注射用紫杉醇脂质体包封率、有关物质、含量测定检验方法学确认方案

注射用紫杉醇脂质体包封率、有关物质、含量测定检验 方法学确认 方案 气瓶 现场处置方案 .pdf气瓶 现场处置方案 .doc见习基地管理方案.doc关于群访事件的化解方案建筑工地扬尘治理专项方案下载   文件编号：VP-4F97MV-00 2012年10月 南京绿叶思科药业有限公司 Nanjing Luye Sike Pharmaceutical Co.,Ltd   目  录 1.    概述    1 2.    目的    1 3.    范围    1 4.    风险评估    1 5.    计划 项目进度计划表范例计划下载计划下载计划下载课程教学计划下载 确认时间    1 6.    确认人员及职责    1 7.    确认前准备    2 8.  确认内容    3 9. 可接受 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载     8 10. 偏差调查及异常情况    8 11. 综合分析与结果 评价 LEC评价法下载LEC评价法下载评价量规免费下载学院评价表文档下载学院评价表文档下载     8 12. 验证结论和监测建议    8 13. 附件    9 1. 概述 现行的注射用紫杉醇脂质体质量标准为国家药品标准WS-718(X-529)-2002，为了确认包封率、有关物质、含量测定检验方法在本公司质管部实验室条件下的适用性，特制定本确认方案。 2. 目的 确认注射用紫杉醇脂质体质量标准（国家药品标准WS-718(X-529)-2002）中包封率、有关物质、含量测定检验方法在本公司质管部实验室条件下的适用性。 3. 范围 本确认方案适用于注射用紫杉醇脂质体国家药品标准WS-718(X-529)-2002中包封率、有关物质及含量测定检验方法在本公司质管部实验室的方法学确认。 4. 风险评估 编号 风险 影响 S P D 风险等级 确认活动 1 未按照方案执行。 导致确认结果不可信。 3 2 2 高 确认前对参与确认的人员进行培训。 2 未按照SOP执行操作。 导致确认结果不可信。 3 2 2 高 确认过程和结果由另一人进行复核。 注：S: 严重性 P:可能性 D:可检测性                 5. 计划确认时间 确认实施时间计划为2012年10月26日至 2012年11月10日。    6. 确认人员及职责 6.1 确认小组组长 姓名 部门 职务 责任 王晟 质管部 检验员 负责确认方案的起草，在方案批准后，对确认小组成员进行本方案的培训。负责确认方案的实施。确认过程中，如有偏差，及时报告并配合调查，保证按偏差处理程序进行调查和处理。确保报告的生成、审核和批准。         6.2 确认小组成员 姓名 部门 职务 责 任 毛圣淼 质管部 检验员 在方案批准后，按确认方案实施，收集、整理数据，完成确认记录，对确认过程中出现的偏差及时报告并配合调查。待确认完成后，起草确认报告。         7. 确认前准备 7.1 确认相关文件（检查记录见附表一：确认文件检查记录） 7.1.1 方案建立的依据 ● 注射用紫杉醇脂质体质量标准（WS-718(X-529)-2002） ● 《中国药典》（2010年版） 药品质量标准分析方法验证指导原则 ● 《药品GMP指南》（2011年版） 分析方法的验证和确认 7.1.2 公司相关管理制度 ● 偏差管理规程（SMP-QA-024） ● 验证程序管理规程（SMP-QA-032） ● 验证文件管理规程（SMP-QA-030） 7.1.3 确认必备的操作规程 无。 7.1.4 相关质量标准和检验规程及检验仪器的操作规程 ● Agilent1200 高效液相色谱仪操作维护保养规程（SOP-EM-521） ● METTLER-TOLEDO  XS105分析天平操作规程（SOP-EM-519） 7.2 参与确认人员的培训 确认开始前必须保证所有人员都经过相应的培训，并做好培训记录。 （见附表二：人员培训记录） 7.3 支持仪器/设备有效期确认 确认开始前必须对确认中所需要的检测仪器/设备的有效期进行检查，保证所用检验仪器/设备在确认实施中是处于合格有效的，并做好检查记录。（见附表三：检验仪器的有效性记录） 8.  确认内容 8.1 试剂及仪器设备 试剂列表 试剂名称 来源 紫杉醇对照品 自标（云南汉德） 甲醇（色谱纯） Tedia Company,InC. USA 注射用水 制水三室     分析仪器列表 设备名称 生产公司名称 型号 设备编号 电子天平 梅特勒-托利多仪器有限公司 XS105 002 高效液相色谱仪 美国安捷伦科技公司 Agilent 1200 014 色谱柱 汉邦科技 4C18254F 09010904         8.2 包封率检验方法学确认 8.2.1 检验方法 色谱条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇:水（3:1）为流动相，检测波长为227nm。