化释放Zn并且形成To。因此一氧化氮和过氧化物等引起的氧化应激反应可以改变TR/TO的比例,也可以直接氧化 Zn-MT提高细胞游离锌水平。在心脏中的抗氧化作用MT是一种有效的、非特异性的抗氧化分子,图3红“×”显示MT所阻止和作用的位点。在无细胞系统中MT比其他抗氧化剂能更有效地作用于各种ROSs和RNSs。研究表明MT所有20个半胱氨酸的基都具有清除超氧化物、氢氧化物、氢氧根和氮化物等自由基的活性,MT比GSH清除能力高340-800倍。研究人员利用细胞或肺细胞体系进一步证实了MT对超氧化物和过氧化氢的高效清除能力。更重要的是,近期研究证明MT还能明显预防过氧亚硝酸基阴离子诱导的细胞的DNA和脂蛋白的损伤,而且在培养的细胞中观察到MT能预防多样亚硝酸基阴离子诱导的细胞毒性,然而直到最近几年,MT的抗氧化作用才在动物模型上得到证实。当大鼠暴露于含Cd环境中时,心脏MT合成显著增加,这种增加被认为是发生了抗氧化反应。小鼠皮下注射化学品会产生氧化应激,(例如百草枯和敌草快引起氧化还原循环、马来酸二乙酯消耗还原型谷胱甘肽)。心脏及其他器官MT的增加表明MT可能参与了抗氧化应激反应。康博士及其同事建造了一个在心肌细胞表达人类MT-IIA基因的转基因小鼠模型(MT-TG)。MT-TG小鼠中MT蛋白含量比野生(WT)小鼠中的要高10-60倍,并且他们仅仅定位于心肌细胞中。在MT-TG 小鼠中,其他的抗氧化剂,包括谷胱甘肽、谷胱甘肽过氧化物酶、SOD和过氧化氢酶的含量并无改变。MT-TG小鼠模型为在分子、生化和病理生理水平研究心肌MT蛋白开创了一条新的途径。采用此独特的小鼠模型,康博士团队证实MT在心脏中的功能主要是抗氧化剂,可以保护由阿霉素、缺血、再灌注、缺铜等引起的氧化损伤。最近,他们的直接证据表明,当MT暴露于氧化应激的环境中时,会产生大量MT二氧化硫,从而进一步支持了MT在心脏中的抗氧化作用。康博士团队证实在糖尿病早期,MT-TG能显著地抵抗糖尿病诱导的心肌损伤,包括降低血清中心肌酶的升高、心肌细胞死亡和形态学的改变以及后期的功能变化。防止早期心肌细胞的坏死能显著抑制后期糖尿病性心肌病的发展。这些研究有力的证明MT对糖尿病性心肌病的保护效应。进一步的研究表明:在STZ诱导的I型糖尿病小鼠模型中MT很可能是通过抑制超氧化物的作用而预防DCM 的关键病因。此前研究证明:3-NT作为过氧亚硝酸及阴离子诱导的硝化损伤作用的标记分子,在WT小鼠心脏中明显的增加,而在MT-TG小鼠中却没有。这些结果提示,似乎可以通过抑制硝化损伤(如蛋白硝化)来预防DCM。因为硝化蛋白直接影响着蛋白质的结构和功能,一些硝化蛋白可能在糖尿病心肌病发病初始阶段起关键作用。为了论证这个观点,我们最近的体内和体外研究进一步证实:抑制早期糖尿病诱导的3-NT的形成和心肌细胞凋亡能够防止晚期DCM的发生。 糖尿病应激情况下器官内金属硫蛋白的合成的表达,但亦能上调促凋亡Bim 的表达,亦能诱导内质网氧化酶1α产生活性氧簇及消耗GSH155,最终导致细胞凋亡。保护糖尿病心肌病的可能机制其同时证实,糖尿病对器官内MT表达、Zn和Cu的含量产生影响。实验证明,在STZ诱导糖尿病大鼠模型7-28天后,大鼠肝脏及肾脏中MT的含量明显增加。肾脏中的MT主要与Cu结合,肝脏中的MT与Zn和Cu结合。与正常大鼠相比,糖尿病大鼠肝脏中Zn/Cu比值增加,而肾脏中Zn/Cu比值降低,这表明糖尿病时,至少在肝脏中,非金属因素可以诱导MT的合成。在自发1型糖尿病BB大鼠或ob/ob糖尿病小鼠中,肝脏和肾脏中MT的合成也增加,所以可以推测STZ诱导的糖尿病大鼠器官中MT的合成并不是STZ依赖的。在STZ诱导的糖尿病动物模型中,胰岛素的补充可以抑制肝脏和肾脏中MT合成的增加。