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【doc】人源化肿瘤血管移植瘤模型的建立及应用【doc】人源化肿瘤血管移植瘤模型的建立及应用 人源化肿瘤血管移植瘤模型的建立及应用 《癌症》ChineseJournalofCancer,2006,25(11):1323—13281323 人源化肿瘤血管移植瘤模型的建立及应用 冉宇靓,钟星,,胡海,遇珑,娄晋宁,杨治华 EstablishmentandApplicationofEngraftedTumorModelswith HumanizedTumorBloodVesseI RANYu—Liang,ZHONGXing,HUHal’,YULong’...

【doc】人源化肿瘤血管移植瘤模型的建立及应用
【doc】人源化肿瘤血管移植瘤模型的建立及应用 人源化肿瘤血管移植瘤模型的建立及应用 《癌症》ChineseJournalofCancer,2006,25(11):1323—13281323 人源化肿瘤血管移植瘤模型的建立及应用 冉宇靓,钟星,,胡海,遇珑,娄晋宁,杨治华 EstablishmentandApplicationofEngraftedTumorModelswith HumanizedTumorBloodVesseI RANYu—Liang,ZHONGXing,HUHal’,YULong’,LOUJin—Ning,YANGZhi—Hua’ 1.中国医学科学院 中国协和医科大学 肿瘤医院/肿瘤研究所 细胞生物及分子生物学室. 北京l0o02l 2.中日友好医院 临床医学研究所. 北京l0o029 1.DepartmentofCellularand Mo~cularBiology, CancerInstitute/Hosphal, ChineseAcademyofMed&al &ience$&PekingUnionMed&al Coge,Beijing,lo0o2l, PR.ina 2.,eofClinicalMedicine. JapanFriendshipHosphal, China— Beijing,100029, P.R.China 通讯作者:杨治华 Correspondenceto:YANGZhi—Hua Tel:86一l0—87788439 Fax:86—10—67783169 E—mail:yang_ zhihua_ prof@yahoo .com.cn 基金项目:国家自然科学基金重 点项目(No.30230150);国家重点 基础研究发展规划”973”项目 (No.2002CB513106) Grants:NationalNaturalScience FoundationofChina(No. 30230150);NationalKeyBasic ResearchProgramFoundationof China(No.2002CB513106) 收稿日期:2006—08.31 修回日期:2006—10.08 快速报道? 『ABSTRACT]BACKGROUND&OBJECTIVE:AnimaImodelsare indispensableinthestudiesoftumorendothelialgenesandanti—angiogenic therapyThisstudywastobuildanewengraftedtumOrmodelwith humanizedbloodvessels.METHODS:HumanIiversinusoidendothelia}cells fHLSECs)weremixedrespectivelywithhumanIivercancercelIIine BEL7402.humancoloncancercelllineLS174T.andhumanesophageal cancercelIIineNEC.andtheninoculatedintoNOD/SCIDmiceorBALB/c