理论板数按紫杉醇峰计算，应不低于1000。 供试品溶液的制备：取本品1瓶，加5%葡萄糖注射液7.5ml,旋涡混匀10分钟,使成每1ml中含紫杉醇约为4mg的乳浊液。 测定法：取用水充分溶胀后的葡聚糖凝胶(SephadexG-50，100-300μ)加入内径为0.7cm的层析柱中,使凝胶层高约为21cm，用水100ml分次加入柱中，使柱平衡，精密吸取供试品溶液0.2ml,沿管壁加至凝胶层面上，用少量水冲洗层析柱壁，每次1ml，共两次，使样品进入凝胶柱，然后用细玻璃棒轻轻搅匀样品层（约1cm高）。用水洗脱，自洗脱液出现轻微浑浊，即开始定量收集洗脱液15ml，摇匀，精密量取2ml置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即为测定被包封的紫杉醇含量ME的溶液。凝胶柱再用不同浓度的乙醇梯度洗脱（沿管壁缓缓依次加入33%乙醇3ml，66%乙醇3ml及无水乙醇），弃去洗脱液10ml，立即开始定量收集游离紫杉醇部分，共收集5ml，作为测定MF的溶液。照含量测定项下的色谱方法，取ME 和MF溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。以峰面积按下式计算包封率和回收率： 包封率（%）= ×100%  回收率（%）= 式中：ME为被包封在脂质体中的紫杉醇的峰面积 MF为未被包封的游离紫杉醇的峰面积。 为总紫杉醇的峰面积。 8.2.2 确认项目的确定 根据《药品GMP指南》（2011年版） 分析方法的验证和确认，参照含量测定法的确认项目，应该要确认的项目有专属性、精密度；由于包封率的样品由收集获得，可能存在收集不完全而使结果产生偏差，所以准确度也需确认，在本方案中增加回收率实验。则需要确认的项目为专属性、精密度、准确度。 8.2.3 专属性 8.2.3.1 操作方法 按处方量精密称取辅料，置于20ml西林瓶中，加入5%葡萄糖注射液7.5ml，涡旋振荡10min，配置成空白辅料溶液。取空白辅料溶液，按照8.2.1项下的测定法操作，将收集到的ME、MF和ML各精密量取20μl注入液相色谱仪。记录色谱图。 8.2.3.2 接受标准 用空白辅料溶液收集得到的ME、MF和ML色谱图在紫杉醇峰位置均应无干扰。 8.2.4 进样精密度 8.2.4.1 操作方法 按照8.2.1项测定法配制ME溶液，分别精密量取20μl注入液相色谱仪，连续测定6次，记录色谱图。 8.2.4.2 接受标准 连续6次测定的ME主峰面积的相对标准偏差（RSD）应不大于2.0%。 8.2.5 重复性 8.2.5.1 操作方法 取注射用紫杉醇脂质体3瓶，分别加入5%葡萄糖注射液6.2、7.5、9.4ml涡旋振荡溶解，每瓶按照8.2.1项下的测定法分别操作3次，计算包封率。 8.2.5.2 接受标准 9次包封率的相对标准偏差（RSD）应不大于2.0%。 8.2.6  回收率 8.2.6.1 操作方法 取注射用紫杉醇脂质体3瓶，分别加入5%葡萄糖注射液6.2、7.5、9.4ml涡旋振荡溶解，每瓶按照8.2.1项下的测定法分别操作3次，计算回收率。 8.2.6.2 接受标准 9次回收率均应在98.0～102.0%之间，其相对标准偏差（RSD）应不大于2.0%。 8.3 有关物质检验方法学确认 8.3.1 检验方法 色谱条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇:水（3:1）为流动相，检测波长为227nm。 测定法：取本品适量，加甲醇制成每1ml中约含紫杉醇1.5mg的溶液，作为供试品溶液；精密量取适量，加甲醇稀释制成每1ml中含紫杉醇0.045mg的溶液，作为对照溶液。照含量测定项下的色谱方法，取对照溶液20μl注入液相色谱仪，调节检测器灵敏度，使主成分峰的高达记录仪满量程的30%；再准确量取对照溶液和供试器溶液各20μl，注入液相色谱仪，记录供试品溶液色谱图至主成分峰保留时间的3倍。供试品溶液的色谱图中如显杂质峰，计算各杂质峰面积的总和，不得大于对照溶液的主峰面积的1.5倍（4.5%）。 8.3.2 确认项目的确定 根据《药品GMP指南》（2011年版） 分析方法的验证和确认，有关物质应该要确认的项目有专属性、定量限、精密度；由于有关物质检测没有规定已知杂质，因此不进行准确度确认。 8.3.3 专属性 8.3.3.1 操作方法 精密称取注射用紫杉醇脂质体0.63g，用甲醇溶液定容于10ml容量瓶，制成每1ml中约含紫杉醇1.5mg的供试品溶液。 按处方量配制空白辅料溶液：精密称取各辅料，置于20ml容量瓶中，用甲醇溶解定容。 精密量取上述溶液各20ul，按照有关物质供试品溶液方法注入液相色谱仪，记录色谱图。 8.3.3.2 接受标准 在该色谱条件下，空白辅料在紫杉醇位置不出峰。 8.3.4 进样精密度 8.3.4.1 操作方法 取1瓶注射用紫杉醇脂质体，精密称取供试品0.63g，加甲醇溶于10ml容量瓶中，制成每1ml中约含紫杉醇1.5mg的供试品溶液，精密量取供试品溶液3ml,加甲醇溶于100ml容量瓶中，制成每1ml中含紫杉醇0.045mg的对照溶液。