乙醇对家兔离体小肠平滑肌活动的影响

乙醇对家兔离体小肠平滑肌活动的影响乙醇对家兔离体小肠平滑肌活动的影响乙醇对家兔离体小肠平滑肌活动的影响班级: 法医0901 实验室 301 组员:古忱苏秦韦甜许灵邵梦远陈惟【实验目的】本实验以家兔离体小肠为标本,观察不同浓度乙醇对离体小肠平滑肌活动的影响,进一步了解乙醇与人体健康的关系。【实验原理】乙醇可抑制心肌自律性和降低心肌收缩力。消化道是乙醇进入体内最先受刺激的部位,乙醇进入胃内可造成胃粘膜损伤,但乙醇对小肠活动有何影响,目前还不十分清楚。有研究报道,乙醇对心肌细胞钠离子跨膜内流有一定抑制用,对心肌细胞内贮存的钙...

乙醇对家兔离体小肠平滑肌活动的影响乙醇对家兔离体小肠平滑肌活动的影响班级: 法医0901 实验室 301 组员:古忱苏秦韦甜许灵邵梦远陈惟【实验目的】本实验以家兔离体小肠为标本,观察不同浓度乙醇对离体小肠平滑肌活动的影响,进一步了解乙醇与人体健康的关系。【实验原理】乙醇可抑制心肌自律性和降低心肌收缩力。消化道是乙醇进入体内最先受刺激的部位,乙醇进入胃内可造成胃粘膜损伤,但乙醇对小肠活动有何影响,目前还不十分清楚。有研究报道,乙醇对心肌细胞钠离子跨膜内流有一定抑制用,对心肌细胞内贮存的钙离子释放有显著抑制作用。因认为乙醇对心肌细胞收缩的抑制作用可能是通过改变肌水平或肌浆对钙离子的转运而实现的,但不影响细胞外跨膜内流。乙醇对小肠平滑肌的抑制作用可能与乙醇抑制钠离子、钙离子转运有关。本实验采用常规离体灌注，小肠平滑肌标本活动的实验方法 ,记录用药前后肠段平滑肌自发收缩性活动变化。用不同浓度乙醇对小肠平滑肌自发收缩活动进行作用,然后用其变化值与用药前比较。【实验对象】家兔，体重2-2.5kg，雌雄兼用【实验药品和器材】台氏液，MebLab生物信号采集处理系统;CW-3型平滑肌槽恒温仪,;无水乙醇(20?时密度为0 789,/,1，用于配制不同浓度的乙醇);张力换能器，铁支架，双凹夹，温度计，烧杯。 1 【实验方法与步骤】 1, 在实验前禁食24,,自由饮水,实验前1,喂食。将家兔处死后，立即放入兔台上迅速沿腹正中线切开腹部,找出胃幽门与十二指肠交界处,以此处为起点,取十二指肠近端20,,肠管。先将该肠管相连的肠系膜分离,再将拟取的肠管两端剪断,将游离的肠管取出体外,臵于盛有保持37?的台氏液的烧怀中,用注射器抽取温台氏液洗净肠内容物。当肠管活动明显时,将其剪成2cm左右的肠段作为实验标本。 2, 结扎,并将一端固定于通气管钩上,臵于盛有30ml 台氏液的浴管中;另一端经细线连于张力换能器上,然后通过升降换能器的高度,以牵张结线,使标本垂直悬挂于恒温的台氏液的浴管中。给予2,负荷平衡组织30min,将充满空气的气囊经一胶管与通气管相接,通入浴管的台氏液中,持续缓慢放气,其速度以持续单个气泡出现而不冲动小肠为宜。小肠平滑肌活动变化值的测量采用计算机生物信号采集处理系统。 3. 向标本中滴入不同浓度乙醇(1.25% 2.5% 5% 9.0% 10%)，并记录其收缩曲线【实验项目】 1. 记录小肠平滑肌自动节律性收缩曲线:记录离体小肠在37?台氏液中的收缩曲线，注意观察收缩的幅度和节律。收缩曲线基线高低表示小肠平滑肌紧张性的高低，收缩曲线高度表示小肠平滑肌的收缩活动的强弱。 2. 不同浓度乙醇的作用:在药管中加入1.25%的乙醇溶液100mml，观察收缩活动的改变，待作用明显后，先打开药管的出口放弃含药的台氏液， 2 在打开二通开关使预液管预温的台氏液通向药管液，重复2-3次，待小肠恢复后，再注入同样体积的2.5%的乙醇溶液，照上述方法依次做完浓度为5%和9.0% ，10%的溶液。【注意事项】待标本出现规律的自发节律性收缩并稳定20min后开始记录。