nudemiceThemiceinoculatedwithonlytumOrcellswereusedascontrols. TumorgrowthwasobservedGreenfluorescentprotein(GFP)一labeled HLSECswereobservedunderfluorescentmicroscopetodetecttheirsurvivaI andtubeformation.MicrovesseIdensity(MVD)wasanalyzedby immunohistochemistry.Thetumo卜 bearingmiceweretreatedbyanti—HLSEC monoclonaIantibody2B6toobserveitseffectontumOrgrowth.RESULTS: TumOrgrowthwassignificantlyenhancedbytheco—inoculationofHLSEC s withBEL7402cellsinNOD/SCIDmice:tumOrweightwasincreasedby5.1 foldsascomparedwiththatofcontroI.GFP—labeledvesselscouldeasilybe observedinthetumorsfrOmco—inoculationofHLSECswithBEL7402cells. TotaIMVDwasincreasedby85.7%ofcontroI.ThehumanizedMVDwas about1028-2928.whichwas41%一 65%oftotaIMVD.FurthermOre.theco— inoculationofHLsECswithNECs.BEL7402.orLs174Tcellsinnudemice Iedto3.3-6.0foldsincreaseofxenograftweightascomparedwithcontroI. Whentreatedwith2B6antibody.humanizedMVDwasdecreasedby65.1% intheengraftedtumorsandthetumOrweightIost71.8%CONCLUSIONS: Whenco—inoculatewithhumantumOrcelIIinesintomice.HLSECscould survive,proliferate,andcontributetotumorangiogenesis,whichmay enhancetumOrgrowth.TheengraftedtumOrv|0mode1withhumanized vesselscanbewidelyusedintheresearchoffunctionaIgenesintumOr angIOgenesIsandanti—angiogenictherapies. KEYWORDS:MicrovesseIendotheliaIcells:HumanizedtumorvesseI: EngraftedtumOrmodel;Microvesseldensity;Mouse 【摘要】背景与目的:目前在肿瘤内皮细胞基因功能和靶向血管治疗 肿瘤的 研究中仍缺乏适宜的动物模型.本研究拟建立一种新的小鼠人源化 肿瘤血管移 植瘤模型.方法:将人肝窦微血管内皮细胞系 (humanliversinusoidendothelial cells,HLSEC)分别与人肝癌细胞系BEL7402,人结肠癌细胞系LS174T,人食管癌 细胞系NEC按不同比例混合共接种NOD/SCID小鼠或BALB/c裸小鼠.以单独 接种肿瘤细胞的小鼠作为对照组,观察小鼠人移植瘤生长的情况.采用绿色荧光 蛋白基因(greenfluorescentprotein,GFP)转染HLSEC,结合荧光显微镜检方法观 察HLSEC在共接种移植瘤中的存活及血管形成的情况.免疫组化法检测肿瘤内 微血管密度(microvesseldensity,MVD).