分别精密量取对照溶液20ul，按照有关物质方法注入液相色谱仪，连续测定6次，记录色谱图。 8.3.4.2 接受标准 6次测得的对照主峰面积的相对标准偏差（RSD）应不大于5.0%。 8.3.5 定量限 精密称取紫杉醇对照品15mg，用甲醇溶液定容于10ml容量瓶，制成每1ml中约含紫杉醇1.5mg的供试品溶液。用甲醇逐步稀释供试品溶液并精密量取20ul注入液相色谱仪，记录色谱图，观察紫杉醇峰的信噪比，直至峰高为基线噪音的10倍时，记录此时紫杉醇对照品的进样量，即为其定量限。 8.3.6 重复性 8.3.6.1 操作方法 取4瓶注射用紫杉醇脂质体，分别精密称取供试品0.63g，加甲醇溶于10ml容量瓶中，制成每1ml中约含紫杉醇1.5mg的供试品溶液，精密量取供试品溶液3ml,加甲醇溶于100ml容量瓶中，制成每1ml中含紫杉醇0.045mg的对照溶液，分别精密量取20ul注入液相色谱仪，计算有关物质的值。共配制6份供试品溶液进行检验。 8.3.6.2  接受标准 6份供试品溶液有关物质的值的相对标准偏差（RSD）应不大于5.0%。 8.4 含量测定检验方法学确认 8.4.1 检验方法 色谱条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇：水（3:1）为流动相，检测波长为227nm。理论板数按紫杉醇峰计算，应不低于1000。 测定法：取本品3瓶，分别加甲醇使溶解，转移至200ml量瓶中，并用甲醇稀释至刻度；精密量取1ml，置10ml量瓶中，加甲醇5ml，摇匀，用流动相稀释至刻度。精密量取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图。另取紫杉醇对照品约10mg，精密称定，置25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml置10ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，同法测定。按外标法以峰面积计算，即得。含紫杉醇(C47H51NO14)应为标示量的90.0～110.0%。 8.4.2 确认项目的确定 根据《药品GMP指南》（2011年版） 分析方法的验证和确认，含量测定的确认项目为专属性和精密度，准确度经评估后确定是否需进行确认。由于含量测定中供试品溶液的配制为甲醇溶解和稀释，准确度不会受实验室条件的影响，由于准确度已经方法学验证，本次不再进行确认。 8.4.3 专属性 由于注射用紫杉醇脂质体含量测定和有关物质的色谱条件一致，且有关物质测定方法中各辅料的浓度远大于含量测定方法中辅料的浓度，故含量测定方法的专属性无需另外确认。 8.4.4 进样精密度 8.4.4.1 操作方法 精密称取紫杉醇对照品10mg，置25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml置10ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，制成含紫杉醇0.04mg/ml的对照品溶液。精密量取20μl注入液相色谱仪，连续进样6次，记录色谱图。 8.4.4.2 接受标准 6次的紫杉醇的峰面积的相对标准偏差（RSD）不得大于2.0%。 8.4.5 重复性 8.4.5.1 操作方法 对照品溶液：精密称取紫杉醇对照品约10mg，精密称定，置25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml置10ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀。 供试品溶液：取本品3瓶，分别加甲醇使溶解，转移至200ml量瓶中，并用甲醇稀释至刻度；精密量取1ml，置10ml量瓶中，加甲醇5ml，摇匀，用流动相稀释至刻度。共制备6份供试品溶液。 精密量取供试品溶液和对照品溶液各20μl注入液相色谱仪，记录色谱图。 8.4.5.2 接受标准 6份供试品含量的相对标准偏差（RSD）应不大于2.0%。 9. 可接受标准  确认按照确认方案执行，各检测项目符合合格标准。 项目 标 准 包封率 进样精密度 连续6次进样的主峰面积的相对标准偏差（RSD）应不大于2.0%。 专属性 用空白辅料溶液收集得到的ME、MF和ML色谱图中在紫杉醇峰位置均应无干扰。 重复性 9次包封率的值的相对标准偏差（RSD）应不大于2.0%。 回收率 9次回收率均应在98.0～102.0%之间，其相对标准偏差（RSD）应不大于2.0%。 有关物质 进样精密度 连续6次测得的有关物质值的相对标准偏差（RSD）应不大于5.0%。 专属性 空白辅料在紫杉醇位置不出峰。 定量限 定量限的紫杉醇峰的性噪比应≥10.0。 重复性 所得6份有关物质的值的相对标准偏差（RSD）应不大于5.0%。 