此外,直接暴露于高糖的内皮细胞也可在mRNA 和蛋白水平上诱导MT-II的表达增加。最近的研究证实在糖尿病状态下, MT-IImRNA在脑、视网膜、骨骼肌及心脏等器官的表达亦增加。使用Northern blotting测定MT-IImRNA及使用免疫印迹测定MT总蛋白发现,在STZ诱导的糖尿病小鼠心脏中MT合成显著增加。此外,通过喂食高脂饮食诱导高脂血症的大鼠模型中,可以观察到心脏MT-IImRNA有2-3倍的增加。这两项研究表明,在STZ诱导的高血糖和高脂饮食引起的高脂血症中,心脏诱导MT II亚型升高的模式相似。在糖尿病造模成功后2周及8周心脏中,虽然MT合成显著增加,但各种金属并没有改变。与这一发现相符,其他研究表明在糖尿病大鼠造模成功后5周心脏中铜含量没有变化,而肾脏中铜含量则明显增加。这两项研究表明,糖尿病心脏MT的诱导与心脏中金属物质的升高无关。总之,糖尿病状态下,心脏中MT的合成特点如下心脏中MT合成升高的程度高于肝脏和肾脏中,心脏中MT的合成与锌、铜等金属含量增加没有关联性,MT的诱导主要与糖尿病应激相关,与STZ的诱导无关。 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)操作步骤 (1)将玻璃板用甲醇洗净,安装电泳槽。根据目的蛋白分子量配制10%的下层分离胶,灌注分离胶至大约玻璃板2/3高度,分离胶上灌满蒸馏水。待凝胶聚合后,倒掉蒸馏水,并用吸水纸将凝胶界面的蒸馏水吸净。 (2)将样品与样品缓冲液混合,100°C开盖煮沸5min。浓缩胶聚合后,将电泳缓冲液倒入电泳槽,拔掉梳子,将100um蛋白样品依次上样硝纤膜与一抗反应液的反应,4°C过夜。洗膜:一抗反应过后,用xTBST洗膜振荡洗膜3次,分次3min。与二抗反应:根据一抗选用合适的二抗,用封闭液配制辣根过氧化物酶标记的二抗将硝纤膜浸入小型培养皿中的二抗反应液中,温室振荡孵育1h 洗膜:二抗反应过后,用xTBST洗膜液振荡洗膜3次,分次3min。将上述反应过后的硝纤膜进行ECL(增强化学发光)显色。用ECL试剂盒间接检测蛋白的表达水平。将ECL试剂盒中的A液和B液等量混合,反应1min后,用透明塑料袋包好,将PVDF膜放入x光片暗盒,在暗室中压片,显影,定影。放入凝胶成像系统中拍照保存待 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 。金属硫蛋白检测:用改良免疫印迹法检测MT表达。蛋白的提取及含量的测定:心肌组织于4°转离心10分钟,取上清液保留。免疫印迹结果显示在野生型糖尿病小鼠模型心肌中,ERS标志物p-eIF2a、GRP94蛋白在造模成功后2周明显升高,5月模型中未见变化。GRP78蛋白在三个时间点均升高,但以2周、模型肌中升高最为明显。而MT转基因糖尿病小鼠心肌中ERS标志物未见升高。免疫印迹检测野生型及MT转基因糖尿病小鼠心肌p-eIF2a。小剂量多次腹腔注射STZ诱导糖尿病模型。注:与对比照比较,*P<0.05免疫印迹检测野生型及MT转基因糖尿病小鼠心肌GRP94。小剂量多次腹腔注射STZ诱导糖尿病模型。注:与对比照比较,*P<0.05免疫印迹检测野生型及MT转基因糖尿病小鼠心肌ATF6。小剂量多次腹腔注射STZ诱导糖尿病模型。注:与对比照比较,*P<0.05免疫印迹检测野生型及MT转基因糖尿病小鼠心肌GRP78细胞培养相关试剂及配制心肌细胞H9c2ATCC CLR-1446 Rockville MD USAMT 转基因H9c2MT7细胞University of LouisvilleDMED培养液Atlamta Biologicals Norcross GA USA磷酸盐缓冲液。胰蛋白酶实验方法:糖尿病大鼠模型的制备与分组8%的下层分离胶,灌注分离胶至大约玻璃板2/3高度,分离胶上灌满蒸馏水。