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细胞凋亡检测技术.pptx

细胞凋亡检测技术

教育资源文库
2019-04-07 0人阅读 举报 0 0 暂无简介

简介:本文档为《细胞凋亡检测技术pptx》,可适用于工程科技领域

发病机制:HIV感染→CD淋巴细胞→CD淋巴细胞显著↓→免疫功能缺陷细胞凋亡相关因素:①gp糖蛋白:gp糖蛋白受体→细胞凋亡②合胞体形成:HIV感染→合胞体形成→细胞凋亡③Fas基因表达上调:HIV感染→Fas基因表达上调→FasFasL→细胞凋亡病毒感染获得性人类免疫缺陷病(AIDS)二、研究简史  半个世纪前:人们就观察到在生物的发生、生长、发育以及衰老过程中一直伴随着组织细胞的生理自发退化死亡现象  年:发育生物学家Lockshin和Williams首先提出了PCD(程序化死亡)一词用于描述蛾的发育过程认为随着成年蛾的出现其幼虫死亡是一种发育调节性死亡。年:Kerr等首次提出了细胞凋亡的概念从形态学角度描述细胞的生理死亡并认为这是维持组织细胞动力学平衡的一种基本生物学现象可能具有十分重要的生物学意义。  年:人们注意到在生理或病理性刺激条件下淋巴细胞发育过程中的凋亡现象。并认为这是维持组织细胞动力学平衡的一种基本生物学现象可能具有十分重要的生物学意义。年:Wyllie研究胸腺细胞在糖皮质激素作用下引致的细胞凋亡变化总结并建立了细胞凋亡的共同形态学特征包括核固缩和DNA降解成寡核苷酸片段等。 年:wen及其研究小组在研究胸腺细胞阴性选择过程中发现T细胞受体(TCR)与自身抗原相互作用与未成熟T细胞的PCD发生有关并在体外证实剌激CD分子可诱导未成熟T细胞PCD的发生。证明了信号传递物质对PCD的调控作用。年:Ellis首先发现了线虫(Celegans)体内Ced、两个基因与PCD的发生密切相关随后逐渐发现了多种参与PCD的正相调节基因和负相调节基因前者包括Ced、p、c‐myc、Fas、糖皮质激素受体及白细胞介素β转化(ICE〉等基因后者则有Ced、bcl、p等基因三、细胞凋亡的特征细胞凋亡与细胞坏死虽然都是细胞死亡但细胞凋亡的形态及生化特征与坏死性细胞死亡的特点则不同(一)细胞凋亡的形态学改变:组织内单个细胞或小团细胞的死亡不引发细胞自溶也不引起炎症反应电镜下可见:凋亡细胞固缩胞浆致密细胞器密集、退变核染色质致密聚集于核膜处胞核裂解胞浆形成多发性芽突凋亡小体形成光镜下:凋亡小体外被以胞膜圆形或卵圆形胞浆浓缩强嗜酸性可有可无固缩深染的核碎片。细胞凋亡与细胞坏死在形态学上的差别细胞凋亡细胞坏死单细胞丢失细胞膜发泡但仍完整,细胞膜内陷将细胞分割成凋亡小体不发生炎症反应被临近正常细胞或吞噬细胞吞噬溶酶体完整染色质均一凝集细胞成群丢失细胞膜不完整,细胞肿胀、溶解发生严重炎症反应被巨噬细胞吞噬溶酶体裂解染色质凝集成块、不均一细胞坏死时核的变化细胞坏死时的炎症反应(二)细胞凋亡的生化改变:凋亡过程中出现的生化改变以DNA的片段化及蛋白质的降解最为重要。)