含量测定 进样精密度 连续进样6次的峰面积的相对标准偏差（RSD）不得大于2.0%。 专属性 空白辅料在紫杉醇位置不出峰。 重复性 六份含量的相对标准偏差（RSD）应不大于2.0%。       10. 偏差调查及异常情况 实验过程中任何失败的测试，方案实施过程中任何验证项目偏离标准均需复核和评估并查出原因。 11. 综合分析与结果评价 确认小组成员负责完成各项确认记录并起草确认报告。确认组长综合确认实施情况及结果，就注射用紫杉醇脂质体质量标准（国家药品标准WS-718(X-529)-2002）检验方法在本公司质管部实验室条件下是否适用作出评定及结论。 12. 确认结论和监测建议 确认小组根据确认过程和结果提出确认结论和日常监测建议，报确认委员会审批，由确认委员会决定本次确认是否有效和是否发放确认合格证书。 13. 附件 附表一：文件检查记录 附表二：人员培训记录 附表三：检测仪器的有效性记录 附表四：确认结果记录 附表五：异常情况统计表 附表六：偏差清单 附表一： 文 件 检 查 记 录 确认项目名称： 注射用紫杉醇脂质体包封率、有关物质、含量测定检验方法学确认 确认项目编号： VA-4F97MV-00                                                       第1页  共1页>            序号 文件名称 文件编号 存放处                                                                                                                 结论： 检查人/日期： 复核人/日期：           附表二： 培 训 记 录 确认项目名称：注射用紫杉醇脂质体包封率、有关物质、含量测定检验方法学确认 确认项目编号：VA-4F97MV-00                                                      第1页  共1页>            培训主 题 快递公司问题件快递公司问题件货款处理关于圆的周长面积重点题型关于解方程组的题及答案关于南海问题 ： 主讲人： 培训部门： 培训时间： 培训方式： 培训地点： 培训内容： 部门/班组 姓名 签字 部门/班组 姓名 签字                                                                                                                   附表三： 检 测 仪 器 的 有 效 性 记 录 确认项目名称：注射用紫杉醇脂质体包封率、有关物质、含量测定检验方法学确认 确认项目编号：VA-4F97MV-00                                              第1页  共1页> 序 号 仪器名称 检定/计量/校验编号 有效期至                                                                                                                                                 结论： 检查人/日期： 复核人/日期：           附表四： 确认结果记录 确认项目名称：注射用紫杉醇脂质体包封率、有关物质、含量测定检验方法学确认   确认项目编号：VA-4F97MV-00                                             第 1 页 共 8 页 包封率 进样精密度 温度：  ℃，湿度：    %。 仪器：            高效液相色谱仪，编号：    ；色谱柱系列号                。 结果： 峰面积As As RSD(%)                             可接受标准：连续6次进样的主峰面积的相对标准偏差（RSD）应不大于2.0%。 结论：□符合规定    □不符合规定 检验人/日期                          复核人/日期                    专属性 温度：  ℃，湿度：    %。 仪器：            高效液相色谱仪，编号：    ；色谱柱系列号                。 结果： 可接受标准：用空白溶液收集得到的ME、MF及空白溶液色谱图中在紫杉醇峰位置均应无干扰。 结论：□符合规定    □不符合规定 检验人/日期                          复核人/日期                    重复性 温度：  ℃，湿度：    %。 仪器：            高效液相色谱仪，编号：    ；色谱柱系列号                。 