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首页 纳他霉素,聚赖氨酸对辣条霉菌的抑制效果研究

纳他霉素,聚赖氨酸对辣条霉菌的抑制效果研究.doc

纳他霉素,聚赖氨酸对辣条霉菌的抑制效果研究

東門涙
2019-03-26 0人阅读 举报 0 0 0 暂无简介

简介:本文档为《纳他霉素,聚赖氨酸对辣条霉菌的抑制效果研究doc》,可适用于领域

纳他霉素,聚赖氨酸对辣条霉菌的抑制效果研究摘要:本文主要研究纳他霉素、epsilon聚赖氨酸对辣条中霉菌的抑制效果从腐败辣条中分离纯化得到四种霉菌通过菌落大小、形态、颜色菌丝等特征确定为曲霉属霉菌和青霉属霉菌结合菌株显微形态特征确定为黄曲霉、白曲霉、杂色曲霉和展开青霉。用牛津杯法筛选出抑制霉菌有效的防腐剂为纳他霉素、epsilon聚赖氨酸、脱氢乙酸钠。对于杂色曲霉三种防腐剂的抑菌圈直径分别为mmmmmm。在防腐剂对霉菌抑菌活性的研究表明纳他霉素的MIC值和MBC值最小其中对黄曲霉菌的MIC值为mgKgMBC值为mgKg。本研究表明纳他霉素对辣条霉菌的抑制效果最佳。关键词:纳他霉素epsilon聚赖氨酸辣条抑菌活性防霉EfficacyofNatamycinandPolyLlysinetoControlMouldsGrowthinSpicyGlutenAbstract:Inthispaper,theefficacyofnatamycinandpolyLlysinetocontrolmouldsgrowthwerestudiedFourkindsofmouldswereseparatedfromcorruptedspicyglutenThroughtheirshape,color,sizeofcolonyandmyceliumcharacteristics,theyweredeterminedIdentificationresultsshowedthatfourstrainswereAspergillusflavus,Aspergilluskawachii,AspergillusversicolorandPenicilliumNatamycin,polyLlysineandsodiumdehydroacetatewerechosenasthebettetmouldinhibitorbyOxfordcuptestTheirinhibitionzonediameterswere,andmmTheminimuminhibitoryconcentrationandminimumbactericiadalconcentrationofnatamycinwerethelowestItsminimuminhibitoryconcentrationandminimumbactericidalconcentrationwereandmgKgtoAspergillusflavus,respectivelyThisstudyshowsthatnatamycinhasthebestanitimouldeffectsinspicyglutenKeyword:natamycinpolyLlysinespicygluteninhibitoryactivityantimould引言辣条又称素面筋大面筋是一类以小麦粉或其他谷物粉类经高温挤压膨化食品添加剂香辛料等辅料调香调味后的方便小食品其风味口感极似肉类制品深受消费者的喜爱。