DNA的片段化组成染色质的DNA链被激活的核酸内切酶切割可形成bp或其整倍数的片段电泳中呈特征灶的“梯”状条带这是判断凋亡发生的客观指标之一。)蛋白质的降解凋亡蛋白酶激活水解细胞的蛋白质结构导致细胞解体并形成凋亡小体、水解相关活性蛋白从而使该蛋白获得或丧失某种生物学功能。细胞凋亡与细胞坏死在生物化学上的区别细胞凋亡细胞坏死生理因素诱导非生理因素造成的意外损伤受大分子合成和激活过程的严格调控离子稳态调节丧失需要能量不需要能量需要大分子合成不需要核酸和蛋白质的合成有新基因从头转录没有新基因转录染色质非随机降解为DNA“梯带”染色质DNA随机降解四、细胞凋亡的过程与调控凋亡信号转导凋亡基因激活细胞凋亡的执行凋亡细胞的清除(一)凋亡的四个阶段:凋亡诱导因素受体cAMPCa神经酰胺死亡信号凋亡基因激活DNase激活Caspase激活巨噬细胞吞噬分解凋亡细胞(二)细胞凋亡的调控细胞凋亡的相关因素()诱导性因素激素和生长因子失衡:缺乏(IL↓淋巴细胞凋亡)或过多(糖皮质激素↑淋巴细胞凋亡)理化因素:射线、高温、强酸、强碱、乙醇、抗癌药物等免疫性因素:如CTL分泌粒酶→靶细胞凋亡微生物因素:细菌、病毒及毒素。(HIV)()抑制性因素:细胞因子:IL、神经营养因子激素:ACTH、睾丸酮、雌激素等二价金属阳离子:Zn药物:苯巴比妥、半胱氨酸蛋白酶抑制剂、中性氨基酸病毒:EB病毒、牛痘病毒CrmA细胞凋亡信号转导凋亡信号转导系统是连接凋亡诱导因素与核DNA片段化断裂及细胞结构蛋白降解的中间环节。凋亡信号转导系统的特点:①多样性:不同种类细胞有不同系统②耦联性:凋亡与增殖分化系统在某些环节交、耦联同一因素既可引起凋亡也可引起增殖③同一性:不同凋亡诱导因素可通过同一信号转导系统④多途性:同一凋亡诱导因素可通过不同信号转导系统研究较多的系统:依据:①细胞凋亡时胞内游离Ca浓度显著上升②用Ca载体A人为升高B淋巴细胞Ca水平B淋巴细胞凋亡③用Ca络合剂降低胞内Ca水平阻止细胞凋亡激活Ca依赖谷氨酰胺转移酶Ca↑活化核转录因子.胞内Ca信号系统(Ca为第二信使).cAMPPKA信号系统(cAMP为第二信使)依据:①双丁酰cAMP可引起培养的髓样白血病细胞及胸腺细胞凋亡②糖皮质激素使cAMP上升cAMP↑→激活PKA→使靶蛋白某些氨基酸(苏、丝AA)残基磷酸化→改变蛋白质功能.Fas蛋白Fas配体信号系统Fas蛋白:细胞膜跨膜蛋白Fas蛋白Fas配体(抗Fas)→细胞凋亡机制:①Fas蛋白Fas配体(抗Fas)→神经鞘磷脂酶活性↑→产生神酰胺→蛋白激酶激活→细胞凋亡②Fas蛋白抗Fas、TNF→激活ICE样caspase→降解H组蛋白→染色体松驰→DNA暴露内切酶位点③通过Ca信号系统传递死亡信息引起细胞凋亡.神经酰胺信号系统神经酰胺:神经鞘磷脂(SM)在神经鞘磷脂酶的作用下产生的一类新型第二信使物质。介导细胞凋亡的依据:用天然神经酰胺处理u白血病细胞诱导细胞凋亡神经酰胺途径相关诱因:电离辐射、TNFα、Fas抗原、糖皮质激素.二酰甘油蛋白激酶C(PKC)信号系统二酰甘油:磷脂酰肌醇和磷脂酰胆碱在磷脂酶C催化下产生的一种第二信使物质。