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431 高效液相色谱法标准操作规程.doc

431 高效液相色谱法标准操作规程

lijb2007
2018-09-07 0人阅读 0 0 0 暂无简介 举报

简介:本文档为《431 高效液相色谱法标准操作规程doc》,可适用于医药卫生领域

SOPQM执行日期:年月日题目高效液相色谱法标准操作规程起草:年月日部门审核:年月日质量部审查:年月日批准:年月日发放部门质量部目的:规范高效液相色谱法操作法范围:原料、产品职责:检验室对本规程的实施负责正文:原理高效液相色谱法是将具一定性的单一溶剂或不同比例的混合溶液作为流动相用泵将流动相注入装有填充剂的色谱柱注入的供试品被流动相带入柱内分离后各成分先后进入检测器用记录仪或数据处理装置记录色谱图或进行数据处理得到测定结果。高效液相色谱仪基本由泵、进样器、色谱柱、检测器和色谱数据处理系统组成。操作前的准备流动相的制备用高纯度的试剂配制流动相必要时照紫外分光光度法进行溶剂检查应符合要求水应为新鲜制备的高纯水。凡规定PH值的流动相、应使用精密PH计进行调节。配制好流动相应通过适宜的µm滤膜滤过用前脱气应配制足量的流动相及时待用。供试溶液的配制供试品用规定溶剂配制成供试溶液定量测定时对照品溶液和样品供试溶液均应分别配制份。供试溶液在注入色谱仪前一般应经适宜的µm滤膜滤过。必要时在配制供试溶液前样品需经提取净化。以免对色谱系统产生污染或对色谱干扰。系统适用性试验按各品种项下要指法训练对仪器进行适用性试验即用规定的对照品对仪器进行试验和调整应达到规定的要求或规定分析状态下色谱柱的最小理论板数、分离度、重复性和拖尾因子。色谱柱理论板数(n)在选定的条件下注入供试品溶液或各品种项下规定的内标物质溶液记录色谱图量出供试品主成分或内标物质峰的保留时间tR(以分钟或长度计下同但应取相同单位)和半峰高宽(Wh)按n=(tRWh)计算色谱柱的理论板数。如果测得理论板数低于各品种项下规定的最小理论板数应改变色谱柱的某些条件(如柱长、载体性能、色谱柱充填的优劣等)使理论板数达到要求。分离度定量分析时为便于准确测量要求定量峰与其他峰或内标峰之间有较好的分离度。分离度(R)的计算公式为:(tRtR)R=WW式中tR为相邻两峰中后一峰的保留时间tR为相邻两峰中前一峰的保留时间W及W为此相邻两峰的峰宽。除另有规定外分离度应大于。重复性取各品种项下的对照溶液连续进样次除另有规定外其峰面积测量值的相对标准偏差应不大于。也可按各品种校正因子测定项下配制相当于、和的对照品溶液加入规定量的内标溶液配成种不同浓度的溶液分别进样次计算平均校正因子其相对标准偏差也不大于。拖尾因子为保证测量精度特别当采用峰高法测量时应检查待测峰的的拖尾因子(T)是否符合各品种项下的规定或不同浓度进样的校正因子误差是否符合要求。拖尾因子计算公式为:WhT=d式中Wh为峰高处的峰宽d为峰极大至峰前沿之间的距离。除另有规定外T应在~之间。测定法定量测定时可根据供试品的具体情况采用峰面积法或峰高法。测定杂质含量时须采用峰面积法。内标法加校正因子测定供试品中某个杂质或主成分含量按各品种项下的规定精密称(量)取对照品和内标物质分别配成溶液精密量取各溶液配成校正因子测定用的对照溶液。取一定量注入仪器记录色谱图。测量对照品和内标物质的峰面积或峰高按下式计算校正因子:AsCs校正因子(ƒ)=ARCR式中As为内标物质的峰面积或峰高AR为对照品的峰面积或峰高Cs为内标物质的浓度CR为对照品的浓度。再取各品种项下含有内标物质的供试品溶液注入仪器记录色谱图测量供试品中待测成分(或其杂质)和内标物质的峰面积或峰高按下式计算含量:Ax含量(Cx)=ƒ·AsCs式中Ax为供试品(或其杂质)峰面积或峰高Cx为供试品(或其杂质)的浓度。ƒ、As和Cs的意义同上。当配制校正因子测定用的对照溶液和含有内标物质的供试品溶液使用同一份内标物质溶液时则配制内标物质溶液不必精密称(量)取。外标法测定供试品中某个杂质或主成分含量按各品种项是的规定精密称(量)取对照品和供试品配制成溶液分别精密取一定量注入仪器记录色谱图测量对照品和供试品待测成分的峰面积(或峰高)按下式计算含量:Ax含量(Cx)=CRAR式中各符号意义同上。加校正因子的主成分自身对照法测定杂质含量时可采用加校正因子的主成分自身对照法。在建立方法时按各品种项下的规定精密称(量)取杂质对照品和待测成分对照品各适量配制测定杂质校正因子的溶液进样记录色谱图按上述()法计算杂质的校正因子。此校正因子可直接载入各品种正文中用于校正杂质的实测峰面积。测定杂质含量时按各品种项下规定的杂质限度将供试品溶液稀释成与杂质限度相当的溶液作为对照溶液进样调节仪器灵敏度(以噪音水平可接受为限)或进样量(以柱子不过载为限)使对照溶液的主成分色谱峰高约达满量程的~或其峰面积能准确积分(面积约为通常条件下满量程峰积分值的)。然后取供试品溶液和对照品溶液适量分别这样供试品溶液的记录时间除另有规定外应为主成分保留时间的若干倍测量供试品溶液色谱图上各杂质的峰面积分别乘以相应的校正因子后与对照溶液主成分的峰面积比较依法计算各杂质含量。不加校正因子的主成分自身对照法当没有杂质对照品时可采用不加校正因子的成分自身对照法。同上述()法配制对照溶液并调节仪器灵敏度后取供试品溶液和对照溶液适量分别这样前者的记录时间除另有规定外应为主成分保留时间的若干倍测量供试品溶液色谱图上各杂质的峰面积并与对照溶液主在分的峰面积比较计算杂质含量。若供试品所含的部分杂质未与溶剂峰完全分离则按规定先记录供试品溶液的色谱图Ⅰ再记录等体积纯溶剂的色谱图Ⅱ。色谱图Ⅰ上杂质峰的总面积(包括溶剂峰)减去色谱图Ⅱ上的溶剂峰面积即为总杂质峰的校正面积。然后依法计算。面积归一化法由于峰面积归一化法测定误差大因此本法通常只能用于粗略考察供试品中的杂质含量。除另有规定外一般不宜用于微量杂质的检查。方法是测量各杂质峰的面积和色谱图上除溶剂峰以外的总色谱峰面积计算各峰面积占总峰面积的百分率即得。由于微量注射器不易精确控制进样量当采用外标法测定供试品中某杂质或主成分含量时以定量环进样为好。SOPQM高效液相色谱法标准操作规程SOPQM高效液相色谱法标准操作规程PAGE第页共页

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