经试验测得市面上的辣条如ldquo卫龙rdquo、ldquo玉峰rdquo等这类产品水分活度主要在之间pH呈弱酸性或偏中性而霉菌最适宜生长的水分活度为pH为之间并且辣条的主要成分为碳水化合物富含脂质、维生素和矿物质元素为霉菌的生长繁殖提供了一个良好的生长环境从而导致辣条极易腐败变质为企业的生产加工带来了极大的影响。有较多的新闻报道辣条的食品安全问题较严重主要表现为菌落总数超标。分析辣条的生产过程可知辣条中微生物的主要侵染途径有如下三种情况:()辣条的加工过程中投料次数多工序较复杂且仅在挤压膨化过程中有短时的高温过程在最后包装密封阶段并未进行杀菌处理从而导致辣条含有大量的霉菌。()辣条中添加大量的辣椒、花椒、香辛料、植物油等辅料。这些辅料常含有大量的腐败微生物特别是存放过久的辅料会成为该产品的污染源。()此类产品中主要添加山梨酸钾苯甲酸钠或双乙酸钠等防腐剂但这几种防腐剂均在酸性条件下对霉菌有良好的抑制效果从而在辣条中这几类防腐剂的抑制效果不明显。另外也有少数的企业会在辣条中使用富马酸二甲酯充当防腐剂但该物质并不能使用于食品中。针对上述三种情况有计划将纳他霉素epsilon聚赖氨酸脱氢乙酸钠等防腐剂添加于辣条中研究其对辣条中霉菌的抑制效果。现在关于辣条的定义并不是很明确在河北地区辣条被称为调味面制品在湖南地区被称为湘式挤压糕点并且这两个地方关于辣条中食品添加剂的添加量主要参照其允许在糕点或焙烤食品中的添加量。纳他霉素是一种多烯类的天然防腐剂是纳塔尔链霉菌属经发酵获得的一种代谢产物。它在水中和油脂中的溶解性极低不易被人体所吸收且大多数摄入的纳他霉素会随排泄物排出从而对人体毒性低其耐热性较强在℃处理min或min后对其抑菌效果没有显著影响但℃条件处理活性损失较大因此纳他霉素仅能在低于℃的食品加工处理中使用或者在产品包装前喷晒于产品表面对霉菌和酵母菌具有专性抑制效果无抗细菌活性有研究表明大多数的霉菌能在mgKg浓度下被抑制多数酵母在mgkg浓度下被抑制并且未见有霉菌对纳他霉素产生耐药性用量少根据GB规定最大使用量为gkg最大残留量为mgkg但在实际应用中其使用量为数量级且抑菌作用为山梨酸钾的倍左右不影响食品风味等优点。作为一种新型的食品防腐剂年月美国食品与药品管理局正式批准纳他霉素作为防腐剂使用于食品中并归档与GRAS产品之列。年日本首次将纳他霉素、无水乙醇和山梨酸钾于乳酪中进行防腐对比研究结果表明纳他霉素的防腐效果好用量少。随后年被我国食品添加剂委员会建议批准使用并在GB中规定可使用于酪、糕点表面、肉制品表面、果蔬汁(浆)、发酵酒和蛋黄、沙拉酱中。年在美国伊冯特威尔逊等人着重研究了纳他霉素的抑菌机理从而得出纳他霉素抑菌机制与其他生物防腐剂有明显的不同。目前纳他霉素已广泛应用于乳制品、肉制品、果汁饮料和葡萄酒等的食品保藏并且有趋势将纳他霉素应用于我国传统食品中去。epsilon聚赖氨酸是由个赖氨酸残基通过alpha羧基和epsilon氨基聚合成的具有抑菌功效的多肽。它具有热稳定性强在℃、℃分别处理min、min后对epsilonPL抑菌效果没有显著影响epsilonPL在低温、避光的适宜贮存条件下其稳定率大于,因此一般食品加工过程中的热处理对epsilonPL没有明显影响可以将其与原料一同混匀进行灭菌处理这样能够防止再次污染其易溶于水能够被微生物降解对人体无毒性是一种广谱防腐剂对酵母和细菌具有强烈的抑制作用广泛应用于焙烤食品熟肉制品和果蔬汁类及其饮料的防腐保鲜。epsilon聚赖氨酸在GB中规定在焙烤食品中的最大使用量为gKg。