依据:①活化的PKCβ可诱导u白血病细胞凋亡②抑制PKC活性可抑制糖皮质激素诱导的小鼠胸腺细胞凋亡③PKC激动剂佛波脂可抑制某些类型细胞凋亡(糖皮质激素、T细胞受体激活、IL撤除).酪氨酸蛋白激酶系统生长因子或细胞因子→激活酪氨酸蛋白激酶→靶蛋白酪氨酸磷酸化→Ras蛋白激活→通过Raf、MAPKK、MAPK→蛋白质磷酸化→细胞分化生长因子或细胞因子撤除→不能激活酪氨酸蛋白激酶系统→细胞凋亡凋亡相关基因三类:抑制凋亡基因:Bcl、EIB、IAP促进凋亡基因:P、Bax、ICE双向调节基因:cmyc、Bclx(B细胞淋巴瘤白血病Bcelllymphomaleukemia基因的缩写)Bcl蛋白:个氨基酸(人)、个氨基酸(小鼠)分布:线粒体内膜、细胞膜内膜、内质网、核膜作用:Bcl高表达能阻抑多种凋亡诱导因素所引起的细胞凋亡依据:①导入Bcl基因质粒可防止神经细胞因撤除神经生长因子所诱导的凋亡②淋巴细胞有呈Bcl阳性时预后不佳(耐受放射线、抗癌药物)Bcl①直接的抗氧化作用②抑制线粒体释放促凋亡蛋白质(细胞色素C、AIF)③抑制促凋亡性调节蛋白质Bax、Bak的细胞毒作用④抑制凋亡蛋白酶(caspases)的激活⑤维持细胞钙稳态Bcl抗凋亡作用机制:作用:野生型(wtP):DNA结合蛋白诱导细胞凋亡(“分子警察”)突变型:抑制细胞凋亡野生型P的作用机制:P蛋白→细胞周期G期检查染色体DNA损伤(检查点功能)→发现DNA损伤→剌激CIP的表达→阻止细胞进入下一周期启动DNA修复机制→修复失败→启动细胞凋亡机制→细胞凋亡Pcmyc:一种癌基因它能诱导增殖也能诱导细胞凋亡具有双向调节作用。作用机制:cmyc蛋白为重要的转录调节因子既可介导细胞增殖的基因也可激活介导细胞凋亡的基因其作用取决于细胞接受何种信号及细胞的生长环境(有生长因子→增殖无生长因子→凋亡)。Bclx:能翻译BclXL和BclXs两种蛋白BclXL蛋白抑制细胞凋亡BclXs蛋白促进细胞凋亡(合成以谁为主)cmyc,Bclx五、细胞凋亡的发生机制(一)氧化损伤氧化损伤的后果之一:细胞凋亡依据:①各种氧化剂(HO)可直接诱导细胞凋亡②抑制超氧化物歧化酶(SOD)活性可诱导细胞凋亡③抗氧化剂(VitE、胡萝卜素等)可阻断有氧化应激背景的各种凋亡诱导因素(TNFа、电离辐射)引起的细胞凋亡①引起DNA损伤激活P基因②引起DNA损伤活化多聚ADP核糖合成酶耗竭NAD消耗大量ATP③攻击细胞膜不饱和脂肪酸脂质过氧化细胞膜损伤或产生过氧羟基碳四烯酸④激活CaMg依赖的核酸内切酶⑤细胞膜损伤Ca内流增多及损伤线粒体通透性增加膜电位改变⑥活化核转录因子NFкB、AP加速凋亡相关基因表达氧化损伤引起细胞凋亡的可能机制:(二)钙稳态失衡细胞钙稳态失衡是细胞凋亡的重要机机制之一依据:①各种凋亡刺激所引起的凋亡是钙依赖过程②凋亡发生时胞浆Ca浓度显著上升并在随后的一系列凋亡改变中起关键性作用(核酸内切酶激活、需钙蛋白酶、磷脂酶、谷氨酰胺转移酶的激活细胞膜的空泡化)③钙稳态失衡参与多种凋亡相关疾病的发病(神经退行性疾病)①激活CaMg依赖的核酸内切酶降解DNA链②激活谷氨酰胺转移酶催化肽链间