用抗人肝癌内皮细胞单抗2B6处理人肝 1324冉宇靓,等.人源化肿瘤血管移植瘤模型的建立及应用 癌移植瘤共接种模型,观察2B6对肿瘤生长的影响.结果: HLSEC与BEL7402细胞共接种NOD/SCID小鼠时,共接种 组肿瘤生长速度显着加快,平均瘤重可达肿瘤单独接种组 的5.1倍.在GFP表达阳性的HLSEC与BEL7402共接种 的移植瘤冰冻切片中可见HLSEC的存在,并已形成瘤内新 生血管.免疫组化检测发现共接种组移植瘤中的总MVD 较肿瘤细胞单独接种组增加85.7%,采用抗人vwF多抗检 测结果显示共接种组人源微血管平均MVD可达l0.28, 29.28.约占总血管数量的41%,65%.进一步将HLSEC分别 与NEC,BEL7402及LS174T细胞共接种于BALB/c裸小鼠 时,共接种组的瘤重是单独接种组的3.3,6.0倍.2B6单抗 能使共接种人肝癌移植瘤中人源肿瘤血管密度减少 65.1%,抑制肿瘤瘤重达71.8%.结论:HLSEC与人肿瘤细胞 共接种小鼠后,能在移植瘤中存活,增殖,形成大量人源化 的肿瘤新生血管,并在促进肿瘤快速生长中起重要作用.该 小鼠人源化肿瘤血管移植瘤模型可为肿瘤内皮细胞相关基 因及靶向治疗剂的研究提供一个新的有价值的工具. 关键词:微血管内皮细胞;人源化肿瘤血管;移植瘤模型; 微血管密度:小鼠 中图分类号:R73文献标识码:A 文章编号:1000—467X(2006)11—1323—06 靶向肿瘤血管治疗肿瘤已被公认为是具有良 好前景的新策略l1..由于离开了体内微环境的内 皮细胞的蛋白表达谱发生了显着改变.因此最 终仍然需要在体内肿瘤血管模型中研究肿瘤内皮 细胞相关基因的功能以及靶向肿瘤血管治疗药物 的作用和机制.这类模型现在主要有三种:小鼠肿 瘤4l,小鼠移植瘤和体内血管生成模型前两 种模型的血管内皮细胞均来源于小鼠宿主.其基 因表达谱与人内皮细胞有着显着不同,难以准确 反映实际的人肿瘤血管生成过程.体内血管生成 模型包括鸡胚绒毛尿囊膜,兔角膜血管生成等异 源模型,以及近年建立的模拟体内人血管内皮细 胞受诱导形成新生血管过程的多种体内人源血管 生成模型_6-9].但目前仍无处于肿瘤微环境中的人 源肿瘤血管模型的报道 人肝窦内皮细胞系HLSEC(huma13liver sinusoidalendothelialcel1)是由分离的正常人肝窦 内皮细胞转染人端粒酶和SV40T抗原基因永生 化转化而来的[10,”],具有活化的人正常微血管内皮 细胞的特征和标志物,为体内模拟肿瘤血管生成 提供合适的靶细胞.本研究应用HLSEC与人肿瘤 细胞共接种严重免疫缺陷的小鼠.检测了HLSEC 在小鼠移植瘤中的存活情况以及参与肿瘤血管形 成促进肿瘤生长的作用,以期建立小鼠人源化肿 瘤血管动物模型. 1材料与方法 1.1材料 1.1.1细胞与动物人肝窦内皮细胞系HLSEC, 人脐静脉内皮细胞(humanumbilicalvein endothelialcel1.HUVEC)由北京中日友好医院临 床医学研究所提供.人肝癌细胞系BEL7402,人结 肠癌细胞系LS174T,人食管癌细胞系NEC由本室 保存.非糖尿病型重度联合免疫缺陷杂交双突变 NOD/LtSz—scid/scid雌性小鼠『简称NOD/SCID小 鼠,合格证号scxk(京)2005—0013]购自中国医学 科学院动物研究所,BALB/c—nu/nu雌性裸小鼠购 自北京维通利华生物公司『合格证号scxk(京) 2002—0003]. 1.1.2试剂和质粒常规细胞培养试剂均购自 Hyclone生物公司.内皮细胞生长添加剂 (endothelialcellgrowthsupplement,ECGS)由本室 制备.Lipofectinamine购自GibcoBRL公司.兔抗 人vwF多抗,DAB购自DAKO公司.鼠抗CD31单 抗购自SantaCruz公司.生物素化羊抗兔,羊抗鼠 二抗,HRP—Avidin购自TaKaRa公司.