脱氢乙酸钠是一种化学防腐剂无臭微溶于乙醇和丙酮易溶于水和丙二醇及甘油对光和热较稳定并且不受酸碱度的影响在水溶液中可降解为醋酸对人体无毒对细菌、霉菌、酵母菌有着较强的抑菌作用广泛应用于鱼类肉类蔬菜水果糕点类和饮料类的防腐保鲜,。脱氢乙酸钠在GB中规定其在糕点中的最大允许添加量为gKg。山梨酸钾是一种酸性防腐剂最佳抑菌pH值在之间易溶于水易氧化易吸潮对光、热稳定能有效抑制酵母菌霉菌和好氧性细菌的活性能防止有害微生物(肉毒杆菌、葡萄球菌等)的生长繁殖无抗有益微生物(嗜酸乳杆菌等)活性广泛应用饮料糖果酒乳制品即食食品等在糕点中的最大允许使用量为gKg。双乙酸钠是醋酸与醋酸钠的复合物带醋酸气味易吸潮极易溶于水对微生物的抑菌效果很强在糕点中的最大使用量为gKg。单辛酸甘油酯呈现刺激性气味加热后易溶解能有效抑制细菌、霉菌、酵母菌生长在糕点中的最大使用量为gKg。丙酸钙在糕点中的最大使用量为gKg。目前国内对于辣条中微生物的分析研究甚少而且对于辣条中使用抑霉防腐剂来延长其保质期的研究并不多见尤其是在其中添加天然防腐剂更是鲜有报道。因此本文主要研究辣条中的腐败微生物对辣条中的腐败微生物进行分离纯化及初步鉴定并通过牛津杯法从纳他霉素epsilon聚赖氨酸等种防腐剂中筛选出具有明显抑菌效果的防腐剂最后研究筛选出的防腐剂对辣条中霉菌的最小抑菌浓度得到对辣条防霉效果最好的防腐剂。试验仪器与材料材料与试剂表主要试剂Tablemainreagents试剂名称生产厂家丙酸钙国药集团化学试剂有限公司氯化钠天津市百世化工有限公司无水乙醇浙江三鹰化学试剂有限公司纳他霉素浙江新银象生物工程有限公司epsilon聚赖氨酸浙江新银象生物工程有限公司山梨酸钾宁波王龙科技有限公司双乙酸钠上海泰坦化学有限公司脱氢乙酸钠浙江新银象生物工程有限公司单辛酸甘油酯郑州市食代添骄化工产品有限公司营养琼脂培养基杭州微生物试剂有限公司平板计数琼脂(PCA)培养基杭州微生物试剂有限公司马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)培养基杭州微生物试剂有限公司仪器与设备表主要试验仪器与设备TableMaininstrumentsandequipments仪器(或设备)名称生产厂家mL、mL移液枪梅特勒mdash托利多仪器(上海)有限公司无菌均质袋青岛高科技工业园海博生物技术有限公司E显微镜日本尼康公司BCD冰箱博西华家用电器有限公司AL分析天平梅特勒mdash托利多仪器(上海)有限公司PL电子天平梅特勒mdash托利多仪器(上海)有限公司小舞灵圆周振荡器艾卡(广州)仪器设备有限公司牛津杯(Phi**mm)东台市吉泰不锈钢制品厂SWCJFD洁净工作台苏净集团苏州安泰空气技术有限公司FD型可调式封闭电炉金坛市三和仪器有限公司BSC恒湿恒温培养箱上海双旭电子有限公司GZXMBE电热鼓风干燥箱上海博迅实业有限公司医疗设备厂ShockMixer脉冲震荡均质器广东环凯微生物科技有限公司YXQLSA立式压力蒸汽灭菌器上海博迅实业有限公司医疗设备厂试验方法辣条霉菌的分离纯化辣条中霉菌的分离纯化主要采用稀释平板分离法和划线分离法相结合。称取g的已腐败辣条剪碎于无菌均质袋内向袋中加入mL、无菌生理盐水在脉冲震荡均质器内震荡s获得的稀释液采用梯度稀释平板法分离菌种分别吸取mL不同稀释倍数的菌悬液于无菌培养皿中然后分别倒入mL已冷却到℃左右的马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)培养基用于培养辣条中的霉菌每个浓度重复三次摇匀、待其凝固后倒置于培养箱中℃培养天。