的酰基转移酶肽链间形成共价键使细胞骨架蛋白分子间发生广泛交联有利于凋亡小体形成③激活核转录因子加速凋亡相关基因表达④Ca在ATP的配合下使DNA链舒展暴露核小体之间的连接区内的酶切位点有利于DNA内切酶切割DNA钙稳态失衡引起细胞凋亡的可能机制:(三)线粒体损伤线粒体的改变:线粒体内膜通透性增大线粒体内膜跨膜电位(△ψm)下降能量代谢水平显著降低线粒体改变在细胞凋亡发生中起关键作用依据:①抑制线粒体的三羧酸循环或呼吸链功能可诱导细胞凋亡②在细胞核出现凋亡改变之前常先有线粒体内膜跨膜电位(△ψm)下降③阻止线粒体通透性的改变可防止细胞凋亡(Bcl)线粒体改变引起细胞凋亡的机制:CaNO缺血原卟啉Ⅸ活性氧线粒体△ψm下降Bcl()PTP开放ApafCytCCaspase酶原Caspase()Caspase酶原Caspase()Caspase抑制剂AIF()蛋白质水解细胞凋亡DNA断裂无活性核酸内切酶核酸内切酶激活()()第二节细胞凋亡的检测方法细胞凋亡检测方法:归纳起来可分三方面即根据凋亡的形态学特征、细胞凋亡的生化特征以及细胞凋亡的流式细胞仪检测。本节主要介绍细胞凋亡的常用病理学检测方法。一、苏木精伊红染色方法(HE染色).石蜡组织切片HE染色(略).细胞爬片或细胞涂片的HE染色()细胞爬片或细胞涂片的制备:贴壁生长细胞(包括肿瘤细胞):让细胞生长在盖玻片使其在上面爬行生长。取出盖玻片经PBS轻轻漂洗后用的甲醛或多聚甲醛在常温下固定-min即可染色。悬浮生长细胞(包括肿瘤细胞)或贴壁生长的细胞经消化脱壁成单细胞悬液后可经细胞涂片后染色。()染色方法:同石蜡组织切片HE染色免去第和第步。【结果判断】光学显微镜下细胞核呈蓝黑色胞浆呈淡红色。凋亡细胞在组织中单个散在分布表现为核染色质致密浓缩核碎裂等。在细胞爬片上凋亡的细胞变圆、变小可见细胞核固缩、碎裂染色体被染成深蓝色或蓝黑色可见细胞膜皱折、卷曲和出泡以及芽生形成膜包裹的凋亡小体(apoptoticbodies〉。而正常细胞经染色后仍保持细胞原有的生长形状(如梭形或多角形)细胞核规整染成均一蓝色。细胞涂片时可见凋亡细胞核固缩、碎裂染色变深正常细胞染色体显均匀淡蓝色或蓝色而坏死细胞细胞肿胀可见细胞膜的连续性破坏核染色体染成很淡的蓝色甚至消失。嗜酸性小体(凋亡)嗜酸性变及嗜酸性小体肝细胞体积缩小胞浆浓缩红染呈嗜酸性变或胞浆进一步浓缩细胞变圆核碎裂、溶解消失呈嗜酸性小体状二、甲基绿派诺宁染色法【染色原理】细胞凋亡和细胞坏死均可表现为细胞核固缩等细胞死亡形态但两者发生机制不同。细胞凋亡是一种细胞主动死亡过程需要有细胞内蛋白酶的激活细胞质内常有mRNA表达的增强。而细胞坏死则是一种被动的细胞死亡过程细胞质内常有RNA的损失。根据这一特点可应用试剂甲基绿对DNA染色的特异性和派诺宁对RNA的亲和性使甲基绿对固缩细胞核内的脱氧核糖核酸着染如果细胞质内核糖核酸呈派诺宁阳性染色者为凋亡细胞呈阴性染色者为坏死细胞。【试剂及配制】组织固定液无水乙醇ml氯仿ml冰乙酸ml甲基绿纯化新购买的甲基绿(methylgreen)需用氯仿进行纯化处理以去除甲基紫。