实验八微生物细胞大小的测定
一、实验目的
1. 了解测量微生物大小的原理
2.掌握目镜测微尺的校正方法及微生物大小的测定方法
3.增强微生物细胞大小的感性认识
二、实验原理
微生物细胞的大小是微生物基本的形态特征,也是分类鉴定的依据之一。微生物细胞个体较小,需要在显微镜下借助于特殊的测量工具—测微尺来测定其大小。测微尺包括镜台测微尺和接目测微尺。
镜台测微尺是一块中央部分刻有精确等分线的载玻片,专门用于校定目镜测微尺每小格的相对长度。通常,刻度的总长是1mm,被等分为100格,每格0.01mm (即10μm)。镜台测微尺不直接用来测量细胞的大小。
目镜微尺是一块圆形的特制玻片,其中央是一个带刻度的尺,等分成50或100小格。每小格的长度随显微镜的不同放大倍数而定,测定时需用镜台测微尺进行标定,求出在某一放大倍数时目镜测微尺每小格代表的实际长度,然后用标定好的目镜测微尺测量菌体大小
三、实验器材
显微镜、镜台测微尺、目镜测微尺、载玻片及盖玻片、接种针、啤酒酵母菌悬液。
四、操作步骤
1. 目镜测微尺的安装
取下显微镜的目镜,旋下透镜,将目镜测微尺刻度朝下放在目镜的隔板上,再旋上目镜透镜,将装有测微尺的目镜装回镜筒。
2. 目镜测微尺的标定
放置镜台测微尺:将镜台测微尺刻度面朝上固定在显微镜的载物台上,注意不可放反。
标定:在低倍镜下,将镜台测微尺有刻度的部分移至视野中央,调节焦距,当清晰地看到镜台测微尺的刻度后,转动目镜使接目测微尺与镜台测微尺的刻度
相平行。利用移动钮移动镜台测微尺,使两尺在某一区域内两线完全重合,然后分别数出两重合线之间镜台测微尺和接目测微尺所占的格数。(使目镜测微尺的一条刻度线与镜台测微尺的一条刻度线相重合,再寻另一重合线,分别数出其间镜台测微尺和接目测微尺所占的格数)
用同样的方法,在高倍镜下对接目测微尺进行标定。(观察时光线不宜过强,否则难以找到镜台测微尺的刻度,换高倍镜标定时,务必十分细心,防止接物镜压坏镜台测微尺和损坏镜头)
计算:已知镜台测微尺每格长10μm,根据下列公式即可分别计算出在不同放大倍数下,接目测微尺每格所代表的长度。
目镜测微尺每格长度(μm)=10n/m
n:两重合线间镜台测微尺格数
m:两重合线间接目测微尺格数
3. 微生物细胞大小的测量
目镜测微尺标定完毕后,取下镜台测微尺,换上微生物标本片,将其固定在载物台上,先用低倍镜找到标本片图象,然后根据不同的微生物对象分别转换到高倍镜下,用接目测微尺测量微生物细胞的直径或宽和长所占的格数,再依据所标定的高倍镜每一格的实际长度计算细胞的实际大小。
通常测定对数生长期菌体来代表该菌的大小,为了尽量减小实验误差,应在同一标本片上测量10~20个细胞,取其平均值作为该菌的大小。
维护:测量完毕,换上原有显微镜目镜(或取出接目测微尺,目镜放回镜筒),用擦镜纸将测微尺擦拭干净后放回盒内保存,并按照显微镜的使用和维护方法擦拭物镜。
五、作业
目镜测微尺标定结果:
低倍镜下倍目镜测微尺每格长度是μm。
高倍镜下倍目镜测微尺每格长度为μm。
2. 高倍镜下测定的酿酒酵母细胞的大小。
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