抗人肝癌内 皮细胞鼠单抗2B6为本室研制,鉴定,制备,体外 研究已经证明该单抗能显着抑制人肝癌内皮细胞 增殖和成管.含绿色荧光蛋白(greenfluoresceut protein,GFP)基因的重组质粒pEGFP—N1购自 Clontech公司. 1.2方法 1.2.1细胞培养HUVEC用含20%FBS的 DMEM完全培养液培养,添加100~g/mlECGS. 40U/ml肝素钠.HLSEC用含10%FBS的DMEM 完全培养液培养.人肿瘤细胞BEL7402,LS174T, NEC均用含10%FCS的RPMI一1640完全培养液 培养.所有细胞均在37~C,5%CO条件下培养 1.2.2pEGFP—N1质粒转染HLSEC内皮细胞按 试剂盒说明书所述进行,待出现抗性克隆后挑取 单个细胞集落,获得的pEGFP—N1质粒转染后稳定 表达GFP的HLSEC细胞克隆称为HLSEC/GFP 1.2.3流式细胞术检测HLSEC/GFP细胞中GFP 的表达收获对数生长期的HLSEC/GFP内皮细 胞,PBS洗涤3次后,将细胞悬浮于PBS/乙醇溶液 中,用10~g/ml的碘化丙啶(PI)染色30min.上 流式细胞仪检测GFP和PI荧光阳性的细胞 1.2.4动物模型为了确定HLSEC与BEL7402 冉宇靓,等.人源化肿瘤血管移植瘤模型的建立及应用1325 细胞共接种时HISEC对移植瘤生长的作用,将 HISEC和BEL7402细胞共接种于NOD/SCID小鼠 背中部两侧,每侧1组,设HLSEC/BEL74021:1 (5x105:5X10s),2:1,4:1,8:1混合,以及单独5×1O BEL7402,单独4×10HISEC组共6个组,每组5 只小鼠为了确定HLSEC与BEL7402细胞共接种 后HISEC内皮在移植瘤中的存活,增殖和形成血 管的情况,将2xlOHISEC/GFP与5×10BEL7402 细胞共接种于NOD/SCID小鼠背中部右侧,将5× lOsBEL7402单独接种于同一小鼠背中部左侧,共 接种5只小鼠;同时将2X10HUVEC与5X10 BEL7402细胞共接种于另一组NOD/SCID小鼠背 中部右侧,将2x106HISEC/GFP单独接种于同一 小鼠背中部左侧,共接种5只小鼠.为了确定 HISEC与人肝癌细胞建立的小鼠人源化肿瘤血 管移植瘤模型的通用性,将HLSEC细胞分别与人 结肠癌细胞LS174T,人食管癌细胞NEC和人肝 癌细胞BEL7402按4:1比例(2x10:5×10)共接种 4,6周龄的BALB/c雌性裸小鼠背中部皮下.同 时分别单独接种5X10这3种人肿瘤细胞系或 2X106HISEC于BALB/c裸小鼠背中部皮下,每 组6只小鼠.所有动物均在接种28天后处死收获 肿瘤.称取瘤重.然后制备10%中性甲醛固定的 石蜡包埋组织切片或新鲜组织冰冻切片备用. 1.2.5荧光显微镜观察共接种的移植瘤中的 HISEC取2x10HISEC/GFP与5×10BEE7402 细胞共接种的移植瘤,进行冰冻切片.用荧光显微 镜观察镜下HISEC中GFP的发光情况. 1.2.6抗血管实验将2X10HLSEC与5XlOs BEL7402细胞共接种BALB/c裸小鼠背部.14只 共接种的裸小鼠随机分成2组,每组7只.实验组 接种后5天开始用ProteinG亲和纯化的抗人肝癌 内皮细胞单抗2B6100txg腹腔注射.开始每天一 次连续5天,后改为每周2次,连续2周;对照组 采用相同体积的PBS代替单抗,其他与实验组相 同.从接种后第7天开始测量肿瘤大小.每2天测 量1次,绘制肿瘤生长曲线.接种后28天处死小 鼠,收获肿瘤,称量瘤重,制备10%中性甲醛固定 的石蜡包埋组织切片备用. 1.2.7免疫组织化学检测移植瘤微血管密度 (microvesseldensity,MVD)移植瘤组织切片采用 常规方法脱蜡水化,去除内源性过氧化物酶,微波 炉修复抗原,羊血清封闭后,与相应一抗反应,再 分别与相应的生物素标记的二抗及Avidin—HRP反 应.DAB底物溶液显色,常规苏木精复染.