422 细菌内毒素检查法供试品干扰试验标准操作规程

SOP-QM-422-00 执行日期： 年 月 日 题目 细菌内毒素检查供试品干扰试验标准操作规程 起草： 年 月 日 部门审核： 年 月 日 质量部审查： 年 月 日 批准： 年 月 日 发放部门 质量部 目的：规范细菌内毒素检查供试品干扰试验操作法 范围：原辅料、成品 职责 岗位职责下载项目部各岗位职责下载项目部各岗位职责下载建筑公司岗位职责下载社工督导职责.docx ：检验室对本规程的实施负责 正文： 1. 供试品细菌内毒素限值（L）的确定 1.1 按供试品标准规定限值。 1.2 尚无标准规定的供试品内毒素限值，一般按以下公式确定。 L=K/M 式中：L为供试品的细菌内毒素限值，以EU/ml、EU/mg、EU/U 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 示。 K为按规定的给药途径，人用每公斤体重每小时最大可接受的内毒素剂量。以EU/㎏/hr表示。注射剂，K=5EU/㎏/hr，其中放射性药品注射剂K=2.5EU/㎏/hr，鞘内用药品，K=0.02EU/㎏/hr。 M为人用每公斤体重每小时最大剂量，以ml/kg/hr、mg/kg/hr、U/kg/hr表示，中国人按人均体重60kg计算，注射时间小于1小时，按1小时计。 2. 供试品最大有效稀释倍数的计算： MVD=C·L/λ L为供试品的细菌内毒素限值，λ为测试用鲎试剂的灵敏度标示值，C表示供试品的浓度，或供试品复溶所得溶液的浓度。当L以EU/ml表示时C为1.0ml/ml，当L以EU/mg或EU/u表示时，C为mg/ml或u/ml。如需计算供试品的测试浓度C，可设MVD为1。 3. 内毒素标准溶液的制备 3.1取细菌内毒素国家标准品（NSE）或内毒素工作标准品（WSE）一支，轻弹瓶壁，使粉末落入瓶底，再用砂轮在瓶颈上部轻轻划痕，75%酒精棉球擦拭后启开，防止玻璃屑落入瓶内。 3.2按标准品使用说明 书 关于书的成语关于读书的排比句社区图书漂流公约怎么写关于读书的小报汉书pdf 用移液管加入规定量的细菌内毒素检查用水（BET）溶解其内容物，用封口膜将瓶口封严。置旋涡混合器上混合15分钟，然后制备成所需浓度的细菌内毒素标准溶液即2.0λ、1.0λ、0.5λ、0.25λ（λ为所复核鲎试剂的标示灵敏度），每稀释一步均应在旋涡混合器上混合30秒。若为NSE，可按其使用说明书将其稀释至规定浓度后分装并保存 4. 含供试品的内毒素溶液的制备 4.1 根据供试品的限值（L）和使用鲎试剂的灵敏度（λ）计算供试品测试浓度（C）或MVD。 4.2 将供试品稀释，其稀释倍数不应MVD，并通过预试验确定正式试验供试品测试浓度。 4.3 在制备内毒素标准溶液的同时用未检出内毒素的供试品溶液或其不超过最大有效稀释倍数的稀释液将WSE以相同方法制备所需浓度的含供试品细菌内毒素溶液（2.0λ、1.0λ、0.5λ、0.25λ）。 5.鲎试剂的准备 5.1在制备内毒素标准对照溶液和含供试品的内毒素溶液的同时，取0.1ml/支的鲎试剂36支轻弹瓶壁使粉末落入瓶底，用砂轮在瓶颈轻轻划痕，75%酒精棉球擦拭后启开，防止玻璃屑落入瓶内，加入0.1mlBET水复溶，使内容物充分溶解，避免产生气泡。 5.2若鲎试剂的 规格 视频线规格配置磁共振要求常用水泵型号参数扭矩规格钢结构技术规格书 不是0.1ml/支时，按标示量加入水复溶，将复溶后的鲎试 剂混匀后每0.1ml分配到10×75mm凝集管中，要求至少分配36管备用。 6.加样 6.1将准备好的鲎试剂18支（管）放在试管架上，排成5列，其中4支（管）4列分别加入2.0λ、1.0λ、0.5λ、0.25λ的内毒素标准对照溶液：2支（管）1列加入BET水。 6.2将准备好的鲎试剂18支（管）放在试管架上，排成5列，其中4支（管）4列分别加入2.0λ、1.0λ、0.5λ、0.25λ的含供试品的内毒素溶液：2支（管）1列加入供试品溶液。 