采用划线分离法对PDA培养基上菌落特征明显不同的微生物进行分离纯化。将菌落根据其形态进行分类用酒精灯灼烧过的接种针挑取霉菌在培养基表面的气生菌丝于新倒的PDA培养基上划线进行培养从无明显杂菌生长开始plusmn℃连续培养代挑取少量菌丝放到滴有蒸馏水的载玻片上低倍镜检确保菌株一致存于℃冷藏备用。霉菌的初步鉴定霉菌的菌落特征观察霉菌的菌落特征观察主要是采用点植培养法。用无菌接种环刮取少量已纯化菌种平板上的霉菌将其点植于PDA平板的三个位置。然后将平板倒置于plusmn℃条件下培养天待菌落明显成型后观察并记录单个菌落的特征用于对霉菌的分类、鉴定。霉菌的菌落特征观察主要从以下几个方面进行:()菌落大小:分局限生长和蔓延生长用格尺测量菌落的直径。()菌落的颜色:正面和反面的颜色基质的颜色变化(有无分泌水溶性色素)。()菌落的组织形状:分蜘蛛网状、棉絮状、绒毛状、地毯状等。()菌落的表面形状:分同心轮纹、放射状、疏松或紧密的菌丝、有无水滴等。()菌落的生长速度、渗出物和气味等。显微镜观察取一块干净的载玻片在其上滴加一滴蒸馏水用灼烧后的接种针挑取带孢子的菌丝放入蒸馏水中再小心的将菌丝散开切忌涂抹以免破坏霉菌结构然后盖上盖玻片注意不要产生气泡以免影响观察。霉菌形态观察时先用低倍镜观察必要时再用高倍镜观察。孢子形态观察时需在载玻片上滴加香柏油用油镜观察其形态。显微镜观察时记录如下几种特征:霉菌的孢子头形态如烧瓶形球形等菌丝有无隔膜分生孢子排列形状孢子形状如球形椭圆形等孢子的边缘结构如粗糙光滑等。菌(孢子)悬液制备选取生长良好的已纯化霉菌平板在超净工作台中用无菌蒸馏水冲洗培养基表面的菌苔用接种棒轻刮菌苔表面让孢子脱落与无菌水中然后移取菌(孢子)悬液于无菌试管中放入无菌玻璃珠于圆周振荡器上震荡s静置后取上清液。采用平板计数得出菌(孢子)悬液中菌浓度然后吸取mL菌原液加入mL无菌生理盐水中得到稀释倍的菌悬液依次梯度稀释直到得到CFUmL的菌(孢子)悬液。牛津杯法测定不同防腐剂的抑菌活力试验平板的制备牛津杯法测定抑菌效果过程中菌悬液的浓度是试验的重要影响因素之一。菌悬液浓度过高会导致菌体生长旺盛使抑菌效果并不明显反之菌悬液浓度过低会导致菌体生长缓慢、稀疏使平板上无法形成明显的抑菌圈使最后测量结果不准确影响防腐剂的筛选。本试验的霉菌经预试验后发现采用CFUmL的菌悬液并以其与培养基:的比例加入灭菌后的PDA培养基中然后制备平板最后得到的抑菌圈效果更佳。PDA培养基经℃、min灭菌后冷却至℃左右然后按照菌悬液与培养基的比例为:将cfumL的菌悬液加入冷却的PDA培养基中摇匀后将培养基倒入无菌培养皿中每个培养皿中培养基约mL。接着摇晃平板排除培养皿中的气泡将其平放于操作台上让其冷却凝固以备后用。放置牛津杯在凝固好的培养皿背后按顺时针方向做好标记用镊子夹取牛津杯轻放入带菌平皿中轻压使牛津杯固定(不可压破培养基)。每个平皿水平放置个牛津杯根据预计抑菌圈大小确定牛津杯的数量。每种防腐剂对腐败菌的抑菌效果依据抑菌圈的直径大小来判断。其中抑菌圈直径大于mm为极敏感ldquordquo抑菌圈直径在mmmm(包含mm)之间为高敏感ldquordquo抑菌直径在mm(包含mm)之间为中敏感ldquordquo抑菌直径在mmmm(包含mm)之间为低敏感ldquordquo抑菌直径小于mm为无效ldquomdashrdquo。抑菌剂的加入和效果测定根据GB的规定参照DBS《湖南食品安全地方标准湘式挤压糕点》中允许使用的食品防腐剂从中选择纳他霉素、山梨酸钾、单辛酸甘油酯、epsilon聚赖氨酸、丙酸钙、双乙酸钠、脱氢乙酸钠作为辣条的防霉剂。