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注射用重组人白介素-2.doc

注射用重组人白介素-2

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2018-09-08 0人阅读 举报 0 0 0 暂无简介

简介:本文档为《注射用重组人白介素-2doc》,可适用于医药卫生领域

注射用重组人白介素ZhusheyongChongzuRenBaijiesuRecombinantHumanInterleukinforInjection本品系由高效表达人白细胞介素(简称人白介素)基因的大肠杆菌经发酵、分离和高度纯化后冻干制成。含适宜稳定剂不含防腐剂和抗生素。基本要求生产和检定用设施、原料及辅料、水、器具、动物等应符合“凡例”的要求。制造工程菌菌种名称及来源重组人白介素工程菌株系由带有人白介素基因的重组质粒转化的大肠杆菌菌株。种子批的建立应符合“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”的规定。菌种检定主种子批和工作种子批的菌种应进行以下各项全面检定。划种LB琼脂平板应呈典型大肠杆菌集落形态无其他杂菌生长。染色镜检应为典型的革兰阴性杆菌。对抗生素的抗性应与原始菌种相符。电镜检查(工作种子批可免做)应为典型大肠杆菌形态无支原体、病毒样颗粒及其他微生物污染。生化反应应符合大肠杆菌生物学性状。人白介素表达量在摇床中培养应不低于原始菌种的表达量。质粒检查该质粒的酶切图谱应与原始重组质粒相符。目的基因核苷酸序列检查(工作种子批可免做)目的基因核苷酸序列应与批准序列相符。原液种子液制备将检定合格的工作种子批菌种接种于适宜的培养基(可含适量抗生素)中培养供发酵罐接种用。发酵用培养基采用适宜的不含任何抗生素的培养基。种子液接种及发酵培养在灭菌培养基中接种适量种子液。在适宜的温度下进行发酵应根据经批准的发酵工艺进行并确定相应的发酵条件如温度、pH值、溶氧、补料、发酵时间等。发酵液应定期进行质粒丢失率检查(附录ⅨG)。发酵液处理用适宜的方法收集处理菌体。初步纯化采用经批准的纯化工艺进行初步纯化使其纯度达到规定的要求。高度纯化经初步纯化后采用经批准的工艺进行高度纯化使其达到项要求即为人白介素原液。加入适宜稳定剂,除菌过滤后保存于适宜温度并规定其有效期。原液检定按项进行。半成品配制与除菌稀释液配制按经批准的配方配制稀释液。配制后应立即用于稀释。稀释与除菌将检定合格加稳定剂的人白介素原液用项稀释液稀释至所需浓度。除菌过滤后即为半成品保存于~℃。半成品检定按项进行。成品分批应符合“生物制品分批规程”规定。分装及冻干应符合“生物制品分装和冻干规程”规定。规格应为经批准的规格。包装应符合“生物制品包装规程”规定。检定原液检定生物学活性依法测定(附录ⅩD)。蛋白质含量依法测定(附录ⅥB第二法)。比活性为生物学活性与蛋白质含量之比每mg蛋白质应不低于×IU。纯度电泳法依法测定(附录ⅣC)。用非还原型SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳法分离胶胶浓度为加样量应不低于μg(考马斯亮蓝R染色法)或μg(银染法)。经扫描仪扫描纯度应不低于。高效液相色谱法依法测定(附录ⅢB)。色谱柱以适合分离分子质量为~kD蛋白质的色谱用凝胶为填充剂流动相为molL磷酸盐molL氯化钠缓冲液pH及适宜的表面活性剂上样量不低于μg于波长nm处检测以人白介素色谱峰计算理论板数应不低于。按面积归一化法计算人白介素主峰面积应不低于总面积的。分子量依法测定(附录ⅣC)。用还原型SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳法分离胶胶浓度为加样量应不低于μg制品的分子质量应为kD±kD。外源性DNA残留量每支次人用剂量应不高于ng(附录ⅨB)。宿主菌蛋白残留量应不高于总蛋白质的(附录ⅨC)。残余抗生素活性依法测定(附录ⅨA)不应含有残余氨苄西林或其他抗生素活性。如制品中含有SDS应将SDS浓度至少稀释至进行测定。细菌内毒素检查每万IU应小于EU(附录ⅫE凝胶限量试验)。如制品中含有SDS应将SDS浓度至少稀释至进行测定。等电点主区带应为~,供试品的等电点与对照品的等电点图谱一致。(附录ⅣD)。紫外光谱扫描用水或生理氯化钠溶液将供试品稀释至约μgml~μgml在光路cm、波长nm~nm下进行扫描最大吸收峰波长应为nm±nm(附录ⅡA)。肽图(至少每年测定次)依法测定(附录ⅧE)应与对照品图形一致。N末端氨基酸序列(至少每年测定次)用氨基酸序列分析仪测定N末端序列应为:(Met)AlaProThrSerSerSerThrLysLysThrGlnLeuGlnLeuGlu。半成品检定细菌内毒素检查每万IU应小于EU(附录ⅫE凝胶限量试验)。万IU支以上规格的每支应小于EU。如制品中含有SDS应将SDS浓度至少稀释至进行测定。无菌检查依法检查(附录ⅫA)应符合规定。成品检定除水分测定外应按标示量加入灭菌注射用水复溶后进行其余项目的检定。鉴别试验按免疫印迹法(附录ⅧA)或免疫斑点法(附录ⅧB)测定应为阳性。物理检查外观应为白色或微黄色疏松体加入标示量注射用水后应迅速复溶为澄明液体。可见异物依法检查(附录ⅤB)应符合规定。装量差异按附录ⅠA中装量差异项进行应符合规定。化学检定水分应不高于(附录ⅦD)。pH值应为~(附录ⅤA)。如不含SDS应为~。渗透压摩尔浓度依法测定(附录VH)应符合批准的要求。生物学活性应为标示量的~(附录ⅩD)。残余抗生素活性依法测定(附录ⅨA)不应含有残余氨苄西林或其他抗生素活性。如制品中含有SDS应将SDS浓度至少稀释至进行测定。无菌检查依法检查(附录ⅫA)应符合规定。细菌内毒素检查每支次人用剂量应小于EU(附录ⅫE凝胶限量试验)。如制品中含有SDS应将SDS浓度至少稀释至进行测定。异常毒性检查依法检查(附录ⅫF小鼠试验法)应符合规定。乙腈残留量如工艺中采用乙腈则照气相色谱法(附录ⅢC)进行色谱柱采用石英毛细管柱柱温℃汽化室温度℃检测器温度℃载气为氮气流速为每分钟ml,用水稀释乙腈标准溶液使其浓度为%分别吸取ml上述标准溶液及供试品溶液顶空进样μl通过比较标准溶液和供试品溶液的峰面积判定供试品溶液乙腈含量。乙腈残留量应不高于。SDS含量(待定)保存、运输及有效期于~℃避光保存和运输。自生产分装之日起按批准的有效期执行。使用说明应符合“生物制品包装规程”规定和批准的内容。

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