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蚕豆病.ppt

蚕豆病

烟雨梦兮
2018-10-28 0人阅读 举报 0 0 暂无简介

简介:本文档为《蚕豆病ppt》,可适用于医药卫生领域

级本科分子生物学实验设计案例:患儿男性岁因面色苍白伴血尿天入院。天前食用新鲜蚕豆后今日出现恶心、呕吐、排尿呈酱油样色面色苍白。据家长反映患者的姐姐也曾发生过类似情况。体格检查:体温℃脉搏次分呼吸次分血压mmHg呼吸急促神清萎靡面色苍白皮肤及巩膜黄染体型较同龄人瘦小。心、肺未及异常肝、脾未触及双肾区无叩击痛神经系统检查未及异常。实验室检查:红细胞×L血红蛋白gL血清总胆红素µmolL结合胆红素µmolL未结合胆红素µmolL尿蛋白()潜血()尿胆红素(-)尿胆素原()尿液镜下未见红细胞。阅读下列案例根据要求回答问题并设计实验进一步明确诊断。一、根据上述患儿的临床表现和实验室检查初步判断患儿是何种疾病蚕豆病恶心、呕吐、面色苍白皮肤及巩膜黄染红细胞×L血红蛋白gL血清总胆红素µmolL尿蛋白()尿胆红素(-)尿胆素原()尿液镜下未见红细胞黄疸红细胞膜不完整已破裂红细胞含量少含量明显增加血红蛋白量减少排尿呈酱油样色游离胆红素增加溶血性黄疸蚕豆病肠肝循环增多蚕豆病简介蚕豆病是一种磷酸葡萄糖脱氢酶(GPD)缺乏所导致的疾病表现为在遗传性葡萄糖磷酸脱氢酶(GPD)缺陷的情况下食用新鲜蚕豆后突然发生的急性血管内溶血。易发人群多见于儿童男性患者约占以上。临床表现早期有恶寒、微热、头昏、倦怠无力、食欲缺乏、腹痛继之出现黄疸、贫血、血红蛋白尿尿呈酱油色此后体温升高倦怠乏力加重可持续日左右。与溶血性贫血出现的同时出现呕吐、腹泻和腹痛加剧肝脏肿大肝功能异常约患者脾大。严重病例可见昏迷、惊厥和急性肾衰竭若急救不及时常于~日内死亡。二、设计实验进一步明确诊断红细胞葡萄糖磷酸脱氢酶活性测定(紫外法)(一)实验器材和试剂实验器材恒温水循环紫外分光光度计可见分光光度计离心机。试剂()molLTrisHClMgCl缓冲溶液(pH):称取Trisg,MgCl·HOg,加入mL蒸馏水溶解用HCl调pH至然后加入蒸馏水至mL。()mmolL烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP+):称取NADP+mg溶于mL蒸馏水中。℃可保存天左右。()mmolL葡萄糖磷酸二钠(GP-Na):称取mgGP-Na·HO溶于mL蒸馏水中。℃可保存天左右。()溶血剂:取巯基乙醇mLEDTAmLmmolLNADP+mL加蒸馏水至总体积mL。()血红蛋白氧化剂(Drabkin试剂):称取KFe(CN)gKCNgNaHCOg加蒸馏水至mL置棕色瓶内避光保存可保存天。()NaClACD抗凝剂。(二)实验操作流程、洗涤红细胞取静脉血mL放入含mLACD抗凝剂的试管中混匀。吸取mL抗凝血放入试管中加入mL预冷的生理盐水轻轻摇匀rmin离心min,倾去上清重复三次。、溶血液的制备向红细胞沉淀中加入溶血剂mL震荡min℃放置min以上。、NADPH的测定取石英比色杯两只标为“测定”及“空白”按下表操作:试剂体积蒸馏水(uL)molLTrisHClMgCl缓冲溶液(uL)mmolLGPNa(uL)mmolLNADP(uL)混匀后放入带恒温水循环(℃)的紫外分光光度计中预热min然后在“测定”中加入溶血液uL,“空白”中加入溶血剂uL混匀以“空白”调“”,min后开始测nm吸光度(A)每min纪录吸光度一次至min止比较每minA值的变化情况若相近则表明酶促反应平稳。