结果： 附表四： 确认结果记录 确认项目名称：注射用紫杉醇脂质体包封率、有关物质、含量测定检验方法学确认   确认项目编号：VA-4F97MV-00                                              第 2 页 共 8 页   ME峰面积 ME峰面积平均 MF峰面积 MF峰面积平均 ML峰面积 ML峰面积平均 包封率（%） 回收率（%） 包封率RSD（%） 1                         2                       3                       4                       5                       6                       7                         8                         9                                             可接受标准：9次包封率的相对标准偏差（RSD）应不大于2.0%。 结论：□符合规定    □不符合规定 检验人/日期                          复核人/日期                    回收率 附表四： 确认结果记录 确认项目名称：注射用紫杉醇脂质体包封率、有关物质、含量测定检验方法学确认   确认项目编号：VA-4F97MV-00                                              第 3 页 共 8  页 温度：  ℃，湿度：    %。 仪器：            高效液相色谱仪，编号：    ；色谱柱系列号                。 结果：   ME峰面积 ME峰面积平均 MF峰面积 MF峰面积平均 ML峰面积 ML峰面积平均 包封率（%） 回收率（%） 回收率RSD（%） 1                         2                       3                       4                       5                       6                       7                         8                         9                                             可接受标准：9次回收率均应在98.0～102.0%之间，其相对标准偏差（RSD）应不大于2.0%。 附表四： 确认结果记录 确认项目名称：注射用紫杉醇脂质体包封率、有关物质、含量测定检验方法学确认   确认项目编号：VA-4F97MV-00                                              第 4 页 共 8  页 结论：□符合规定    □不符合规定 检验人/日期                          复核人/日期                    有关物质 进样精密度 温度：  ℃，湿度：    %。 仪器：            电子天平，仪器编号：    ；            高效液相色谱仪，编号：    ；色谱柱系列号                。 结果： 称样量（g） 定容体积(ml) 峰面积As As RSD(%)                                     可接受标准：6次测得的对照主峰面积的相对标准偏差（RSD）应不大于5.0%。 结论：□符合规定    □不符合规定 检验人/日期                          复核人/日期                    专属性 温度：  ℃，湿度：    %。 仪器：            电子天平，仪器编号：    ；            高效液相色谱仪，编号：    ；色谱柱系列号                。 结果： 附表四： 确认结果记录 确认项目名称：注射用紫杉醇脂质体包封率、有关物质、含量测定检验方法学确认   确认项目编号：VA-4F97MV-00                                              第 5 页 共 8  页 辅料 胆固醇 卵磷脂 葡萄糖 苏氨酸 称样量（g）         定容体积(ml)         紫杉醇位置有无峰             可接受标准：空白辅料在紫杉醇位置不出峰。 结论：□符合规定    □不符合规定 检验人/日期                          复核人/日期                    定量限 温度：  ℃，湿度：    %。 仪器：            电子天平，仪器编号：    ；            高效液相色谱仪，编号：    ；色谱柱系列号                。 