首页 promega Tunel免疫组化步骤

promega Tunel免疫组化步骤

举报
开通vip

promega Tunel免疫组化步骤Tunel步骤: 开始前,拿平衡缓冲液、蛋白酶K、DNaseⅠ出来融化 石蜡样本由此开始: 1、将载玻片浸到新鲜的二甲苯中脱蜡,室温,5min。重复一次。 2、将载玻片浸到100%乙醇中,室温,5min。 3、重复2三次,梯度乙醇再水和,95%、85%、70%、50%乙醇中,室温,各3min。 冰冻样本由此开始:先将样本放到pbs中浸5min,再摇床5min,洗OCT 4、将载玻片浸到0.85%NaCl中,室温,5min。 5、将载玻片浸到PBS中,室温,5min。 6、将载玻片浸到4%多聚甲醛...

promega Tunel免疫组化步骤
Tunel步骤: 开始前,拿平衡缓冲液、蛋白酶K、DNaseⅠ出来融化 石蜡样本由此开始: 1、将载玻片浸到新鲜的二甲苯中脱蜡,室温,5min。重复一次。 2、将载玻片浸到100%乙醇中,室温,5min。 3、重复2三次,梯度乙醇再水和,95%、85%、70%、50%乙醇中,室温,各3min。 冰冻样本由此开始:先将样本放到pbs中浸5min,再摇床5min,洗OCT 4、将载玻片浸到0.85%NaCl中,室温,5min。 5、将载玻片浸到PBS中,室温,5min。 6、将载玻片浸到4%多聚甲醛中,室温,15min。 7、将载玻片浸到PBS中,室温,5min。重复一次 8、吸干组织上的液体,将载玻片平放。 A、将10mg/ml蛋白酶K用PBS以1:500稀释到20ug/ml B、每张玻片上加100ul,20ug/ml蛋白酶K,并将组织盖好,室温,10-30min。(摸条件) 9、将载玻片浸到PBS中,室温,5min。 10、将载玻片浸到4%多聚甲醛中,室温,5min。拿生物素(mix)出来融 11、将载玻片浸到PBS中,室温,5min。重复一次。 可选阳参:为阳参准备单独的染色缸(DNaseⅠ:1mg/ul,每样0.25ul) 1)、加100ulDNase Ⅰ缓冲液到固定好的细胞上,室温,5min。 2)、轻叩掉液体,加100ul含有5-10U/mlDNase Ⅰ缓冲液,室温,5min。 3)、轻叩掉多余的液体,将载玻片浸到去离子水中,3-4次。 4)、将载玻片浸到PBS中,室温,5min。 rTdT反应mix配方 equilibration buffer 98ul biotinlated nucleotide mix 1ul rTdT enzyme 1ul (阴参用高压过的RO水代替rTdT酶) 12、轻叩玻璃片去掉多余的液体,加100ul平衡缓冲液,室温5-10min。 13、标本平衡的时候,将生物素化的核酸mix放冰上融化,并且配置足够的rTdT反应mix,放冰上(100ul/片)。 14、用棉纸吸干平衡过的区域,并且每张玻片加100ulrTdT反应mix到组织上。不要让组织干掉。 15、用塑料盖玻片将组织盖上,将载玻片放到湿盒中,37度,60min。 16、用去离子水,1:10稀释20X SSC,拿掉塑料盖玻片,将载玻片浸到装有2X SSC的染色缸中,室温,15min。 17、将载玻片浸到新鲜的PBS中,室温,5min。重复两次。 18、将载玻片浸到PBS配制的0.3%的双氧水中,室温,3-5min。 19、将载玻片浸到PBS中,室温,5min。重复两次。 20、用PBS稀释亲和素HRP,每张玻片加100ul,室温,30min。 21、将载玻片浸到PBS中,室温,5min。重复两次。 22、DAB现用现配, 950ul 去离子水 50ul 20X DAB substrate buffer 50ul 20X Chromogen 50ul 20X hydrogen peroxinde 每张玻片加100ul DAB溶液,等到有淡棕色背景为止。(时间可调)不要让背景太深。(DAB 比光放,并在30min内用) 23、用去离子水洗载玻片数次。 (24、用中性树胶封片) 备注: 1、所有洗的步骤用摇床 2、接着做免疫组化,则再用水洗后再用pbs洗一遍
本文档为【promega Tunel免疫组化步骤】,请使用软件OFFICE或WPS软件打开。作品中的文字与图均可以修改和编辑, 图片更改请在作品中右键图片并更换,文字修改请直接点击文字进行修改,也可以新增和删除文档中的内容。
该文档来自用户分享,如有侵权行为请发邮件ishare@vip.sina.com联系网站客服,我们会及时删除。
[版权声明] 本站所有资料为用户分享产生,若发现您的权利被侵害,请联系客服邮件isharekefu@iask.cn,我们尽快处理。
本作品所展示的图片、画像、字体、音乐的版权可能需版权方额外授权,请谨慎使用。
网站提供的党政主题相关内容(国旗、国徽、党徽..)目的在于配合国家政策宣传,仅限个人学习分享使用,禁止用于任何广告和商用目的。
下载需要: 免费 已有0 人下载
最新资料
资料动态
专题动态
is_633808
暂无简介~
格式:doc
大小:14KB
软件:Word
页数:4
分类:医药卫生
上传时间:2019-02-06
浏览量:40