方法是将甲基绿水溶液ml倾入洁净分液漏斗加入氯仿ml充分混匀使其内的甲基紫溶于氯仿中而呈紫红色。旋动分液漏斗下部的砂塞慢慢把下沉带紫红色的氯仿移去再加入新的氯仿ml如此反复更换氯仿直到无紫红色为止。该液作为贮存液℃保存。染色液甲基绿贮存液m派诺宁水溶液lm蒸馏水mmolL乙酸钠(pH)ml(临用前配制滤纸过滤)【操作方法】新鲜取材组织置组织固定液中℃固定-h直接转入乙醇脱水和无水乙醇脱水二甲苯透明石蜡包埋切片经二甲苯脱蜡梯度乙醇水化至蒸馏水置染色液中室温下染片约lh取出切片不经水洗用滤纸吸干多余染液插入丙酮中迅速分化转入丙酮二甲苯(:)稍洗.二甲苯透明-次.中性树胶封固【结果判断】凋亡细胞:光学显微镜下凋亡细胞细胞核固缩呈绿色或绿蓝色着染胞质呈红紫色着染。观察时可用凋亡指数进行计数即随机选择约-个视野(每张切片约-个细胞〉计数凋亡细胞百分率。细胞坏死:只有固缩细胞核呈绿色着染。三、吖啶橙染色法【染色原理】吖啶橙的荧光随pH而变其正色为绿色随pH下降可变到橙红色。吖啶橙与DNA和RNA通过两个部位结合连接碱基对和磷酸盐基团吖啶橙与碱基对结合形成第一复合物。第二复合物在多核苷酸表面由吖啶橙与磷酸盐基团连接而成。pH时DNA结合染料的聚合加速pH低于时聚合受抑制而RNA在pH和都能聚合而使颜色变红。【试剂及配制】吖啶橙贮存液:mg吖啶橙溶解于mlPBS中pH-滤过C避光保存【操作方法】制备活细胞悬液浓度约为ml取μl细胞悬液加μl吖啶橙贮存液混匀吸一滴混合液滴于洁净玻片上直接用盖玻片封片荧光显微镜选用激发滤片BGBV等阻断滤片用nm或SP【结果判断】正常细胞:在荧光显微镜下细胞核DNA为黄色或黄绿色均匀荧光细胞质和核仁的RNA为桔黄或桔红色荧光凋亡细胞:细胞核或细胞质内可见致密浓染的黄绿色染色甚或见黄绿色碎片坏死细胞:细胞质内黄绿色或桔黄色荧光均可减弱或消失四、原位末端标记原位末端标记(ISEL)是将渗入到凋亡细胞中的外源性核苷酸在酶〔末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)和DNA聚合酶I或KIenow大片段〕的催化下与凋亡细胞因内源性核酸酶的激活而产生的单股或双股断链相结合再通过一定的显示系统使之显示出来。通常有两种方法:①末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(简称TUNEL)②DNA聚合酶I或Klenow大片段介导的原位缺口平移(简称INST)。在不考虑所使用的催化酶时统称为原位末端标记。TUNEL鉴定的原理基于细胞凋亡时产生DNA断链所介导的酶是TdT该酶能将外源性的生物素或地高辛标记的dUTP无需DNA模板连接到凋亡细胞核的DNA断链的羟基('H〉末端DNA断链可是单股断链也可是双股断链两种断链都有游离的'羟基末端因此TUNEL鉴定可以检测凋亡细胞核中的单股和双股DNA断链。【试剂准备和配制】molL的PBS:molLNaClmolL磷酸盐缓冲液.蛋白酶KμgmlmolL的PBS配制.组织预处理液(×SSC溶液):先配制×SSC溶液作为储存液用时倍稀释(×SSC溶液含molLNaClmmolL枸橡酸纳).