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现代分离技术课件梯度洗脱.doc

现代分离技术课件梯度洗脱

天地无极
2018-09-05 0人阅读 0 0 0 暂无简介 举报

简介:本文档为《现代分离技术课件梯度洗脱doc》,可适用于医药卫生领域

对于组分复杂的样品采用一种色谱体系很难得到理想的分离结果。要么分离时间太长要么分离度太差。液相色谱中采用梯度洗脱,目的:缩短的时间提高分离效果。梯度洗脱:流动相由几种不同极性的溶剂组成通过改变流动相中各溶剂组成的比例改变流动相的极性使每个流出的组分都有合适的容量因子k'并使样品种的所有组分可在最短时间内实现最佳分离。梯度洗脱特点:提高柱效改善检测器的灵敏度当样品中的一个峰的k'值和最后一个峰的k'值相差几十倍至几百倍时使用梯度洗脱效果特别好。梯度洗脱中为保证流速的稳定必须使用恒流泵否则难获重复结果。梯度洗脱常用一个弱极性的溶剂A和一个强极性的溶剂B。梯度范围:指流动相中强溶剂分别在起始液和终止液中的浓度。调节梯度范围对得到最佳的梯度分离起重要作用。最佳梯度范围:第一个峰处分时间大约为倍的t梯度结束时把最后一个峰洗脱出来。梯度洗脱的形式线形梯度:在梯度洗脱时流动相强度的变化与     梯度时间成线性比例。在一定时间内     流动相强度越大直线斜率越大。指数梯度:在梯度洗脱时流动相强度岁梯度时     间变化称指数关系。凹形:梯度起始阶段强度变化缓慢随时间增加   强度变化加快。凸形:起始阶段梯度速度变化快终止阶段梯度   速度变化慢。折线形: 选择适当的A,B溶剂强度:A溶剂为低强度   B溶剂为高强度B溶剂的强度应能够在梯度过程中使所有欲测谱带都能被洗脱并使各谱带的k’值在     之间。初步分离  选择好A、B两种溶剂先按中等强度进行配比在此恒定强度下进行初步分离。A、B混合溶剂强度应使所有谱带的k’值在之间。梯度形式选择经过初步分离一般可能得到种分离色谱图:①前半部峰重叠后半部峰分离度过大保留时间太长 可选择线形梯度或凹形梯度。②前半部分离良好后半部峰重叠 可选择凸形梯度。③前后两部分分离良好中间部分峰重叠。 可选择折线梯度。 

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