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注射用重组人促红素(CHO细胞).doc

注射用重组人促红素(CHO细胞)

UC
2018-09-08 0人阅读 举报 0 0 0 暂无简介

简介:本文档为《注射用重组人促红素(CHO细胞)doc》,可适用于医药卫生领域

注射用重组人促红素(CHO细胞)ZhusheyongChongzuRenCuhongsu(CHOXibao)RecombinantHumanErythropoietinforInjection(CHOCell)本品系由高效表达人红细胞生成素(简称人促红素)基因的中国仓鼠卵巢(CHO)细胞经细胞培养、分离和高度纯化后冻干制成。含适宜稳定剂不含防腐剂和抗生素。基本要求生产和检定用设施、原料及辅料、水、器具、动物等应符合“凡例”的有关要求。制造.工程细胞..名称及来源重组人促红素工程细胞系由带有人促红素基因的重组质粒转染的CHOdhfr(二氢叶酸还原酶基因缺陷型细胞)细胞系。..细胞库建立、传代及保存由原始细胞库的细胞传代扩增后冻存于液氮中作为主细胞库从主细胞库的细胞传代扩增后冻存于液氮中作为工作细胞库。每次传代不超过批准的代次。细胞系冻存于液氮中检定合格后方可用于生产。..主细胞库及工作细胞库细胞的检定应符合“生物制品生产用动物细胞基质制备及检定规程”规定。...外源因子检查细菌和真菌(附录XIIA)、支原体(附录XIIB)、病毒检查(附录XIIC)均应为阴性。...细胞鉴别试验应用同工酶分析、生物化学、免疫学、细胞学和遗传标记物等任一方法进行鉴别应为典型CHO细胞。...人促红素表达量应不低于原始细胞库细胞表达量。目的基因核苷酸序列检查(工作种子批可免做)目的基因核苷酸序列应与批准序列相符。.原液..细胞的复苏与扩增从工作细胞库来源的细胞复苏后于含灭能小牛血清培养液中进行传代、扩增供转瓶或细胞培养罐接种用。小牛血清的质量应符合规定(附录ⅫID)。..细胞培养液生产用细胞培养液应不含牛血清和任何抗生素。..细胞培养细胞培养全过程应严格按照无菌操作。细胞培养时间可根据细胞生长情况而定。..分离纯化收集的培养液采用经批准的超滤法或其他适宜方法进行浓缩多步色谱纯化后制得高纯度的重组人促红素即为人促红素原液。除菌过滤后保存于适宜温度并规定其有效期。..原液检定按项进行。半成品配制与除菌原液加入适宜稳定剂并用缓冲液稀释。除菌过滤后即为半成品。半成品检定按项进行。成品分批应符合“生物制品分批规程”规定。分装及冻干应符合“生物制品分装和冻干规程”规定。半成品应及时分装、冷冻。冻干的全过程中制品温度应不高于℃。规格应为经批准的规格。包装应符合“生物制品包装规程”规定。检定原液检定蛋白质含量用gL碳酸氢铵溶液将供试品稀释至mgml作为供试品溶液。以gL碳酸氢铵溶液作为空白测定供试品溶液在nmnmnmnmnm和nm的吸光度。用读出的吸光度的对数与其对应波长的对数做直线回归求得回归方程。照紫外可见分光光度法(附录IIA)在波长nm~nm处测定供试品溶液最大吸光度Amax将Amax对应波长带入回归方程求得供试品溶液由于光散射产生的吸光度A光散射。按下式计算应不低于mgml。蛋白质含量(gml)=(AmaxA光散射)÷×供试品稀释倍数生物学活性体内法依法测定(附录ⅩB)。体外法按酶联免疫法试剂盒说明书测定。体内比活性每mg蛋白质应不低于×IU。体外比活性每mg蛋白质应不低于×IU。纯度电泳法依法测定(附录ⅣC)。用非还原SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳法考马斯亮蓝染色分离胶胶浓度为加样量应不低于μg经扫描仪扫描纯度应不低于。高效液相色谱法依法测定(附录ⅢB)。