用于表达蛋白质的CHO细胞系统介绍用于表达单抗蛋白的CHO细胞系统介绍
细胞系统
DHFR系统
GS系统
简介
CHO-DHFR-细胞缺失二氢叶酸还原酶（DHFR），无法自身合成四氢叶酸，在没有次黄嘌呤（hypoxanthine）和胸腺嘧啶（Thymidine）时会死亡。用含有含单抗蛋白等的目的基因及与之相连的DHFR基因的表达载体，转染宿主细胞CHO DHFR细胞，使其能利用二氢叶酸还原酶的抑制物氨甲喋呤(methotrexate ,MTX)进行筛选。
CHO-GS细胞是用含单抗蛋白等的目的基因和谷氨酰胺合成酶(GS)基因标记的表...
用于表达单抗蛋白的CHO细胞系统介绍
细胞系统
DHFR系统
GS系统
简介
CHO-DHFR-细胞缺失二氢叶酸还原酶（DHFR），无法自身合成四氢叶酸，在没有次黄嘌呤（hypoxanthine）和胸腺嘧啶（Thymidine）时会死亡。用含有含单抗蛋白等的目的基因及与之相连的DHFR基因的表达载体，转染宿主细胞CHO DHFR细胞，使其能利用二氢叶酸还原酶的抑制物氨甲喋呤(methotrexate ,MTX)进行筛选。
CHO-GS细胞是用含单抗蛋白等的目的基因和谷氨酰胺合成酶(GS)基因标记的表达载体，转染宿主细胞CHO-k1。谷氨酰胺合成酶在 ATP 水解提供能量时 ,利用细胞内的氨和谷氨酸合成谷氨酰胺，为细胞生长提供营养。
主要细胞系
DG44
CHO-K1
是否缺陷型
缺陷型
野生型和缺陷型（Lonza新推出）
筛选方法
利用浓度不断提高的二氢叶酸还原酶的抑制物氨甲喋呤(methotrexate ,MTX)选择抗MTX的细胞系,使DHFR基因及与之相连的目的基因一起扩增 , 达到提高目的基因表达水平的目的。
加入谷氨酰胺合成酶的抑制物甲硫氨酸亚砜(methionine sulphoximine ,MSX) ,可使 GS基因及与之相连的目的基因一起扩增,达到提高目的基因表达水平的目的。
筛选难易
需要不断提高MTX的浓度，去除选择压力后，扩增基因不稳定，较难
正常MSX浓度下就能筛选到含有高拷贝外源基因的转染细胞，较易
蛋白表达量
普通（1-2g/L）
较高（2-9g/L）
倍增时间
2-3天
1天
主要有害代谢产物乳酸和氨
较多
较少
细胞长期生长稳定性
较稳定
较差
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