6.3内毒素标准溶液和BET水、含供试品的内毒素溶液和供试品溶液的加样量均为0.1ml。 7.加样结束后，用封口膜封口，轻轻混匀，避免产生气泡，连同试管架放入恒温水浴或适宜恒温器中，试管架保持水平状态保温，在37±1℃、60±2分钟后观察结果。 8.在进行正式干扰试验前可进行预试验，用L和λ（通常用0.5～0.03EU/ml）计算出C的范围，以1:2的浓度比例，制备含2λ和0.25λ的系列浓度供试品溶液，每一浓度取2支（管）鲎试剂进行试验，判定无干扰浓度进行正式干扰试验。 9.实验结果计算 如标准溶液最大浓度2.0λ4管均为阳性，最低浓度0.25λ4管均为阴性，阴性对照阴性，按下式计算用BET水制成的内毒素标准溶液的反应终点浓度的几何平均值（ES）和用供试品溶液或稀释液制成的内毒素溶液的反应终点浓度的几何平均值（Et）。 Es=lgeq \o(\s\up 6(-　),\s\do 2(　)) eq \o(\s\up 6(1　),\s\do 2(　))（∑ Xs/4） Et=lgeq \o(\s\up 6(-　),\s\do 2(　)) eq \o(\s\up 6(1　),\s\do 2(　))（∑ Xt/4） 式中Xs 、Xt分别为BET水和供试品溶液或稀释液制成的内毒素溶液的反应终点浓度的对数值（lg）。 10.结果判断 ——当Es在0.5λ～2.0λ（包括0.5λ和2.0λ）时，且当ET在0.5 Es～2.0 Es（包括0.5 Es和 2.0 Es）时，则认为供试品在该浓度下不干扰实验，否则使用更灵敏的鲎试剂，对供试品进行更大倍数稀释，这是排除干扰因素的简单有效的方法（也可采用过滤法，干扰因素去除法等其他方法）。建立新品种细菌内毒素检查方法时，每个厂家至少取三个批号（不包括亚批）的供试品，用两个以上生产厂家的鲎试剂进行干扰试验。若各批供试品干扰实验结果差别较大时应考虑供试品内毒素的影响。若鲎试剂的来源、供试品的配方或生产工艺有变化时，须重复进行干扰实验。 11.结果计算和判断举例 设所用鲎试剂的标示灵敏度为0.125EU/ ml，供试品为××注射液（1 4）。 内毒素浓度 EU/ ml 0.25 0.125 0.0625 0.03125 N 反应终点浓度 1 2 内毒素标准溶液 3 4 + + - - - 0.0625 + + - - - 0.0625 + + - - 0.0625 + + - - 0.0625 1 2 含供试品的内毒素溶液 3 4 + - - - - 0.25 + - - - - 0.25 + - - - 0.25 + + - - 0.125 Es＝lgeq \o(\s\up 6(-　),\s\do 2(　)) eq \o(\s\up 6(1　),\s\do 2(　))（∑ Xs/4） ＝lgeq \o(\s\up 6(-　),\s\do 2(　)) eq \o(\s\up 6(1　),\s\do 2(　))[（lg0.0625+lg0.0625+lg0.0625+lg0.0625）/4] ＝0.0625（EU/ ml） Et＝lgeq \o(\s\up 6(-　),\s\do 2(　)) eq \o(\s\up 6(1　),\s\do 2(　))（∑ Xt/4） ＝lgeq \o(\s\up 6(-　),\s\do 2(　)) eq \o(\s\up 6(1　),\s\do 2(　))[（lg0.25+lg0.25+lg0.25+lg0.125）/4] ＝0.210（EU/ml） 虽然Es在0.5λ～2.0λ范围内，但Et不在0.5λ～2.0λ范围内，因此该供试品在1→4浓度下有干扰，需进行适当处理后重复试验，或对供试品进行更大倍数稀释后进行干扰试验。 SOP-QM-422-00 细菌内毒素检查供试品干扰试验 SOP-QM-422-00 细菌内毒素检查供试品干扰试验标准操作规程 第2页 共3页 第3页 共3页