亲水硅胶体积排阻色谱柱排阻极限kD孔径nm,粒度μm直径mm,长cm流动相为mmolL磷酸氢二钠mmolL磷酸二氢钾mmolL氯化钠pH上样量~μg于波长nm处检测以人促红素色谱峰计算理论板数应不低于。按面积归一化法计算人促红素纯度应不低于。分子量依法测定(附录ⅣC)。用还原型SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳法考马斯亮蓝R染色分离胶胶浓度为加样量应不低于μg分子质量应为~kD。紫外光谱扫描依法测定(附录ⅡA)用水或生理氯化钠溶液将供试品稀释至mgml,在光路cm、波长nmnm下进行扫描最大吸收峰nm±nm最小吸收峰nm±nm在~nm处无吸收峰。等电聚焦使用含有pH范围为至的两性电解质的聚丙烯酰胺凝胶。取尿素g、丙烯酰胺单体溶液ml、pH至的两性电解质溶液ml、pH至的两性电解质溶液ml、水ml充分混匀后加入N’N’N’N’四甲基乙二胺μl和过硫酸铵溶液ml脱气后制成凝胶加供试品溶液μl(浓度应在每ml含mg以上)照等电聚焦电泳法进行(附录ⅣD)同时做对照。电泳图谱应与对照品一致。唾液酸含量每mol人促红素应不低于mol(附录ⅥC)。外源性DNA残留量每IU人促红素应不高于pg(附录ⅨB)。CHO细胞蛋白残留量用双抗体夹心酶联免疫法检测应不高于。细菌内毒素检查每IU人促红素应小于EU(附录ⅫE凝胶限量试验)。牛血清白蛋白残留量用酶联免疫法检测应不高于。肽图(每半年测定一次)供试品经透析、冻干后用碳酸氢铵溶液溶解并稀释至mgml依法测定(附录ⅧE)其中加入胰蛋白酶(序列分析纯)℃±℃保温小时色谱柱为反相C柱(cm×mm粒度μm孔径nm)柱温为℃±℃流速为每分钟ml进样量为μl按下表进行梯度洗脱(表中A为三氟乙酸水溶液B为三氟乙酸乙腈水溶液)。编号时间分钟流速mlAB肽图应与人促红素对照品一致。N末端氨基酸序列(至少每年测定次)用氨基酸序列分析仪测定。N末端序列应为:AlaProProArgLeuIleCysAspSerArgValLeuGluArgTyr。半成品检定细菌内毒素检查依法测定,每IU人促红素应小于EU(附录ⅫE凝胶限量试验)。无菌检查依法检查(附录ⅫA)应符合规定。成品检定除复溶时间和水分测定外应按标示量加入灭菌注射用水复溶后进行其余各项检定。鉴别试验按免疫印迹法(附录ⅧA)或免疫斑点法(附录ⅧB)测定应为阳性。物理检查外观应为白色疏松体复溶后为无色澄明液体。复溶时间加入标示量的灭菌注射用水复溶时间应不超过分钟。可见异物依法检查(附录ⅤB)应符合规定。装量差异按附录ⅠA中装量差异项进行应符合规定。化学检定水分应不高于(附录ⅦD)。pH值依法测定(附录ⅤA)应符合批准的要求。。钠离子含量应不大于mmolL(附录ⅦJ)。枸橼酸离子含量如制品中加入枸橼酸钠则枸橼酸离子应不大于mmolL(附录ⅦH第二法)。蛋白质含量依法测定(附录ⅥB第二法)应符合经批准的蛋白质含量范围。渗透压摩尔浓度依法测定(附录VH)应符合批准的要求。生物学活性体外法按酶联免疫法试剂盒说明书测定供试品体外活性(IUml)根据标示装量计算供试品生物学活性(IU瓶)应为标示量的~。体内法按附录ⅩB测定供试品体内活性(IUml)根据标示装量计算供试品生物学活性(IU瓶)应为标示量的~。无菌检查依法检查(附录ⅫA)应符合规定。细菌内毒素检查每IU人促红素应小于EUIU支以上规格的人促红素每支应小于EU每次人用剂量应小于EUml(附录ⅫE凝胶限量试验)。异常毒性检查依法检查(附录ⅫF小鼠试验法)应符合规定。保存、运输及有效期于℃以下避光保存和运输。自生产分装之日起按批准的有效期执行。使用说明应符合“生物制品包装规程”规定和批准的内容。

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