检测组 织切片中的人源化微血管均采用兔抗人vwF多抗 (仅与人vWF反应)作为一抗染色,检测总微血管 均采用抗CD31鼠单抗(与人或鼠的CD31均反 应)作为一抗染色.MVD为200倍光学显微镜下观 察并计数15个有较多血管分布的”高热区域”被 染色微血管数量的平均值. 1.2.8统计学分析采用方差分析和student’St 检验分析相关数据.数据以互?s表示,P<0.05认为 有统计学意义. 2结果 2.1HLSEC与BEL7402细胞共接种对移植瘤生 长的影响 2.1.1HISEC与BEL7402细胞共接种模型的建立 共接种HLSEC的移植瘤的生长均显着快于单独 接种BELT402组;共接种组的移植瘤生长随 HISEC共接种时所占比例的增高而显着增快.收 获肿瘤后,每组的移植瘤瘤重分别为:BEL7402组 (0.15?O.05)g,BEL7402+HLSEC(1:1)组(O.21? O.08)g,BEL74O2+HI5EC(2:1)组(O.39?O.07)g, BEL7402+HLSEC(4:1)组(O.73?O.21)g,BEL7402+ HLSEC(8:1)组(0.82?O.26)g.4:1与8:1共接种组 (P>0.05)的生长显着快于1:1和2:1组.而单独接 种4x106HISEC细胞并不能形成任何肿瘤. 2.1.2接种部位对共接种移植瘤生长的影响将共 接种组分别接种NOD/SCID小鼠右侧背前部,中 部,后部,对照组单独接种于同一只小鼠左侧背前, 中,后部,共接种5只NOD/SCID小鼠结果背前 部,中部,后部共接种形成的肿瘤平均瘤重分别是单 独接种BEL7402的2.9,6.8和4.8倍(资料略),且 背中部的肿瘤更不易产生液化现象.故选择小鼠背 中部作为人源血管模型的接种部位. 2.1.3HISEC对移植瘤生长的促进作用根据 前面的结果,共接种组接种在NOD/SCID小鼠右 侧背中部,对照组单独接种于同只小鼠左侧背中 部.结果共接种组的移植瘤生长速度显着快于单 独人肝癌细胞接种组(图1),单独接种BEL7402 组瘤重为(0.15?O.10)g,共接种组的瘤重为 (0.73?O.31)g,其平均瘤重是单独人肝癌细胞接 种组的5.1倍 2.2HLSEC在共接种移植瘤中存活,增殖并参与 形成人源化肿瘤血管的情况 2.2.1GFP基因转染HISEC所获的数十个抗性 26 圉lH【:共接种对BF2L74{12穆植瘤生长的影响 FlgunIlnl?I?l…’_?l川??lIlihiI~iIJ~llIMf?u…】 |.|lft1wIiaI?《III,s)onHILL74{}2Iiiflcjl 克隆存荧光傲镜下观察时均绿乜荧光( 2A】.亲奉I1lSEC米荧光这些转染后稳定表达 GFP的HL4EC』胞舡隆称为IH.SEC/{;lq’.流式细 胞仅掩删GFP表达?门性n勺胞达80c/~1. 222荧光徽链观察HL=SEC在共按种移植瘤巾 呐仔活增殖和彤心血管接利-28犬后慷扦绢肿 蠕组织制n冰切片井在荧光显做镜l直接观察, 结果髓现III~qEC/{;FP共接种组的肿瘤组织j:』J片 iIt均可见到发出绿色荧光的内皮细胞排列帔血管 ?佯的网状结佝(图2B).共军血管状(图2C)在 王虬REL7402卸l胞接种组和HUvEC共摊种组小 鼠肿j宙球冻片巾J求到朽发绿色荧光的细胞 223免疫纠化榆删共接种移植懂中人源化血竹 的形成接种28天服各纰肿瘤组纵制作百蜡 包埋的切片进行电症l化f洲结果hILSEC BEI7402#接种组平均总Mvr)(4504~376)高 于fluvE{2与BEL7402共搂种组干”BEL7402独 接种组(r_均MVD分别为2652~249和2426? 316)约698曙,857%f在ItL~EC共接种组i见 刮人vWI染色m性的人源痛微血管.平均MvI】 为2l82~348.约占移植瘤总撇血管的484%而 lILTVEll与BEL7402共接种自【和BEL7d02单独搂 种组巾均束见人,WI’染包阳性的染包刚性的人溉 肿哺微儿u管(罔3)另外.