内源酶阻断剂:H甲醇溶液(或PBS).缓冲液A(bufferA〉mmolLTrisHClmmolLMgCmmolLβ巯基乙醇BSApH.链卵白素标记的辣根过氧化物酶.DABH显色液:DAB用molLTrisCl(pH)配成分装一℃避光保存.TdT缓冲液(pH)二甲胂酸纳(NaCacodylate〉mmolL二琉基苏糖醇(dithiothrenol〉mmolL氯化钻(C)mmolL.TdT反应液在TdT缓冲液中加入TdT酶UmlmmolLbiotindUTP【染色步骤】切片常规脱蜡复水后续过程在湿盒内进行的H阻断内源性过氧化物酶minmolL的PBS洗次每次min切片浸泡在×SSC℃minmolL的PBS洗次每次min蛋白酶K消化-minmolL的PBS洗次每次minTdT缓冲液孵育minTdT反应液℃孵育h切片浸泡在×SSC溶液min以终止反应molL的PBS洗次min链卵臼素标记的辣根过氧化物酶孵育min(POD)molL的PBS洗次每次min的DAB显色-min镜下控制时间苏木精对比染色sec常规复水、透明和封固。【结果判断】凋亡细胞的核呈棕色或棕褐色着染细胞核形态呈碎点状不规整大小不一致。而正常非凋亡细胞和阴性对照片核被苏木素复染呈蓝色核相对较大形态大小较为一致第三节细胞凋亡的应用一.细胞凋亡与机体发育细胞凋亡是多细胞动物生命活动过程中不可缺少的组成内容是动物借以存活的需要因而贯穿于动物全部寿命周期中。无论是低等动物还是高等动物都是如此。在哺乳动物胚胎发生、发育和成熟过程中构成组织的细胞生死交替细胞凋亡是保证个体发育成熟所必需的。二.细胞凋亡与机体稳态组成机体的细胞不但需要不断地与环境进行物质、信息和能量的交换而且这些细胞本身也处在不断的更新中。这种更新是以细胞数量上的恒定为前提的因此是一种动态平衡状态显然各种细胞数量上稳定不但保证了机体各组织器官具有形态学上的稳定性同时也是机体生理功能或内环境稳定的必要条件。没有这种细胞生理性死亡细胞更新就不可能发生因此细胞产生与细胞凋亡之间的平衡是机体稳态的基本条件它们的平衡一旦破坏就会导致疾病的产生三、细胞凋亡与疾病(一)细胞凋亡不足肿瘤发生机制:目前认为:细胞增殖过度是肿瘤发病的一个途径凋亡受抑、细胞死亡不足是肿瘤发病的另一途径结果导致病变组织内肿瘤细胞存活延长存活大于死亡肿瘤细胞数目净增长加大形成新生物。凋亡受抑的依据:①多种肿瘤组织中Bcl表达显著高于周围组织②许多肿瘤P发生突变突变型P抑制细胞凋亡(肺小细胞癌等)近年肿瘤领域中凋亡的研究主要集中在以下几个方面:①肿瘤发生过程中凋亡的意义:肿瘤发生过程中的凋亡现象将有利于从细胞死亡角度考察肿瘤的形成。②凋亡与细胞周期:细胞增殖与凋亡的关系是凋亡细胞离开了正常有丝分裂轨道,走向死亡。对于凋亡启动与细胞周期时相的关系尚有不同的观点,一些作者以为,凋亡只发生于G。G期,而大部分作者认为凋亡是多点启动的,可源于细胞周期的任何时相。③凋亡与信号转导:信号转导通路的阐明将对肿瘤的防治产生巨大影响。