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422 细菌内毒素检查法供试品干扰试验标准操作规程.doc

422 细菌内毒素检查法供试品干扰试验标准操作规程

lijb2007
2018-09-07 0人阅读 0 0 0 暂无简介 举报

简介:本文档为《422 细菌内毒素检查法供试品干扰试验标准操作规程doc》,可适用于医药卫生领域

SOPQM执行日期:年月日题目细菌内毒素检查供试品干扰试验标准操作规程起草:年月日部门审核:年月日质量部审查:年月日批准:年月日发放部门质量部目的:规范细菌内毒素检查供试品干扰试验操作法范围:原辅料、成品职责:检验室对本规程的实施负责正文:供试品细菌内毒素限值(L)的确定按供试品标准规定限值。尚无标准规定的供试品内毒素限值一般按以下公式确定。L=KM式中:L为供试品的细菌内毒素限值以EUml、EUmg、EUU表示。K为按规定的给药途径人用每公斤体重每小时最大可接受的内毒素剂量。以EU㎏hr表示。注射剂K=EU㎏hr其中放射性药品注射剂K=EU㎏hr鞘内用药品K=EU㎏hr。M为人用每公斤体重每小时最大剂量以mlkghr、mgkghr、Ukghr表示中国人按人均体重kg计算注射时间小于小时按小时计。供试品最大有效稀释倍数的计算:MVD=C·LλL为供试品的细菌内毒素限值λ为测试用鲎试剂的灵敏度标示值C表示供试品的浓度或供试品复溶所得溶液的浓度。当L以EUml表示时C为mlml当L以EUmg或EUu表示时C为mgml或uml。如需计算供试品的测试浓度C可设MVD为。内毒素标准溶液的制备取细菌内毒素国家标准品(NSE)或内毒素工作标准品(WSE)一支轻弹瓶壁使粉末落入瓶底再用砂轮在瓶颈上部轻轻划痕酒精棉球擦拭后启开防止玻璃屑落入瓶内。按标准品使用说明书用移液管加入规定量的细菌内毒素检查用水(BET)溶解其内容物用封口膜将瓶口封严。置旋涡混合器上混合分钟然后制备成所需浓度的细菌内毒素标准溶液即λ、λ、λ、λ(λ为所复核鲎试剂的标示灵敏度)每稀释一步均应在旋涡混合器上混合秒。若为NSE可按其使用说明书将其稀释至规定浓度后分装并保存含供试品的内毒素溶液的制备根据供试品的限值(L)和使用鲎试剂的灵敏度(λ)计算供试品测试浓度(C)或MVD。将供试品稀释其稀释倍数不应MVD并通过预试验确定正式试验供试品测试浓度。在制备内毒素标准溶液的同时用未检出内毒素的供试品溶液或其不超过最大有效稀释倍数的稀释液将WSE以相同方法制备所需浓度的含供试品细菌内毒素溶液(λ、λ、λ、λ)。鲎试剂的准备在制备内毒素标准对照溶液和含供试品的内毒素溶液的同时取ml支的鲎试剂支轻弹瓶壁使粉末落入瓶底用砂轮在瓶颈轻轻划痕酒精棉球擦拭后启开防止玻璃屑落入瓶内加入mlBET水复溶使内容物充分溶解避免产生气泡。若鲎试剂的规格不是ml支时按标示量加入水复溶将复溶后的鲎试剂混匀后每ml分配到×mm凝集管中要求至少分配管备用。加样将准备好的鲎试剂支(管)放在试管架上排成列其中支(管)列分别加入λ、λ、λ、λ的内毒素标准对照溶液:支(管)列加入BET水。将准备好的鲎试剂支(管)放在试管架上排成列其中支(管)列分别加入λ、λ、λ、λ的含供试品的内毒素溶液:支(管)列加入供试品溶液。内毒素标准溶液和BET水、含供试品的内毒素溶液和供试品溶液的加样量均为ml。加样结束后用封口膜封口轻轻混匀避免产生气泡连同试管架放入恒温水浴或适宜恒温器中试管架保持水平状态保温在±℃、±分钟后观察结果。在进行正式干扰试验前可进行预试验用L和λ(通常用~EUml)计算出C的范围以:的浓度比例制备含λ和λ的系列浓度供试品溶液每一浓度取支(管)鲎试剂进行试验判定无干扰浓度进行正式干扰试验。实验结果计算如标准溶液最大浓度λ管均为阳性最低浓度λ管均为阴性阴性对照阴性按下式计算用BET水制成的内毒素标准溶液的反应终点浓度的几何平均值(ES)和用供试品溶液或稀释液制成的内毒素溶液的反应终点浓度的几何平均值(Et)。Es=lgeqo(sup( ),sdo( ))eqo(sup( ),sdo( ))(∑Xs)Et=lgeqo(sup( ),sdo( ))eqo(sup( ),sdo( ))(∑Xt)式中Xs、Xt分别为BET水和供试品溶液或稀释液制成的内毒素溶液的反应终点浓度的对数值(lg)。结果判断当Es在λ~λ(包括λ和λ)时且当ET在Es~Es(包括Es和Es)时则认为供试品在该浓度下不干扰实验否则使用更灵敏的鲎试剂对供试品进行更大倍数稀释这是排除干扰因素的简单有效的方法(也可采用过滤法干扰因素去除法等其他方法)。建立新品种细菌内毒素检查方法时每个厂家至少取三个批号(不包括亚批)的供试品用两个以上生产厂家的鲎试剂进行干扰试验。若各批供试品干扰实验结果差别较大时应考虑供试品内毒素的影响。若鲎试剂的来源、供试品的配方或生产工艺有变化时须重复进行干扰实验。结果计算和判断举例设所用鲎试剂的标示灵敏度为EUml供试品为××注射液()。内毒素浓度EUmlN反应终点浓度内毒素标准溶液含供试品的内毒素溶液Es=lgeqo(sup( ),sdo( ))eqo(sup( ),sdo( ))(∑Xs)=lgeqo(sup( ),sdo( ))eqo(sup( ),sdo( ))(lglglglg)=(EUml)Et=lgeqo(sup( ),sdo( ))eqo(sup( ),sdo( ))(∑Xt)=lgeqo(sup( ),sdo( ))eqo(sup( ),sdo( ))(lglglglg)=(EUml)虽然Es在λ~λ范围内但Et不在λ~λ范围内因此该供试品在→浓度下有干扰需进行适当处理后重复试验或对供试品进行更大倍数稀释后进行干扰试验。SOPQM细菌内毒素检查供试品干扰试验SOPQM细菌内毒素检查供试品干扰试验标准操作规程第页共页第页共页

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