检测各不同Hi=SEC比削 接种组肿僖切片的结粜还埕珊随着HLSEC所 ItTl】t……wrxl.rI 【I_I?【ln?,L,IJII1wilr~r…1I1[t|1jFtI}I |_Il:}1 【:. 【…,?,【h…ll,LILSK{.~1’11En…?_1. %11i?dhv?’Iu_nt~a]i:l’ JBA[.B/棵小胤28天叫,’卜J勺嚼最分别为 (0i5?()(JI)g(0l6~002)g和(029~004)g术 到凡vWF染色阳的微InL符:与Hl其接利于 BAIB/{裸小鼠叫.均埔分Il为(【148~{1061g (079~0I3)gl(I74e027)g人豫化血符的MvI1 分刑为l028?194,1868?268和!q28?3I8: HLSEC单蚀接种十BAIB/t惮小nf.元肿埔彤 成也未见到人wr染色…的做巾1管 Ht其接种时,食管痫,肝癌肢结肠癌髂干ilI痈生 长逮度明增加共拉种均蠕j;]J是单独 接种l:un々33倍5俯嗣』6俯 24在裸小鼠人源化肿瘤血管移植瘤模型中评价 抗体靶向血管抑制肿瘤的作用 对r确定1II.4EC与人川痈细胞共接种[】勺小 鼠凡源化肿痛血管移植瘤横崩?平价机I血符药 物的疗敏&作用研究的价值.?采垌一株件外 具有抑制人肝癌内应细胞J骨殖,成符的肚抗2B6 进行J抗血管抑制肿瘤生t?的寅骑结泉经2B6 机体作蚪I后,人刖:癌移情.的K融皿蔷抑制寅 验胡平均瘤重显皆小于PBS划照组平均瘟亚 l(0.35+-0t1v(I24~0321P(0051.抑靠Ii牢 达到7l8晡龟疫组化卡龟删结果表明抗体宜验组 ?甲增的八源化MVD和总MVI)什圳为703?I93 匍8??289,对照组fj勺人豫他M:Iqill1]anlz~fJrh,I|t ‘…IflL1iwFwI?,…l,……d11I|_1111~11vIfi:[unlOF 【}…I…1P…1IHLEc’_.__{flEl,7402IIM{hi【: …J…J,……f?U,f圳{I膻7402JkRJ|】n1…l,c【IlJi,ll,,JtEI7402nII】?Ilr???lntlId l?vch.1l……IIi._l1…Ing1…|r?|I…rn…t,i…I|lII?fheFtll”IM,_DinIull川rthriveI1lr_1m?ir,oc.…l01IIIEIl’??d BEI7~.1l2r.I…i-T}ifirIIlli【lt]lmllhr…I【?Ium-rlI…riIfrom?In.?l…1c】,IltvECs_l?ciBE1.7402I.rIun_0r1{r【】 -…il.lLati1n|1rBEI7,~fl211…allrhtlI?l?J?lJv…k?lv1,uJlzcdIrl…l{If.i1”r【fromf-i1-,iiJl?l?『l}IlIFf~r,iIREL.7402 l1l…IlrYisqJallI__1ll_Ihem…nrI…d…n,1n?_I】}LI…ii(1f__tI?fridBEL7402”llul’r|_lu…1rd*’riYI”gllkhinolrUbllit~nLIr REI7402nIlll?|_ 为r克服H各种体内人根化管模型的缺 陷我们建立丁一种处于l】ll’瘤澈环境Il,的iJ,鼠几 源化1申埔管模型我fi’J苗先采川r永牛化的人 旰窭内皮内应}H胞系HISEt]与人肝痈细咆 BEI.7402濉台共接种免疫排斥厦成骶的I)D/ sclrl小鼠.结果泄f,打liTSEC的接神绀肿痛的 ,#长速度显着快丁单独接种肿精细胞组.其瘤重 是单独接种组的5I倍.丧明共接种1IISEC移 植瘤的,E托建度『1JJ{增,I确定共接种的 IIISEC在人移世巾的去向我们采用转GFP 米不踪移植瘤中jI接种的HLSEC结果用荧光 微观察共接种组移植情组织,可看到HLSEC排列 成l管状结构.并且形成了广泛的网状排列.明 接种晌HLSEC在移植哺一l_小仅l乇刺存活,增 殖.