用这些防霉剂对分离纯化的霉菌进行抑菌圈试验以此初步筛选出对辣条中霉菌可能存在抑制效果的防腐剂。在无菌环境中称量g的上述种防腐剂于无菌烧杯中然后加入mL的无菌蒸馏水将其溶解振荡摇匀获得gml的抑菌剂溶液。不溶于水的纳他霉素形成gml的悬浊液即可。接着分别移取muL的抑菌剂溶液于牛津杯中在操作台上平放h让抑菌液慢慢渗入培养基中然后plusmn℃下培养天观察牛津杯底周围霉菌的生长情况用游标卡尺测量抑菌圈的直径取平均值。每次试验须重复次而且试验过程中需注意移取前纳他霉素悬浊液需要充分混匀。各种防腐剂对霉菌的最小杀菌浓度(MBC)测定用牛津杯法对种防腐剂进行一个初步筛选牛津杯中的抑菌剂会向四周缓慢扩散因此牛津杯会在杯底周围与培养基接触面形成抑菌圈从而我们能根据抑菌圈的大小来判断防腐剂的抑菌力强弱。另外牛津杯法筛选防腐剂仅是一个定性筛选故先在较高浓度下观察抑菌剂的抑菌活力从中筛选出有形成抑菌圈的防腐剂以作后续研究没有形成抑菌圈的防腐剂则被舍弃。根据初步筛选的结果挑选出对辣条中霉菌有抑制效果的防腐剂制备一系列浓度的抑菌液用稀释平板法测定抑菌剂的最小杀菌浓度能杀死霉菌的最小浓度为最小杀菌浓度。能够杀死的供试菌的最小样品浓度为MBC(最小杀菌浓度)。用稀释法配制已筛选出的防腐剂的一系列浓度以℃、min高温灭菌后的PDA培养基为溶剂分别加入不同浓度的防腐剂使纳他霉素在培养基中的浓度为、、、、、mgkgepsilon聚赖氨酸浓度为、、、、、mgkg脱氢乙酸钠浓度为、、、、、、、mgkg。再将CFUmL的菌悬液以:的比例加入到培养基中倒平板每个浓度平行次冷却后于℃倒置培养d。最小杀菌浓度的判定标准是培养皿中无明显菌落生长。各种防腐剂对霉菌的最小抑菌浓度(MIC)测定能抑制微生物生长的最低浓度为MIC(最小抑菌浓度)。根据MBC的测定结果判断出MIC的大致范围然后配制相应浓度的抑菌剂培养基(纳他霉素浓度为、、、、mgkg其他两种抑菌剂的浓度、、、、、mgkg)加入CFUmL的菌悬液采用梯度稀释法进行计数最终霉菌浓度低于空白组两个空白组两个数量级的浓度为最小抑菌浓度。结果与讨论辣条中霉菌的分离纯化及初步鉴定在腐败辣条中初步分离纯化得到株霉菌将这株霉菌进行编号为:No、No、No、No。辣条中霉菌的形态特征描述如表所述鉴定根据《食品微生物检验手册》、《中国真菌志》和《食品卫生微生物标准检验手册》,观察结果如图、图和图所示。表辣条霉菌菌落和细胞形态观察TableColonyandcellmorphologyobservationofthespoilagemouldsfromspicygluten霉菌编号菌落形态细胞形态初步鉴定结果No菌落呈圆形在PDA培养基上生长迅速该菌类属蔓延生长。天直径可达mm天该菌能长满整个平板菌落呈细小绒毛状较疏松。初期正面呈黄绿色反面呈无色并且随着生长时间的延长正面颜色逐渐加深菌落中间部分有白色绒毛菌落平坦。镜下可见分生孢子头成放射状或很疏松的柱状。分生孢子梗壁厚无色表面较粗糙。顶囊呈烧瓶形或近球形全部顶囊着生小梗其上的小梗为单层。分生孢子呈球形或近球形其直径约为mum表面稍粗糙。黄曲霉No菌落呈不规则形状或瓣状有时会呈椭圆形。菌落在PDA培养基上局限生长生长速度较快天直径可达mmmm。菌落具有沟纹中央微微凸起质地厚密呈粒状。菌落正面中间呈墨绿色边缘呈白色反面为黄褐色。镜下可见该菌的帚状枝为多轮不对称并疏松散开其分生孢子链略散开。分生孢子梗表面光滑多弯曲呈束状。其小梗呈瓶形较短。