西 南 民 族 大 学
学生毕业实习成绩考核
表
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教学单位:生命科学与技术学院
年 级:10级
专 业: 动物医学
姓 名: 马英俊
学 号:201031304048
填表日期:2014.5.16
教 务 处 制
姓名
马英俊
性别
男
民族
撒拉
班级
1001
实习时间
2014.3.20——2014.5.1
实习单位
名 称
西南民族大学动物医学
实验室
17025实验室iso17025实验室认可实验室检查项目微生物实验室标识重点实验室计划
实习单位
指导教师
张斌
实 习 内 容
毕业实习时理论联系实际的重要教学环节,同时也是毕业设计的必要环节。通过实习锻炼,使我们对动物医学专业有一个较为全面,系统的认识,有助于我们对课堂所学内容和书本知识的正确理解和掌握,同时使我们能够综合运用多学的专业知识,亲自动手操作,全面了解各种实验技能,动物疫病的诊断与防控技术,为毕业后的实践工作鉴定一定的基础。
我的毕业设计题目是牦牛源嵴病毒的PCR方法建立及其应用。近几年来,在越来越多的物种上发现了嵴病毒(KV),其可能与多种动物的腹泻性疾病相关。腹泻是严重制约牦牛养殖业健康发展的重要疾病之一,目前还未见有关于牦牛嵴病毒的报道。为了解甘孜州、阿坝州某些牦牛养殖场嵴病毒(kobuvirus)的携带情况,根据GenBank上牛嵴病毒核苷酸序列设计了一对特异性引物,建立了牦牛嵴病毒的PCR检测方法。结果表明PCR的扩增片段为454 bp,与牛的嵴病毒同源性为86%,确定为牦牛源嵴病毒核酸序列。利用建立的方法对40份腹泻牦牛的粪便样品进行检测,结果显示67.5%(27/40)的样本中携带嵴病毒,表明甘孜州和阿坝州地区牦牛群中嵴病毒感染相当普遍。本研究建立的PCR检测方法,为牦牛源嵴病毒的快速诊断和流行病学调查及有效防控嵴病毒的感染提供了方法依据和数据参考。
毕业实习时理论联系实际的重要教学环节,同时也是毕业设计的必要环节。通过实习锻炼,使我们对动物医学专业有一个较为全面,系统的认识,有助于我们对课堂所学内容和书本知识的正确理解和掌握,同时使我们能够综合运用多学的专业知识,亲自动手操作,全面了解各种实验技能,动物疫病的诊断与防控技术,为毕业后的实践工作鉴定一定的基础。
实 习 报 告
我的毕业设计题目是牦牛源嵴病毒的PCR方法建立及其应用。近几年来,在越来越多的物种上发现了嵴病毒(KV),其可能与多种动物的腹泻性疾病相关。腹泻是严重制约牦牛养殖业健康发展的重要疾病之一,目前还未见有关于牦牛嵴病毒的报道。为了解甘孜州、阿坝州某些牦牛养殖场嵴病毒(kobuvirus)的携带情况,根据GenBank上牛嵴病毒核苷酸序列设计了一对特异性引物,建立了牦牛嵴病毒的PCR检测方法。结果表明PCR的扩增片段为454 bp,与牛的嵴病毒同源性为86%,确定为牦牛源嵴病毒核酸序列。利用建立的方法对40份腹泻牦牛的粪便样品进行检测,结果显示67.5%(27/40)的样本中携带嵴病毒,表明甘孜州和阿坝州地区牦牛群中嵴病毒感染相当普遍。本研究建立的PCR检测方法,为牦牛源嵴病毒的快速诊断和流行病学调查及有效防控嵴病毒的感染提供了方法依据和数据参考。
本人于2014年3月20日至5月1日在学校动物医学实验室完成了毕业实习工作。这段时间以来几乎每天泡在实验室里跑PCR,但是每天都有收获。懂得跑PCR,觉得不再那么难了,一切似乎变简单了
简介:嵴病毒(kobuvirus)是一种新发现的小RNA病毒科微核糖核酸病毒。小RNA病毒是一类没有囊膜的单股正链RNA病毒,共包含12个种属,分别为口蹄疫病毒属(Aphthovirus),禽肝病毒(Avihepatovirus),心病毒属(Cardiovirus),肠病毒属(Enterovirus),马鼻病毒属(Erbovirus),肝病毒属(Hepatovirus),双埃柯病毒(Parechovirus),扎幌病毒属(Sapelovirus),塞内卡病毒属(Senecavirus),捷申病毒属(Teschovirus),震颤病毒属(Tremovirus)和嵴病毒属(Kobuvirus)[1]。牦牛嵴病毒为嵴病毒属(Kobuvirus)成员。到目前为止,嵴病毒属至少包含三种病毒:爱知病毒、牛嵴病毒和猪嵴病毒。爱知病毒于1991年在日本爱知县患有急性胃肠炎的病人粪样中首次分离得到[2];猪嵴病毒于2007年在匈牙利健康猪粪样品中首次被发现后[4](同期在中国也有报道[5]相继在泰国[6]、日本[7]、韩国[8]、巴西和荷兰[9]等国被发现,阳性率相对较高。牛嵴病毒(U-1,AB084788)于2003年在日本首次分离到[3]。目前为止,牛嵴病毒已在亚洲、欧洲和南美洲的许多国家检测到,日本、清迈、比利时