结果： 称样量（mg） 定容体积(ml) 稀释倍数 最终浓度(μg/ml) 定量限(ng) 信噪比                         可接受标准：空白辅料在紫杉醇位置不出峰。 结论：□符合规定    □不符合规定 检验人/日期                          复核人/日期                    重复性 温度：  ℃，湿度：    %。 仪器：            电子天平，仪器编号：    ；            高效液相色谱仪，编号：    ；色谱柱系列号                。 结果： 附表四： 确认结果记录 确认项目名称：注射用紫杉醇脂质体包封率、有关物质、含量测定检验方法学确认   确认项目编号：VA-4F97MV-00                                              第 6 页 共 8  页 称样量（g） 定容体积（ml） 对照峰面积 对照峰面积平均值 杂质峰面积 有关物质(%) 有关物质RSD（%）                                                                                                                 可接受标准：所得6份有关物质的值的相对标准偏差（RSD）应不大于5.0%。 结论：□符合规定    □不符合规定 检验人/日期                          复核人/日期                    附表四： 确认结果记录 确认项目名称：注射用紫杉醇脂质体包封率、有关物质、含量测定检验方法学确认   确认项目编号：VA-4F97MV-00                                              第 7 页 共 8  页 含量测定 进样精密度 温度：  ℃，湿度：    %。 仪器：            电子天平，仪器编号：    ；            高效液相色谱仪，编号：    ；色谱柱系列号                。 结果： 对照品称重（mg） 定容体积(ml) 稀释倍数 浓度（mg/ml） 峰面积 峰面积（RSD）                                   可接受标准：连续6次进样的主峰面积的相对标准偏差（RSD）应不大于2.0%。 结论：□符合规定    □不符合规定 检验人/日期                          复核人/日期                    重复性 温度：  ℃，湿度：    %。 仪器：            电子天平，仪器编号：    ；            高效液相色谱仪，编号：    ；色谱柱系列号                。 结果： 附表四： 确认结果记录 确认项目名称：注射用紫杉醇脂质体包封率、有关物质、含量测定检验方法学确认   确认项目编号：VA-4F97MV-00                                              第 8 页 共 8  页 对照品称重（mg） 定容体积（ml） 浓度 （mg/ml） 峰面 / / 平均值 RSD（%） RSD（%）                                                               供试溶液 峰面积 平均峰 面积 含量（%） 平均含量 （%） RSD （%） 1             2         3         4         5         6                       接受标准：6份供试品含量的相对标准偏差（RSD）应不大于2.0%。。 结论：□符合规定    □不符合规定 检验人/日期                          复核人/日期                    附表五： 异常情况统计表 确认项目名称：注射用紫杉醇脂质体包封率、有关物质、含量测定检验方法学确认   确认项目编号：VA-4F97MV-00                                                第1页  共1页 序号 发生日期 描述 处理情况                                                         统计人/日期： 复核人/日期：           附表六： 偏差清单 确认项目名称：注射用紫杉醇脂质体包封率、有关物质、含量测定检验方法学确认   确认项目编号: VA-4F97MV-00                                                  第1页  共1页 序号 偏差编号 发生日期 是否闭环 描述                                                             结论： 记录人/日期： 复核人/日期：