分生孢子呈球形表面光滑直径约为mum。展开青霉No菌落呈圆形或近椭圆形生长局限。菌落在PDA培养基上生长速度较快天直径可达mmmm。菌落质地紧密呈絮状中间部分有不规则的凹陷随着生长时间的延长会出现明显的同心环纹。菌落正面为白色反面为无色。镜下可见分生孢子头成球形分生孢子梗壁光滑无色上部稍弯曲。顶囊呈球形或近球形小梗为双层在顶囊表面全面着生。分生孢子为球形近球形或椭圆形直径在mum左右表面光滑。白曲霉No菌落呈圆形或椭圆形在PDA培养基上局限生长生长速度较快天的直径为mm左右。菌落质地紧密呈絮状或绒状。菌落正面中间呈墨绿色微微隆起边缘为白色反面无色。菌落存在少量的无色液滴。镜下可见分生孢子头疏松呈放线状。分生孢子梗光滑无色长度较长可达mum左右。顶囊部分呈半椭圆形或半球形其上半部或部位上会着生小梗小梗为二轮。分生孢子呈球形表面较粗糙具有小刺其直径在mum左右。杂色曲霉图辣条霉菌菌落照片FigColonyofthespoilagemouldsinspicygluten图辣条霉菌个体形态FigMorphologyofthespoilagemouldsinspicygluten图辣条霉菌孢子形态FigSporemorphologyofthespoilagemouldsinspicygluten辣条防腐剂的初步筛选种防腐剂对辣条霉菌的抑制效果如表所示,添加防腐剂的初筛效果图如图所示。从表可知纳他霉素、epsilon聚赖氨酸、脱氢乙酸钠对所列霉菌均能产生明显的抑菌圈其中纳他霉素对展开青霉、白曲霉、杂色曲霉三种菌的抑菌圈直径都大于mmepsilon聚赖氨酸对这三种菌的抑菌圈直径在mm之间脱氢乙酸钠对展开青霉、白曲霉的抑菌圈直径大于mm对杂色曲霉的在mm之间但这三种防腐剂对黄曲霉的抑菌圈直径都在mm之间。山梨酸钾、单辛酸甘油酯、丙酸钙和双乙酸钠在该浓度下对这株菌均不产生抑菌圈。从这些数据可以表明纳他霉素有极敏感的抑菌效果(除黄曲霉外)epsilon聚赖氨酸和脱氢乙酸钠存在高敏感的抑菌效果(除黄曲霉外)。因此可以得出在这种防腐剂中仅三种防腐剂对辣条中的株霉菌有较明显的抑菌效果即纳他霉素、epsilon聚赖氨酸和脱氢乙酸钠。另外从表还能得出各种防腐剂对于黄曲霉菌的抑菌效果明显比其他三种菌要弱。表防腐剂的初步筛选结果TabletheresultofPreliminaryscreeningofmouldinhibitiors霉菌菌株抑菌圈直径(mm)纳他霉素山梨酸钾单辛酸甘油酯epsilon聚赖氨酸丙酸钙双乙酸钠脱氢乙酸钠黄曲霉plusmn*plusmnplusmn相对敏感度mdashmdashmdashmdash展开青霉plusmnplusmnplusmn相对敏感度mdashmdashmdashmdash白曲霉plusmnplusmnplusmn相对敏感度mdashmdashmdashmdash杂色曲霉plusmnplusmnplusmn相对敏感度mdashmdashmdashmdash注:*重复三次平均值plusmn标准差图初筛效果(No,添加防腐剂)FigScreeningeffect(No,addedmouldinhibitors)图注:初筛No号菌为纳他霉素为聚赖氨酸各种防腐剂最小杀菌浓度(MBC)和最小抑菌浓度(MIC)的测定根据抑菌圈的筛选结果获得纳他霉素、epsilon聚赖氨酸、脱氢乙酸钠三种有效防腐剂。这三种防腐剂对辣条中种霉菌的最小杀菌浓度(MBC)的结果如表表表所示最小抑菌浓度(MIC)的测试结果如表所示。MBC和MIC的测定都是为了更直观的观察这三种防腐剂对辣条腐败菌的敏感度。