先记录一段肠管在台氏液恒温37?时的收缩曲线,观察肠管的收缩幅度、收缩频率,并从收缩曲线的基线改变,观察小肠平滑肌张力变化,以收缩基线上升。表示张力增强,收缩基线下降表示肌张力减弱。每次实验项目完成后,用37?温热台氏液反复冲洗肠管,每次5min,共3次,然后观察肠管活动恢复情况。【实验结果预测】预测1:在钙离子流向肌浆而引起收缩过程中，膜电位逐渐升高，当膜电位达到一定值，钙离子通道开始关闭，也就是说钙离子通道是一种电压门控通道，而乙醇可以和关闭的钙离子通道可逆性结合，从而维持后者的关闭状态。因此: 1. 收缩曲线的基线上升且几乎一致,这时的膜电位就是上述的V, 2. 乙醇浓度的升高被乙醇维持的关闭着的钙离子通道增多，波形越来越缓直至变成一直线。 3. 由于是可逆性结合故而经台氏液洗涤后仍能恢复。预测 2:乙醇可能影响钙泵的功能，因为舒张过程是由肌浆的钙离子下降引起，而钙离子的下降主要为钙泵的功劳。乙醇和钙泵可逆性结合来抑制钙泵的作用，从而使曲线停止于收缩状态【实验意义】含酒精的饮料对小肠有较大的影响，它能使小肠活动停止于收缩状态从而 3 对机体造成伤害，所以我们在日常生活中应该少喝含酒精的饮料。【实验结果记录及分析表】实验项目实验结果频率振幅基线水平 1.正常,对照, ------------------------------ 2.加入1.25%的降低降低降低乙醇溶液 3.加入2.5%溶降低降低升高液 4.加入5%乙醇降低消失降低溶液 5.加入9%乙醇降低消失降低溶液 6.加入10%乙肠道出现痉挛，放电频醇溶液率陡增，随后急剧下滑作用机制可能是:乙醇为小分子脂溶性物质，其适宜的脂水分配系数使其能够透过细胞膜而进入细胞内影响膜蛋白和膜脂导致膜结构紊乱，乙醇的急性效应是降低胞浆Ca2+浓度，膜转运蛋白功能紊乱，细胞外Ca2+进入细胞内，细胞内Ca2+浓度升高，造成钙超载。当各种原因引起胞浆内Ca2+浓度异常增加时，将刺激线粒体钙泵向线粒体内摄钙，使胞浆内Ca2+向线粒体内转移。线粒体摄入过多的钙，除增加ATP消 4 耗外，Ca2+还与线粒体内含磷酸根的化合物结合，形成不溶性磷酸钙，干扰线粒体氧化磷酸化，使ATP生成减少,另外，线粒体内Ca2+浓度的逐步增加，使其跨膜电位逐渐减小，产生ATP的功能逐渐丧失，从而干扰心脑细胞的能量代谢。线粒体内的Ca2+浓度升高最终使线粒体的渗透转运孔道呈高通透性持久开放状态。PTP是一种位于线粒体内外膜结合处，受Ca2+、线粒体膜电位、pH等调控的蛋白性孔道。PTP的高通透性持久开放，则引起线粒体内膜通透性急剧增加，使得一些在正常情况下不能通过内膜的物质(分子量>1500D)可以自由透过内膜，从而继发线粒体膜除极、氧自由基(ROS)过量生成、基质渗透性肿胀及凋亡效应蛋白释放等一系列细胞学效应，致使线粒体肿胀破坏，膜电位完全、永久消失，对线粒体结构和功能造成不可逆性损伤。自由基性质活泼，有极强的氧化能力，通过氧化反应来攻击细胞膜、线粒体体膜，与膜中不饱和脂肪酸反应，造成脂质过氧化，脂质过氧化产物又可以分解为更多的自由基，引起自由基连锁反应。自由基可与各种细胞成分反应，造成细胞结构损伤和功能代谢障碍:,1,膜脂质过氧化增强:通过破坏细胞膜的正常结构，间接抑制膜蛋白功能，促进自由基及其他生物活性物质生成,破坏线粒体膜的正常结构，减少ATP生成,,2,蛋白质功能抑制:氧化某些氨基酸残基或酶的巯基，使胞浆及膜蛋白和某些酶交联，直接损伤其功能,,3,破坏核酸及染色体:自由基可使碱基羟化或DNA断裂，从而引起染色体畸变或细胞死亡 5

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