以minA值的变化(△A)计算NADPH的产量。溶血液中血红蛋白含量的测定取试管一支按下表操作:试剂体积Drabkin(mL)溶血液(mL)混匀室温放置min以Drabkin试剂调零读取nm的吸光度(A)。(三)注意事项洗涤红细胞时禁止剧烈震荡避免溶血。测定NADPH时读取吸光度的时间要准确。(四)结果分析NADPH产量的计算NADPH在nm处其每微摩尔的吸光系数(ε)为故min内NADPH的产量计算公式为:NADPH产量(μmol)=血红蛋白含量的计算血红蛋白氧化为高铁血红蛋白以后在nm处其毫摩尔吸光细数(ε)为故溶血液中血红蛋白的含量计算公式为:血红蛋白含量(mmol)=GPD比活性(UgHb)的计算GPD比活性单位(UgHb)==【参考范围】正常值:大于UgHb三、从生化代谢解释患儿的临床表现和实验室检查结果红细胞膜的破坏胆色素代谢异常红细胞膜的破坏葡萄糖磷酸戊糖途径葡萄糖–磷酸葡萄糖–磷酸核糖NADPHH磷酸化–磷酸核糖磷酸戊糖途径NADPHH–磷酸核糖NADPHH–磷酸核糖NADPHH–磷酸核糖NADPHHNADPH维持GSH(谷胱甘肽)的正常含量和还原状态GPD(–磷酸葡萄糖脱氢酶)起关键作用红细胞膜的破坏还原型谷胱甘肽体内重要的抗氧化剂保护红细胞膜蛋白的完整性单核吞噬细胞识别吞噬血红蛋白珠蛋白氧化破坏红细胞氧化破坏红细胞单核吞噬细胞识别吞噬氧化破坏红细胞血红蛋白单核吞噬细胞识别吞噬氧化破坏红细胞珠蛋白血红蛋白单核吞噬细胞识别吞噬氧化破坏红细胞血红素珠蛋白血红蛋白单核吞噬细胞识别吞噬氧化破坏红细胞单核吞噬细胞识别吞噬血红蛋白珠蛋白氧化破坏红细胞氧化破坏红细胞单核吞噬细胞识别吞噬红细胞血红蛋白单核吞噬细胞识别吞噬红细胞珠蛋白血红蛋白单核吞噬细胞识别吞噬红细胞血红素珠蛋白血红蛋白单核吞噬细胞识别吞噬红细胞胆色素代谢异常血红素运送到肝与血清蛋白结合游离胆红素结合胆红素排出体外进入肠道胆素原胆素肠肝循环胆红素↑扩散进入组织组织黄染黄疸排尿呈酱油样色↑↑↑↑↑↑↑↑溶血性贫血面色苍白↑说明为一个版本为另一个版本参考一下看哪个你比较容易理解然后就用哪个实验室检查GPD磷酸戊糖途径NADPH磷酸戊糖维持谷胱甘肽的还原性核酸生物合成原料红细胞糖酵解通路二磷酸甘油酸旁路磷酸戊糖途径NADPH唯一 谷胱甘肽阻止氧化血红蛋白从而保护红细胞膜的完整性如若缺乏此时的红细胞易于破裂Hb具有携氧能力MHb高铁血红蛋白Fe不具有携氧能力NADPH高铁血红蛋白还原酶GSHMHbHb胆红素铁卟啉类化合物的降解产物以上来自衰老红细胞破坏所释放的血红蛋白的分解自由通过生物膜产生毒性作用血红蛋白珠蛋白AA再利用血红素胆红素胆红素分类GPD缺乏NADPH严重缺乏谷胱甘肽难以保持还原状态NADPH高铁血红蛋白还原酶活性低红细胞膜完整性破坏红细胞裂解血红蛋白大量溢出胆红素生成量增加Hb大量氧化成MHbHb含量减少黄疸皮肤巩膜及黏膜等组织黄染恶心呕吐全身无力面色苍白溶血性黄疸由于红细胞的大量破坏在单核吞噬细胞系统产生胆红素过多超过了肝细胞的摄取转化和排泄胆红素的能力造成血液中未结合胆红素浓度显著增高所致。高未结合胆红素血症由于肝对胆红素的摄取转化排泄增多过多的胆红素进入胆道系统肠肝循环增多使得尿中的尿素原和尿胆素含量增多粪胆素与粪胆原也增加。