实 习 报 告
和匈牙利三个国家健康牛群中嵴病毒的携带率分别为为16.7%、8.3%、6.25%和6.25%。 这些研究结果表明牛嵴病毒呈世界性分布引起普遍感染,在牛群中呈地方性流行。但还未见到关于牛嵴病毒导致的与胃肠炎相关的任何疾病的报道。
目前,在健康牛和腹泻牛的粪便中都有检测到嵴病毒,牛嵴病毒是否与肠道疾病有关,尚不清楚。但由于检出率较高,可能与其他肠道病毒发生混合感染或是疾病发生的诱导因素,甚至有可能对动物乃至人类健康造成潜在的威胁。目前尚未发现关于牦牛嵴病毒的研究,因此,及时加强牦牛嵴病毒的研究有重要的现实意义及科研意义。
本研究建立了检测牦牛嵴病毒的PCR方法,并用建立的PCR检测方法调查了四川省甘孜州、阿坝州采集的40份腹泻牦牛的粪样中嵴病毒的携带率情况,为牦牛嵴病毒的快速诊断、检疫、流行病学调查提供了准确而有效的检测手段。
摘要: 为了解甘孜州、阿坝州某些牦牛养殖场嵴病毒(kobuvirus)的携带情况,根据GenBank上牛嵴病毒核苷酸序列设计了一对特异性引物,建立了牦牛嵴病毒的PCR检测方法。结果表明PCR的扩增片段为454 bp,与牛的嵴病毒同源性为86%,确定为牦牛源嵴病毒核酸序列。利用建立的方法对40份腹泻牦牛的粪便样品进行检测,结果显示67.5%(27/40)的样本中携带嵴病毒,表明甘孜州和阿坝州地区牦牛群中嵴病毒感染相当普遍。本研究建立的PCR检测方法,为牦牛源嵴病毒的快速诊断和流行病学调查及有效防控嵴病毒的感染提供了方法依据和数据参考。
结果:1.PCR方法建立结果以提取的牦牛源嵴病毒的RNA反转录的cDNA为
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进行PCR扩增,在凝胶成像系统观察中可观测到清晰单一的目的条带2.测序比对结果
测序结果经BLAST比对,与GenBank中Bovine kobuvirus 的相似性最高,达86%,确认为牦牛嵴病毒。3.腹泻样本的检测结果利用建立的牦牛嵴病毒PCR检测方法,共检测了四川省阿坝州40份腹泻牦牛粪样。27份检测出嵴病毒,13份未检测出嵴病毒。阳性检出率为67.5%。
实 习 报 告
讨论:牛嵴病毒于2003年由Yamashita T等[3]首次在日本健康牛粪样品中发现,随后在多个国家被发现,且阳性率相对较高,从16.7%到99.0%不等。这些数据表明牛嵴病毒呈世界范围内的流行,且阳性率高,在具有腹泻症状的牛群中尤甚。尽管如此,牛嵴病毒与牛的肠道疾病是否有关,现在尚无定论。Gabor Reuter等[5]。
我们的实验结果表明在甘孜、阿坝州临床上表现出腹泻症状的牦牛群中,嵴病毒的阳性携带率很高,达67.5%(27∕40),表明牦牛嵴病毒在牦牛群中普遍存在。但由于样品数量少,所以实验结果不足以代表青藏高原地区牦牛嵴病毒的携带情况,该病毒在整个青藏高原地区的具体流行、分布情况等尚需进一步做大量的研究工作才能够得出科学客观的结果。
另外,由于嵴病毒在腹泻牦牛粪便中的检出率较高,可能与其他肠道病毒发生混合感染或是疾病发生的诱导因素,甚至有可能对动物乃至人类健康造成潜在的威胁。因此,及时加强牦牛嵴病毒的研究有重要的现实意义及科研意义。本研究建立的牦牛嵴病毒的PCR检测方法,简单易行,能够准确、快速检测病原,具有PCR仪器的分子生物学研究室都可进行对牦牛嵴病毒的检测,对牦牛嵴病毒的快速诊断和流行病学监测提供了方法参考和数据资料。
小结1.建立了牦牛源嵴病毒的PCR检测方法。2.利用建立的PCR方法,完成了40份腹泻牦牛粪便样本的检测,结果显示67.5%(27/40)的样本中携带嵴病毒,表明嵴病毒感染在这些牦牛场相当普遍。
实习单位指导教
师意见及成绩
实习单位盖章
年 月 日
实习
报告
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评阅
意见及成绩
指导教师签章
年 月 日
实习领导小组评议意
见及综合评定成绩
实习领导小组负责人签章
年 月 日
教学单位
审定意见
签 章
年 月 日
说明:评定成绩为“优、良、中、及格、不及格”五级计分。