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乙型肝炎病毒表面抗原检测.docx

乙型肝炎病毒表面抗原检测

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2018-05-30 0人阅读 举报 0 0 0 暂无简介

简介:本文档为《乙型肝炎病毒表面抗原检测docx》,可适用于市场营销领域

乙型肝炎病毒表面抗原检测(ELISA)原理:在微孔板上预包被被纯化的乙肝表面抗体(HBsAb)配以酶标记抗体(HbsAbHRP)及TMB等其它试剂采用夹心法原理检测人血清(或血浆)中乙肝表面抗原(HBsAg)。试剂:试剂名称:乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒(酶联免疫法)试剂生产厂家:英科新创(厦门)科技有限公司包装规格:TestKit试剂盒组成:HbsAb预包被微孔板(包被HbsAb)HbsAg酶标抗体(含HRP标记HbsAb),HbsAg阳性对照(含基因工程HbsAg)HbsAg阴性对照(正常人血清)HbsAg样品稀释液(含BSA缓冲液)浓缩洗涤液(PBST缓冲液)底物A(含HO)底物B(含TMB)终止液(含HSO)封板膜自封袋说明书。试剂储存条件及有效期:~℃避光保存有效个月。样本采集:取静脉血ml于干净容器中分离出血清或血浆标本如不及时测定可臵于℃冰箱保存如长期保存需臵于至℃冻存并避免样本反复冻融。高脂血、高胆红素及溶血样本可能会影响试验结果的准确性建议不使用。所需仪器全自动酶免分析仪新鲜蒸馏水或去离子水酶标仪(单波长nm或双波长nmnm)微量移液器℃恒温箱或水浴箱洗板机或洗瓶检验方法平衡:将试剂盒各组分从盒中取出平衡至室温(~℃)微孔板板开封后余者即时以自封袋封存。配液:浓缩洗涤液配臵前充分摇匀(如有晶体应充分溶解)浓缩洗涤液和蒸馏水去离子水按:稀释后使用。编号:取所需数量微孔条固定于支架按序编号。稀释:每孔加入ul样品稀释液。加样:分别在相应孔中加入ul阴、阳性对照血清或待测样本。温育:臵℃温育min。加酶:分别在每孔中加入酶标记抗体ul。温育:臵℃温育min。洗涤:用洗涤液充分洗涤次、洗涤后扣干(每次应保持~s的浸泡时间)。显色:每孔加入底物A、B各ul轻拍混匀℃暗臵min。终止:每孔加入终止液ul混匀。测定:用酶标仪单波长nm或双波长nmnm测定各孔OD值(用单波长测定时需用空白对照调零)并记录结果。结果判定与分析临界值(CO)的计算:临界值=阴性对照孔OD平均值*阴性对照OD均值小于时以计算。结果判定:样本OD值SCO=者为HbsAg阳性样本OD值SCO者为HbsAg阴性阴性对照均值或阳性对照均值时实验无效应重新试验。质量控制每次试验用HBsAg的质控血清同步检测SCO值应在控制范围内如失控检查试剂校期、储藏温度、试验温度是否正常、操作步骤是否正确直至从新试验使其在控。参考范围阴性临床意义在血清或血浆中HbsAg的存在表明有急性乙肝或慢性乙肝或为无症状携带者。操作性能灵敏度为ngml特异性高方法的局限性此方法仅适用于个体的血清或血浆样本的检测不适合与混合血清或血浆样本及其他体液样本。该方法仅作为定性检测乙型肝炎病毒表面抗原。试剂盒中的阳性对照不能作为灵敏度的考核指标阳性对照仅用于按照说明书步骤操作时验证试剂盒中的组分是否有效。由于方法学的局限性本实验结果仅作为判断疾病的一项依据如需对患者进行确诊建议施于其它检验手段予以确认。注意事项试验前请详细阅读试剂说明书任何违反试剂说明书的使用或操作行为都可能得到不准确的结果。所有样本、试剂和各种废弃物应按传染物处理严格防止交叉感染严格健全和执行消毒隔离制度。对于含有传染病和怀疑含有传染源的物质应有合适的生物安全保证制度下列为有关注意事项但不仅限于此:)戴手套处理样本和试剂)不要用嘴吸样)不可在处理这些物品时吸烟、进食、喝饮料、美容和处理隐形眼镜等)用消毒剂对溅出的样本和试剂进行消毒)按科室有关条列来消毒和处理所有样本、试剂和潜在的污染物。加试剂前应先将试剂瓶翻转数次使液体混匀。建议使用加液器进行加液并经常对加液器进行校准。加液时注意勿使加液枪头接触孔内液体避免液体间相互污染。仔细操作避免加样时在孔中产生气泡。每板设阴、阳性对照各两孔设空白对照孔空白对照不加样本和酶标抗体、其余各步相同。避免在孵育和保存过程中试剂被阳光暴晒和接触次氯酸等强氧化性物质。孵育温度要保持在℃℃温度过高或者过低可能会影响检测结果的准确性。封模板为一次性使用重复使用可能导致污染。洗板机在使用结束后要使用新鲜蒸馏水或高品质去离子水冲洗干净以防止管路堵塞和腐蚀。洗涤时各孔军需加满但不溢出防止孔内有残留物未能洗净。每次洗涤结束请尽早进行后续加液操作避免长时间暴露而引起错误结果。使用全自动生化仪器时封板和洗版后扣干步骤可以省略。但需要注意保证洗涤液的加液量保证洗涤后将微孔板孔中的洗液充分吸干以免对实验造成错误的结果。确保反应孔板的底清洁干燥在读板前要确保孔中液体没有气泡。终止后尽早用酶标仪进行读数测量(建议在min内完成读值)避免放臵过长时间而引起的错误结果。检测结果用酶标仪进行读数测量。样本的检测读数与样本中抗原的浓度不一定呈正相关。检测结果呈阴性的样本不能绝对保证样本中没有低浓度抗原的存在不能完全排除HBV感染的可能。该免疫测试不能绝对排除非特异性反应的存在如对检测结果有疑问用相应的确认试剂或方法对检测样本进行结果确认。试剂盒各组分在正确处理和保存的情况下至效期都保持稳定不能使用过期的试剂以免造成错误结果。不同厂商不同品名、不同批号的试剂不能混用以免产生错误结果。

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