溶血性黄疸大量红细胞破裂血中未结合胆红素增加肠肝循环增多大量血红蛋白溢出尿蛋白()潜血()尿胆红素(-)尿胆素原()尿液镜下未见红细胞恶心、呕吐、面色苍白排尿呈酱油样色粪胆素原红细胞大量破裂四、要想探讨该病发生的分子基础可以用哪些技术检测什么目的基因?(选答)基因结构分析法我组讨论认为:要想探讨该病发生的分子基础需要对目的基因进行基因结构分析即DNA序列检测DNA序列测定方法直接法间接法:对于未知片段或片段过长用几种方法(RFLPPCRRFLPSSCP)来粗略的估计待分析基因的一级结构是否与对照基因相同双脱氧末端终止法(Sanger法)化学裂解法(MaxamGilbert法)DNA的自动化测序DNA序列测定方法DNA链的方向是→交替的磷酸基团和戊糖构成了DNA的骨架(backbone)。碱基´,´磷酸二酯键碱基碱基碱基´羟基´磷酸基团核酸方向双脱氧末端终止法(Sanger法)Sanger法是根据双脱氧核苷三磷酸(ddNTP)在DNA合成过程中不能形成’,’磷酸二酯键而导致链延伸终止的原理利用四种ddNTP代替部分脱氧核苷酸(dNTP)作为底物进行DNA合成从而获得在不同部位终止反应的大小不同的DNA链结合高分辨率变性聚丙烯凝胶电泳分离就可以对DNA序列进行分析。TAATCTGCAGGC’’加入引物PdATP,dGTP,dTTPDNA聚合酶’TAATCTGCAGGC’’’primerddGTPddATPddTTPddCTPATTAGATTAGACGAATTAATTAGAATATTATTAGACGTATTAGACATTAGACGTCATTAGACGTCCATTAGACGTCCGATTAGATTAGACGAATTAATTAGAATTATTAGACGTATTAGACGTCATTAGACGTCCATATTAGAC聚丙烯酰胺凝胶电泳GATCGCCTGCAGATTA’’ATTAGACGTCCG五、患者体型瘦小与该病症是否有关为什么?(选答)患者体型瘦小与该病症有关蚕豆病是因为体内缺乏GPDGPD主要影响体内的磷酸戊糖途径该途径主要生成两种重要的物质即磷酸核糖和NADPH磷酸核糖影响::核酸的合成:体内己糖和戊糖的代谢:碳原子糖类物质的相互转化NADPH影响::体内以NADPH作为供氢体合成多种活性物质如胆固醇脂肪酸和一些非必需氨基酸:NADPH可作为羟化酶的辅酶参与体内生物转化作用:NADPH参与吞噬细胞的杀菌作用:维持GSH的正常水平GSH可以保护体内蛋白质或酶免遭氧化使蛋白质或酶处于活性状态磷酸戊糖途径中生成多余的核糖转变为磷酸果糖和磷酸甘油醛进入糖酵解途径GPD缺乏使得糖代谢受到影响。脂酸可以合成甘油三酯其主要功能是储存和氧化能量机体难以合成甘油三酯则消耗原有储备的甘油三酯使得机体消瘦。同时体内的一些生物活性物质功能发生障碍如胆固醇不能直接氧化但能转化为胆汁酸类固醇激素维生素D参与物质代谢调节胆汁酸具有促进脂类消化和吸收的作用。维生素D主要参与体内血钙和血磷的调节。生物转化作用可以对体内大部分非营养物质尽心代谢转化或使有毒物质的毒性减低或消除增强这些非营养物质的水溶性和极性从而易于从胆汁或尿液中排除。GSH可以保护体内蛋白质或酶免遭氧化使蛋白质或酶处于活性状态蛋白质一方面可以作为营养物质提供能量一方面又发挥着其它重要的生物功能而酶使得生物体内的化学反应有条不紊的进行。综上所述:蚕豆病使得该男孩体内发生糖蛋白质脂类物质的代谢障碍一些重要的生物活动受到影响加之因疾病带来的一些身体上和精神上的折磨这些因素使得他的身体比同龄孩子削瘦。

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