④凋亡与肿瘤生长:凋亡与增殖是一对并存的矛盾,正常状况是二者维持动态平衡,癌前病变和肿瘤的增生与凋亡失调有关,此外,肿瘤诱导分化中的细胞凋亡、肿瘤治疗中的细胞凋亡及肿瘤浸润和转移中的细胞凋亡亦是近年研究的热点。可以预见,细胞凋亡的研究对肿瘤的预防和治疗,具有重大的理论意义和应用价值。发生机制:从细胞凋亡角度看自身免疫病的发病是由于细胞凋亡不足未能有效清除自身免疫性T细胞所致。依据:糖皮质激素能诱导淋巴细胞凋亡为治疗自身免疫病的有效药物之一。自身免疫病(二)细胞凋亡过度心血管疾病()心肌缺血与心肌缺血再灌注损伤目前认为:心肌缺血与心肌缺血再灌注损伤造成的心肌细胞损伤不但有坏死也有细胞凋亡(干预靶点)。细胞凋亡的特点:①缺血早期以细胞凋亡为主晚期以细胞坏死为主②梗死灶中央通常以坏死为主周边部分以细胞凋亡为主③轻度缺血以细胞凋亡为主重度缺血通常以坏死为主④在一定的时间范围内缺血再灌注损伤时发生的细胞凋亡比同时间的单纯缺血更严重⑤急性、严重的心肌缺血以坏死为主慢性、轻度的心肌缺血以细胞凋亡为主细胞凋亡的机制:①氧化应激有关(SOD可减少细胞凋亡)②Fas上调通过与FasL反应导致细胞凋亡③与P基因激活有关(缺氧可增加P基因的转录)细胞凋亡与心力衰竭的关系:心肌细胞凋亡造成心肌细胞数量减少可能是心力衰竭发生发展的原因之一。依据:①在压力负荷过重引起的心力衰竭动物模形上观察到左心肌大的同时心肌细胞数量减少经分析是由细胞凋亡造成②心衰病人心肌标本心肌凋亡指数高达对照组为诱因:氧化应激、压力或容量负荷过重、神经内分泌失调、细胞因子、缺血缺氧。()心力衰竭在神经系统疾病中有一类以特定神经元进行性丧失为其病理特征的疾病:阿尔茨海默氏病(AD)帕金森氏病多发性硬化症举例:阿尔茨海默氏病(AD)与细胞凋亡的关系:AD患者的尸检发现海马及基底神经核的胆碱能神经元丧失达有时高达大脑皮质也有不同程度的神经元丧失大脑皮质出现广泛萎缩脑沟变宽脑回变窄脑室扩大。神经元退行性疾病④T细胞激活:HIV感染→CD细胞激活→生长因子缺乏→细胞凋亡⑤细胞因子:HIV感染→TNF↑→TNFTNFR→细胞凋亡⑥tat蛋白:HIV感染→产生tat蛋白→CD淋巴细胞→诱导产生氧自由基Fas基因表达上调→FasFasL→细胞凋亡⑦HIV慢性感染→CD(HIV)淋巴细胞攻击CD(HIV)淋巴细胞→细胞凋亡动脉粥样硬化症:内皮细胞凋亡过度平滑肌细胞凋亡不足依据:内皮细胞凋亡过度:①LDL升高、血小板激活、AgⅡ、高血压可引起内皮细胞凋亡②检测粥样硬化的冠状动脉病变部位内皮细胞凋亡达远高于对照平滑肌细胞凋亡不足:平滑肌细胞凋亡增多但仅为增殖细胞的细胞凋亡相对不足。(三)细胞凋亡不足与过度并存四、细胞凋亡与药物研制开发及疾病的治疗利用细胞凋亡的相关基因研究开展基因治疗、研究开发基因治疗利用细胞凋亡的生化机制开展生物制剂研究开发生物制品利用细胞凋亡研究中细胞因子或细胞保护因子开发新药细胞凋亡研究中注重无机离子、无机化合物的研究可开发出新药参与细胞凋亡的受体的研究开发受体激动性或拮抗性药物

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