蛋白质含量的测定
实验四 蛋白质含量的测定
——考马斯亮蓝法(Brodford法)
原理
染料考马斯亮蓝G-250与蛋白质结合后引起染料最大吸收波长的改变,从465nm变为595nm,光吸收增加,蛋白质-染料复合物具有高的消光系数,因此大大提高了测定蛋白质的灵敏度(1ug)
实验步骤
1. 求
标准
excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载
曲线方程:按下表配置,操作。
管号 BSA HO 考马斯亮蓝 Pr.含量 操 作 2
(100μg,mL) (mL) G-250(mL)
1 0 1.0 5.0 0 室
2 0.1 0.9 5.0 10 温
3 0.2 0.8 5.0 20 放
4 0.4 0.6 5.0 40 置
5 0.8 0.2 5.0 80 五
6 1.0 0 5.0 100 min
2. 样品pr.含量的测定
吸取小白菜提取液0.5mL,加入蒸馏水0.5mL(三次重复);吸取血清(稀释800倍)1.0mL
(三次重复),向以上各管加入考马斯亮蓝G-250 5.0mL,室温放置5分钟,测A的值595
(一小时内完成)。
管 号 小 白 菜 管 号 血 清
T 或 A T 或 A
1 1
2 2
3 3
? 小白菜用mg,g,血清用mg,mL。
要求r?0.99
1