还能生成巾人源内,髁小};l仍仃定的 宿主抗移植物免疫排斥反l世fR当我们舒州用 II_SE(‘与人站肠癌自管痫或肝墙纠胞J接种 BAIB/c谍小鼠.I然i*得了NOD/SCID小鼠横 中相同呐结果,遮l可能址巾JIIL~EC处于体内 肿痫撇,境中受到保护或增靖加的缘战共接 种的HE(裸小鼠人移植痈中样可姒存活, 增殖.形成占移楠瘤总血管密度4I嘶,65嘶(资料 略)的人源比1中值新生血霄几结肠痈,肝嘲,食管 瘸穆植蝤的生K电苦J川,幅重增加33—60 倍这种处十瘤做环境f的裸小鼠人僳化肿幅 『f【L管模型为研究人肿嘈内皮细胞相关基因功能和 作机理.厦抗血管治疗肿究提供一种廉 价易撮作,县有一定通用的动物模型我随 后采用谖模型1,F价丁在体外证实能抑制人J扦墙内 皮蜘舱增殖和成管肿功能性单拖2B6抗cm静抑制 和 % 降 F M 和 n V M靴论 螂讨 组3 1328冉宇靓,等.人源化肿瘤血管移值瘤模型的建立及应用 肿瘤生长的效果.2B6治疗组平均人源化MVD与 对照组相比下降了65.1%,其平均瘤重也减少了 71.8%.表明2B6能抑制移植瘤中人源肿瘤血管的 形成从而显着抑制肿瘤生长.这进一步提示该模 型中的人源肿瘤血管在促进人移植瘤的快速生长 中起着重要的作用.同时也说明该裸小鼠人源化 肿瘤血管模型可用于抗人肿瘤血管靶向治疗剂的 筛选和评价 肿瘤血管内皮细胞是肿瘤新生血管形成的关 键和物质基础.随着第一个抗血管靶向治疗药物 Avastin正式用于临床?而倍受关注.已成为肿瘤 研究的新热点[13].但目前研究人肿瘤内皮基因功 能和抗血管治疗肿瘤研究尚缺乏合适的人源肿瘤 血管体内模型,仍主要采用小鼠同源模型].体内 人源血管生成模型已有成功的报道.如Bussolati 等l6将人肾癌血管内皮细胞混于含有生长因子的 基质胶中移植SCID小鼠中生成了嵌合血管,但这 类模型中的人源内皮细胞不是处在肿瘤组织微环 境中,难以代表肿瘤新生血管的形成过程及特征. 也有研究者尝试将人血管内皮细胞与肿瘤细胞共 接种建立人源化肿瘤血管模型,如Koizumi等将 HUVEC或人大动脉内皮细胞在肿瘤细胞接种后 的第1,3天注射到相同接种部位,但在肿瘤组织 中未见到人内皮细胞的存活及形成血管.这与我 们报道的关于HUVEC与人肝癌细胞共接种的结 果一致.Nor等l7.]采用人皮肤微血管内皮细胞与 人肿瘤细胞共接种SCID小鼠,虽然观察到人内皮 细胞存活并参与了肿瘤血管生成,但不能显着促 进肿瘤的生长,提示其在肿瘤生长中未发挥重要 作用.在本研究中HLSEC共接种后能在多种小鼠 人移植瘤中存活,增殖,并形成有显着促进肿瘤生 长功能的人源肿瘤新生血管.我们认为其原因可 能是(1)HLSEC是永生化内皮细胞,虽然单独接种 不能形成肿瘤,但体外培养时不需要生长因子即可 增殖传代,具有较强的存活能力.可能在度过共接 种后最初几天的肿瘤无血管生长期后依然有相当 数量的HLSEC存活下来.并参与接下来的肿瘤新 生血管生成过程.(2)HLSEC与肿瘤细胞共接种. 保证了存活的HLSEC在初始期就较全面地参与了 肿瘤血管网的形成.(3)HLSEC具有活化的人微血 管内皮细胞的特征,在体内可能具有更强的肿瘤微 血管生成能力,更容易在肿瘤微环境中受诱导生 成大量的肿瘤微血管支持肿瘤的快速生长一些 以往的报道也从侧面的支持了这些观点l9ls- 总之.采用永生化的人肝窦内皮细胞HLSEC 与人肿瘤细胞共接种.使得HLSEC不仅能在肿瘤 中存活,增殖,而且参与了肿瘤新生血管的形成, 在肿瘤中形成了大量的功能性人源化肿瘤血管, 增加了肿瘤血供.显着地促进了肿瘤的快速生长, 从而在小鼠中建立了一种新的人源化肿瘤血管移 植瘤模型.该模型将可能为研究肿瘤新生血管形 成的分子机理,肿瘤内皮细胞相关基因的功能以 及抗人肿瘤血管靶向治疗剂的筛选和评价提供一 个新的有价值的工具. 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分类:生活休闲
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