叶绿素a的测定(B)
内江市环境保护监测站
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报告
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单位:内江市环境保护监测站
报告日期:2010 年 8月2日
叶绿素a的测定(B)
一、 样品名称:叶绿素a
编 号:叶绿素a考核
任务来源:四川省环保厅上岗考核组
实验目的:四川省监测人员上岗考核
实验日期:2010年7月27日
报告日期:2010年7月27日
二、实验目的
叶绿素是植物光合作用中的重要光和色素。通过测定浮游植物叶绿素，可掌握水体的初级生产力情况。在环境监测中，可将叶绿素a含量作为湖泊富营养化的指标之一。
三、水样的采集与保存
可根据工作的需要进行分层采样或混合采样。湖泊，水库采样500ml，池塘300ml，采样量视浮游植物的分布量而定，若浮游植物数量较少，也可采样1000ml。采样点及采样时间同“浮游植物”。
水样采集后应放置在阴凉处，避免日光直射。最好立即进行测定的预处理，如需进过一段时间(4~48h)方可进行预处理，则应将水样保存在低温(0~4?)避光处。在没升水样中假如1%碳酸镁悬浊液1ml，以防止酸化引起色素溶解。水样在冰冻情况下(-20?)最长可保存30d。
四、仪器设备
(1) 分光光度计
(2) 真空泵
(3) 离心机
(4) 乙酸纤维滤膜(孔径0.45ug)
(5) 抽滤器
(6) 组织研磨器或其他细胞破碎器
(7) 碳酸镁粉末
(8) 90%丙酮
五、实验步骤
(1)以离心或过滤浓缩水样，在抽滤器上装好乙酸纤维滤膜。倒入定量体积的水样进行抽滤，抽滤时负压不能过大(约为50kpa)。水样抽完后，继续抽1~2min，以减少滤膜上的水分。如需段时期保存1~2d时，可放入普通冰箱冷冻，如需长期保存(30d)，则应放入低温冰箱(-20?)保存。
(2)取出带有浮游植物的滤膜，在冰箱内低温干燥6~8h后放入组织研磨器中，加入少量碳酸镁粉末及2~3ml90%的丙酮，充分研磨，提取液绿色a。用离心机(3000~4000r/min)离心10min。将上清液倒入5ml或10ml容量瓶中。
(3)再用2~3ml的90-%的丙酮，继续研磨提取，离心10min，并将上清液再转入容量瓶中。重复1~2次，用90%的丙酮定容为5ml或10ml，摇匀。
(4)将上清液在分光光度计上，用1cm光程的比色皿，分别读取750nm、663nm、645nm、630nm波长的吸光度，并以90%的丙酮做空白吸光度测定，对样品吸光度进行校正。
六、计算方法
叶绿素a的含量按如下公式计算
(11.64×(D-D)—2.16×(D-D)+0.10×(D-D)).V 6637506457506307501
3叶绿素a(mg/m)= ——————————————————————————————
V.δ
式中:V——水样体积(L)
D——吸光度
V1——提取液定容后的体积(ml)
δ——比色皿光程(cm)
浙公网安备 33021202002483