注射用重组人干扰素(2b (酵母)
Zhusheyong Chongzu Ren Ganraosu (2b (Jiaomu)
Recombinant Human Interferon (2b for Injection （Yeast）
本品系由高效
表
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达人干扰素(2b基因的酿酒酵母菌，经发酵、分离和高度纯化后冻干制成。含适宜稳定剂，不含防腐剂和抗生素。
1．基本要求
生产和检定用设施、原料及辅料、水、器具、动物等应符合 “凡例”的有关要求。
2．制造
2.1 工程菌菌种
2.1.1 名称及来源
重组人干扰素(2b工程菌株系由带有人干扰素(2b基因的重组质粒转化的酿酒酵母菌菌株。
2.1.2 种子批的建立
应符合“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”的规定。
2.1.3 菌种检定
主种子批和工作种子批的菌种应进行以下各项全面检定。
2.1.3.1 划种SD琼脂平板
应呈典型的酿酒酵母菌集落形态，无其他杂菌生长。
2.1.3.2 酵母菌形态
在光学显微镜下观察，应为典型的酵母菌形态。
2.1.3.3 干扰素表达量
在摇床中培养，应不低于原始菌种的表达量。
2.1.3.4 表达的干扰素型别
应用抗(2b型干扰素参考血清做中和试验，证明型别无误。
2.1.3.5 干扰素基因稳定性检查
涂SD琼脂平板，挑选至少50个克隆，用PCR
检测
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干扰素基因，阳性率应不低于95%。
2.2 原液
2.2.1 种子液制备
将检定合格的工作种子批菌种接种于适宜培养基中培养，供发酵罐接种用。
2.2.2 发酵用培养基
采用适宜的不含任何抗生素的培养基。
2.2.3 种子液接种及发酵培养
在灭菌培养基中接种适量种子液。在适宜的温度下进行发酵，应采用经批准的发酵工艺，并确定相应的发酵条件，如温度、pH值、溶氧、补料、罐压、通气量、发酵时间等。
2.2.4 发酵液处理
用适宜的
方法
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收集处理菌体。
2.2.5 初步纯化
采用经批准的纯化工艺进行初步纯化，使其纯度达到规定的要求。
2.2.6 高度纯化
经初步纯化后，采用经批准的工艺进行高度纯化，使其达到3.1项要求，即为干扰素原液。加入适宜稳定剂,除菌过滤后保存于适宜温度，并规定其效期。
2.2.7 原液检定
按3.1项进行。
2.3 半成品
2.3.1 配制与除菌
2.3.1.1 稀释液配制
按经批准的配方配制稀释液，配制后应立即用于稀释。
2.3.1.2 稀释与除菌
将检定合格的含稳定剂的干扰素原液用2.3.1.1项稀释液稀释至所需浓度。除菌过滤后即为半成品，于2-8℃保存。
2.3.2 半成品检定
按3.2项进行。
2.4成品
2.4.1 分批
应符合 “生物制品分批规程”规定。
2.4.2 分装及冻干
应符合 “生物制品分装和冻干规程”规定。
2.4.3 规格
应为经批准的规格。
2.4.4 包装
应符合 “生物制品包装规程”规定。.
3 检定
3.1 原液检定
3.1.1 生物学活性测定
依法测定（附录X C）。
3.1.2 蛋白质含量
依法测定（附录VI B第二法）。
3.1.3 比活性
为生物学活性与蛋白质含量之比，每1 mg蛋白质应不低于1.0×108IU。
3.1.4 纯度
3.1.4.1 电泳法
依法测定（附录IV C）。用非还原型SDS-聚丙烯酰胺电泳法，分离胶胶浓度为15%，加样量应不低于10μg(考马斯亮蓝R250染色法)或 5(g(银染法)。经扫描仪扫描，纯度应不低于95.0%。
3.1.4.2 高效液相色谱法
依法测定（附录III B）。色谱柱以适合分离分子量为5-60kD蛋白质的色谱用凝胶为填充剂；流动相为0.1mol/L磷酸盐—0.1mol/L氯化钠缓冲液，pH7.0；上样量应不低于20μg，于波长280nm处检测，以干扰素色谱峰计算理论塔板数，应不低于1000。按面积归一化法计算，干扰素主峰面积应不低于总面积的95.0%。
3.1.5 分子量
依法测定（附录IV C）。用还原型SDS-聚丙烯酰胺电泳法，分离胶胶浓度为15%，加样量应不低于1.0(g，分子质量应为19.2kD±1.92kD。
3.1.6 外源性DNA残留量
每1支应不高于10ng（附录IX B）。
3.1.7 宿主菌蛋白残留量
应不高于总蛋白质的0.05%（附录IX E）。
3.1.8 细菌内毒素检查
每1支应小于10EU（附录XII E 凝胶限量试验）。
3.1.9 等电点
主区带应为5.7～6.7, 供试品的等电点与对照品的等电点图谱一致（附录IV D）。
3.1.10 紫外光谱扫描
用水或生理氯化钠溶液将供试品稀释至约100μg/ml～500μg/ml，在光路1cm、波长230nm～360nm下进行扫描，最大吸收峰波长应为 278nm±3nm（附录II A）。
3.1.11 肽图（至少每半年测定一次）
依法测定（附录VIII E），应与对照品图形一致。
3.1.12 N-末端氨基酸序列(至少每年测定一次)
用氨基酸序列分析仪测定，N-末端序列应为：
Cys-Asp-Leu-Pro-Gln-Thr-His-Ser-Leu-Gly-Ser-Arg-Arg-Thr-Leu。
3.2 半成品检定
3.2.1 细菌内毒素检查
每1次人用剂量应小于10EU每300万IU应小于10EU,300万IU/支以上规格的，每支应小于10EU。（附录XII E 凝胶限量试验）。
3.2.2 无菌检查
依法检查（附录XII A ），应符合规定。
3.3 成品检定
除水分、装量差异测定外，应按标示量加入灭菌注射用水，复溶后进行其余项目的检定。
3.3.1 鉴别试验
按免疫印迹法（附录VIII A）或免疫斑点法（附录VIII B）测定，应为阳性。
3.3.2 物理检查
3.3.2.1外观
应为白色或微黄色疏松体，按标示量加入灭菌注射用水后应迅速复溶为澄明液体。
3.3.2.2可见异物
依法检查（Ⅴ B），应符合规定。
3.3.2.3 装量差异
按附录ⅠA中装量差异项进行，应符合规定。
3.3.3 化学检定
3.3.3.1 水分
应不高于3.0%（附录VII D）。
3.3.3.2 pH值
应为6.5～7.5（附录V A ）。
3.3.3.3渗透压摩尔浓度
依法测定（附录V H），应符合批准的要求。
3.3.4 生物学活性测定
应为标示量的80%～150%（附录X C）。
3.3.5 无菌检查
依法检查（附录XII A），应符合规定。
3.3.6 细菌内毒素检查
每1支应小于10EU（附录XII E凝胶限量试验）。
3.3.7 异常毒性检查
依法检查（附录XII F 小鼠试验法），应符合规定。
4 保存、运输及有效期
于2～8℃避光保存和运输。自生产分装之日起，按批准的有效期执行。
5 使用说明
应符合“生物制品包装规程”规定和批准的
内容
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。
浙公网安备 33021202002483