乳酸菌精简
方法
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及显微镜使用方法第一部分:乳酸菌镜检可以采用革兰氏染色方法。
第二部分:使用显微镜的油镜进行镜检,
下面是具体的染色方法和镜检方法,请参考。
第一部分:乳酸菌革兰氏染色方法
1目的
在乳酸菌发放之前,利用
标准
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的革兰氏染色法对即将发放的乳酸菌悬液或乳酸菌样品进行检测,观察乳酸菌乳酸菌在显微镜下的形态。
2原理
通过结晶紫初染和碘液媒染后,在细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物,革兰氏阳性菌由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次较多且交联致密,故遇乙醇脱色处理时,因失水反而使网孔缩小,再加上它不含类脂,故乙醇处理不会出现缝隙,因此能把结晶紫与碘复合物牢牢留在壁内,使其仍呈紫色;而革兰氏阴性菌因其细胞壁薄、外膜层类脂含量高、肽聚糖层薄且交联度差,在遇脱色剂后,以类脂为主的外膜迅速溶解,薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结晶紫与碘复合物的溶出,因此通过乙醇脱色后仍呈无色,再经沙黄等红色染料复染,就使革兰氏阴性菌呈红色。
3 实验用品准备:
灭菌玻片、10-100ul移液器、10-100ul灭菌移液吸头、100ul-1000ul移液器、100ul-1000ul移液吸头、接种环、酒精灯、打火机、革兰氏染色液、吸水纸、显微镜、香柏油、擦镜纸、计时器
4 操作:
1 涂片:取灭过菌的载玻片于实验台上,用移液枪吸取10ul待检样品滴在载玻片的中央,
用烧红冷却后的接种环将液滴涂布成一均匀的薄层,涂布面不宜过大。
2 干燥:将标本面向上,手持载玻片一端的两侧,小心地在酒精灯上高处微微加热,使水
分蒸发,但切勿紧靠火焰或加热时间过长,以防标本烤枯而变形。
3 固定:固定常常利用高温,手持载玻片的一端,标本向上,在酒精灯火焰处尽快的来回
通过2-3次,共约2-3秒种,并不时以载玻片背面加热触及皮肤,不觉过烫为
宜(不超过60℃),放置待冷后,进行染色。
4 初染:在涂片薄膜上滴加草酸铵结晶紫1-2滴,使染色液覆盖涂片,染色约1min。
5 水洗:斜置载玻片,在自来水龙头下用小股水流冲洗,直至洗下的水呈无色为止。
6 媒染:用100-1000ul移液枪吸取约300ul碘液滴在涂片薄膜上,使染色液覆盖涂片,
染色约1min。
7 水洗:斜置载玻片,在自来水龙头下用小股水流冲洗,直至洗下的水呈无色为止。
8 脱色:斜置载玻片,滴加95%乙醇脱色,至流出的乙醇不现紫色为止,大约需时20-30S,
随即水洗。
9 复染:在涂片薄膜上滴加沙黄染液1-2滴,使染色液覆盖涂片,染色约1min。
10 水洗:斜置载玻片,在自来水龙头下用小股水流冲洗,直至洗下的水呈无色为止。
11 干燥、观察:用吸水纸吸掉水滴,待标本片干后置显微镜下,用低倍镜观察,发现目
的物后滴一滴浸油在玻片上,用油镜观察细菌的形态及颜色,紫色的是革兰氏
阳性菌,红色的是革兰氏阴性菌。
5清场
实验结束后,将显微镜油镜上的残留的香柏油用擦镜纸轻轻擦去,将载物台移至最底处,将灯光调到最暗并将其关闭电源,拔下电源插头,罩上防尘罩
第二部分显微镜使用方法
以XSZ-3G型号的生物显微镜为例介绍显微镜操作规程及
注意事项
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,乳酸菌形态观察要用油镜。
XSZ-3G生物显微镜操作规程及注意事项
1 操作规程
1.1安放
右手握住镜臂,左手托住镜座,使镜体保持直立。桌面要清洁、平稳,要选择临窗或光线充足的地方,距离桌边3~4厘米处。
1.2 清洁
检查显微镜是否清洁,镜身机械部分可用干净软布擦拭。透镜要用擦镜纸擦拭,如有胶或粘污,可用少量二甲苯清洁之。
1.3 对光
镜筒升至距载物台1~2厘米处,低倍镜对准通光孔。调节光亮度的旋钮。
1.4 安装标本
将玻片放在载物台上,注意有盖玻片的一面一定朝上。用弹簧夹将玻片固定,转动平
台移动器的旋钮,使要观察的材料对准通光孔中央。
1.5 调焦
调焦时,先旋转粗调焦旋钮慢慢降低镜筒,并从侧面仔细观察,直到物镜贴近玻片标本,然后左眼自目镜观察,左手旋转粗调焦旋钮抬升镜筒,直到看清标本物像时停止,再用细调焦旋钮回调清晰。
1.6 观察
镜检时应将标本按一定方向移动视野,直至整个标本观察完毕,以便不漏检,不重复。
低倍镜观察:观察任何标本时,都必须先使用低倍镜,因为其视野大,易发现目标和确定要观察的部位。
高倍镜观察:从低倍镜转至高倍时,只需略微调动细调焦旋钮,即可使物像清晰。使用高倍镜时切勿使用粗调焦旋钮,否则易压碎盖玻片并损伤镜头。
油镜的观察:先用低倍镜及高倍镜将被检物体移至视野中央后,再换油镜观察。油镜观察前,应将显微镜亮度调整至最亮,光圈完全打开。
使用油镜时,先在盖玻片上滴加一滴香柏油(镜油),然后降低镜筒并从侧面仔细观察,直到油镜浸入香柏油并贴近玻片标本,然后用目镜观察,并用细调焦旋钮抬升镜筒,直到看清标本的焦段时停止并调节清晰。
香柏油滴加要适量。油镜使用完毕后一定要用擦镜纸沾取二甲苯擦去香柏油,并再用干的擦镜纸擦去多余二甲苯。
1.7 结束操作
观察完毕,移去样品,扭转转换器,使镜头V字型偏于两旁,擦抹干净,将光亮度调至最暗,再关闭电源按钮,以防止下次开机时瞬间过强电流烧坏光源灯,并套上镜套。
2 注意事项
2.1 光强的调节:一般情况下,染色标本光线宜强,无色或未染色标本光线宜弱;低倍镜观察光线宜弱,高倍镜观察光线宜强。
2.2 不应在高倍镜下直接调焦;镜筒下降时,应从侧面观察镜筒和标本间的间距;要了解物距的临界值。
2.3 在进行高倍镜头的切换的时候,一定要从低倍到高倍顺序,否则容易打坏镜头,还会污染低倍物镜。
2.4 转换物镜时要用手转物镜转盘,不能直接扳动物镜。
2.5 显微镜的任何光学部件都不可以干擦,必须用好的擦镜纸或者棉签沾清洗液擦洗。特别注意擦之前一定要用吹气球先吹掉大的灰尘颗粒。
2.6 不要随意把目镜拿下来,这样容易污染目镜,严重的会因此而长霉。
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