待凝胶聚合后,倒掉蒸馏水,并用吸水纸将凝胶界面的蒸馏水吸净。蛋白标本加入终浓度为20mM的DTT于56°C作用于30分钟,随后再加入终浓度为50mM的碘乙酰胺室温暗室作用1小时5%浓缩胶,将浓缩胶灌注分 离胶上部,插入梳子,待浓缩胶聚合凝固。浓缩胶聚合后,将电泳缓冲液倒入电泳槽,拔掉梳子,将100um蛋白样品依次上样。应用高速搅拌器在组织裂解液(2%SDS,10%甘油和62.5Mm Tris,PH7.0)中裂解心肌组织,4°C,12000g 离心10分钟后收集上清液,测定蛋白浓度,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)。 (3)配制5%浓缩胶,将浓缩胶灌注分离胶上部,插入梳子,使用Bio-Rad蛋白分析试剂盒测定蛋白浓度。SDS-PAGE操作步骤将玻璃板用甲醇洗净,安装电泳槽;根据目的蛋白分子量配制1按照以下次序安装转印夹层,依次叠加“纤维垫-滤纸-凝胶-硝酸纤维素膜-滤纸-纤维垫”,排出每层的气泡;随后在40V 4°C 含2Mm CaCl2膜缓冲液中转硝酸纤维膜2.5小时转膜完毕后,硝酸纤维膜温室暗室浸泡于2.5%戊二醛1小时。随后用磷酸盐缓冲液洗2次,每次5分钟,(再用含50Mm 2-氨基乙醇的磷酸盐缓冲液清洗5分钟以清除过量残余戊二醛。)蛋白质印记操作步骤A封闭:转膜完毕后,TBS漂洗1~2分钟后,取出电转移完毕的硝纤膜至封闭(5%脱脂牛奶和0.5%牛血清白蛋白),温室下震荡封闭1h 或者4°C封闭过夜,用TBST(含有0.05%Tween20)洗涤3次。随后用1:1000溶于3%小牛血清,荧光显微镜01ympus IX70C)凝胶图像处理系统Alphaimager2200,美国Pharmacia BiotechBillups-Rothenberg modular incubator chamber(Billups-Rothenberg,Inc;Del Mar,CA)主要试剂的配制免疫印迹相关试剂及配制浓缩缓冲液(Upper tris buffer for western blottingTris base6.06g免疫印迹结果显示,抗氧化剂MnTMPyP或NAC预处理H9c2细胞系及MT-IIA转基因H9c2MT7细胞系后,明显抑制AngII诱导的p-eI创新点糖尿病及AngII诱导心肌ERS及心肌细胞凋亡。心肌细胞高表达的MT抑制糖尿病、AngII及衣霉素诱导的心肌ERS及ERS介导的心肌细胞凋亡。AngII通过其氧化应激作用诱导心肌ERS及ERS介导的心肌细胞凋亡。MT通过其抗氧化作用抑制AngII诱导的心肌ERS及ERS介导的心肌细胞凋亡。 (4)在1型STZ诱导的糖尿病小鼠及在高脂饮食引起的高脂血症大鼠中均能观察到MT的诱导。 (5)MT在糖尿病动物心脏的合成似乎与糖尿病引起的氧化应激有关,并可能作为一种适应性反应。2GELS 10%1DD10ml Lower buffer(room temp)5ml 40% Acryamide/Bis solution(37.5:1,2.6%,-20) 5ml10%APS(-20)100u 1TEMED (room temp)20u lTUNEL染色相关试剂及配制蛋白酶KDAB显色平衡缓冲液Equilibration Buffer:3.0mL反应缓冲液Reaction Buffer 2.0 mL末端脱氧核苷酰酶酸转移酶(TdT)TdT Enzyme 0.64mL终止缓冲液Stop/Wash Buffer 2.0mL Anti-Digoxigenin-Peroxidase*3.0mL塑料盖片(Plastic Converslips)待浓缩胶聚合凝固。