成纤维细胞免疫荧光步骤

成纤维细胞免疫荧光步骤细胞免疫荧光【原理】免疫细胞化学,是用标记的特异性抗体(或抗原)对组织内抗原(或抗体)的分布进行组织和细胞原位检测技术。免疫细胞化学有多种染色方式,免疫荧光法即为其中一种染色方式,其结合激光共聚焦扫描显微镜拍照技术,可提高检测分辨率,更精确地检测抗原的细胞定位和分布。【材料】 1、仪器:CO2培养箱、倒置显微镜、超净工作台、酒精灯、正置荧光显微镜、高压灭菌锅; 2、试剂:DMEM培养基、胎牛血清、乙醇、PBS、0.25%胰酶、4%多聚甲醛、SMN一抗、 FITC荧光二抗、抗荧光衰减封片剂、Tri...

细胞免疫荧光【原理】免疫细胞化学,是用标记的特异性抗体(或抗原)对组织内抗原(或抗体)的分布进行组织和细胞原位检测技术。免疫细胞化学有多种染色方式,免疫荧光法即为其中一种染色方式,其结合激光共聚焦扫描显微镜拍照技术,可提高检测分辨率,更精确地检测抗原的细胞定位和分布。【材料】 1、仪器:CO2培养箱、倒置显微镜、超净工作台、酒精灯、正置荧光显微镜、高压灭菌锅; 2、试剂:DMEM培养基、胎牛血清、乙醇、PBS、0.25%胰酶、4%多聚甲醛、SMN一抗、 FITC荧光二抗、抗荧光衰减封片剂、TritonX-100; 3、细胞株:成纤维细胞系。【步骤】一、准备工作 1、切片处理:将盖玻片置于浓酸浸泡过夜,自来水冲泡20遍,蒸馏水清洗5遍,高压灭菌,烘干备用; 2、细胞悬液制备:胰酶消化的成纤维细胞,收集细胞沉淀,培养基重悬,制成单细胞悬液, 计数后稀释至最佳浓度备用。二、细胞爬片 1、6孔板中央滴加100ul培养基,每孔放入一张盖玻片,恰好覆盖孔内培养基; 2、每孔缓慢逐滴加入2ml稀释后的细胞悬液,轻柔混匀; 3、将6孔板置于CO2孵箱,培养过夜。三、免疫荧光 1、取出6孔板,弃掉孔内培养基,PBS轻柔清洗3次,每次3min; 2、每孔加入1ml预冷的4%多聚甲醛,4℃固定20min; 3、PBS轻柔清洗3次,每次3min; 4、每孔加入1ml含0.2%TritonX-100的PBS,冰上静置10min; 5、PBS轻柔清洗3次,每次3min; 6、每孔加入1ml含1%BSA的PBS,室温封闭1h; 7、将一抗以1:100的比例稀释后,取出50ul滴加在封口膜上,从培养孔中取出盖玻片,用吸水纸吸去背面及细胞面边缘处的液体后,轻轻放在封口膜上,细胞面与抗体均匀接触, 4℃孵育过夜; 8、取下盖玻片,置于6孔板相应孔中,PBS轻柔清洗3次,每次3min; 9、滴加荧光素二抗,37℃孵育30min; 10、PBS轻柔清洗3次,每次3min; 11、每孔加入500ul DAPI染色液,室温染色5min; 12、PBS轻柔清洗3次,每次3min; 13、取一张洁净载玻片,中心位置滴加50ul抗荧光淬灭封片剂,从6孔板中取出盖玻片,控干液体,贴有细胞的一面朝下,放置在封片液上,尽量避免气泡; 14、显微镜下观察、拍照。

                    本文档为【成纤维细胞免疫荧光步骤】，请使用软件OFFICE或WPS软件打开。作品中的文字与图均可以修改和编辑，
                    图片更改请在作品中右键图片并更换，文字修改请直接点击文字进行修改，也可以新增和删除文档中的内容。 
 该文档来自用户分享，如有侵权行为请发邮件ishare@vip.sina.com联系网站客服，我们会及时删除。

                    [版权声明] 本站所有资料为用户分享产生，若发现您的权利被侵害，请联系客服邮件isharekefu@iask.cn，我们尽快处理。

                    本作品所展示的图片、画像、字体、音乐的版权可能需版权方额外授权，请谨慎使用。

                    网站提供的党政主题相关内容(国旗、国徽、党徽..)目的在于配合国家政策宣传，仅限个人学习分享使用，禁止用于任何广告和商用目的。
                

下载需要：免费已有0 人下载

立即下载

成纤维细胞免疫荧光步骤

你可能还喜欢