纳他霉素MBC的测定如表所示纳他霉素对黄曲霉菌的MBC值为mgKg对展开青霉、白曲霉、杂色曲霉的MBC值为mgKg。从中可知纳他霉素对黄曲霉菌的抑制效果明显比对另外三种霉菌的弱且其MBC值为其他三种菌的倍。这结果产生的可能是由于黄曲霉菌的生长速率较其他三种霉菌的速率快不能被相同浓度的纳他霉素所不能完全杀死从而必须使纳他霉素的浓度大于其他三种菌才能完全杀死黄曲霉菌。另外可知纳他霉素的MBC皆远远小于GB的规定由此可见纳他霉素的防腐效果可见一斑。表纳他霉素最小杀菌浓度研究结果TabletheresultoftheMinimumbactericidalconcentrationoftheNatamycin霉菌菌株纳他霉素浓度(mgKg)黄曲霉菌(极少)mdash展开青霉(极少)mdashmdashmdash白曲霉(极少)mdashmdashmdash杂色曲霉(极少)mdashmdashmdash注:ldquordquo表示有菌生长ldquordquo越多表明菌越多ldquomdashrdquo表示无菌生长epsilon聚赖氨酸MBC的测定epsilon聚赖氨酸对黄曲霉菌的MBC值为mgKg对展开青霉、白曲霉、杂色曲霉的MBC值为mgKg结果如表所示。比较纳他霉素与epsilon聚赖氨酸的MBC值可知epsilon聚赖氨酸的MBC值明显大于纳他霉素且其值超过GB的最大允许使用量。根据秦云桦等人的研究可知epsilon聚赖氨酸对霉菌的抑制效果比细菌或酵母菌弱并从中可知epsilon聚赖氨酸对霉菌的抑制效果可能受霉菌的细胞形态所影响从而削弱了epsilon聚赖氨酸对霉菌的抑制效果。另外epsilon聚赖氨酸也表现出对黄曲霉菌的抑制效果弱于其他三种菌可能产生此现象的原因与纳他霉素相似。表epsilon聚赖氨酸最小杀菌浓度研究结果TabletheresultoftheMinimumbactericidalconcentrationoftheepsilonPL霉菌菌株epsilon聚赖氨酸浓度(mgKg)黄曲霉菌(极少)mdash展开青霉(极少)mdashmdashmdashmdash白曲霉(极少)mdashmdashmdashmdash杂色曲霉(极少)mdashmdashmdashmdash注:ldquordquo表示有菌生长ldquordquo越多表明菌越多ldquomdashrdquo表示无菌生长脱氢乙酸钠MBC的测定见表可知脱氢乙酸钠对辣条中四种霉菌对应的MBC值分别为mgKg、mgKg、mgKg、mgKg。其中脱氢乙酸钠对种霉菌的抑制效果比较与上述两种防腐剂相似现象产生的原因应该与上述较一致。比较三种防腐剂的MBC值可知三者的杀菌效果为纳他霉素epsilon聚赖氨酸脱氢乙酸钠。表脱氢乙酸钠最小杀菌浓度研究结果TabletheresultoftheMinimumbactericidalconcentrationofthesodiumdehydroacetate霉菌菌株脱氢乙酸钠浓度(mgKg)黄曲霉菌(极少)mdash展开青霉(极少)mdashmdashmdashmdash白曲霉(极少)mdashmdashmdashmdashmdash杂色曲霉(极少)mdashmdashmdashmdash注:ldquordquo表示有菌生长ldquordquo越多表明菌越多ldquomdashrdquo表示无菌生长三种防腐剂MIC的测定三种防腐剂的MIC值如表所示其中纳他霉素、epsilon聚赖氨酸对黄曲霉的MIC值分别为mgKg、mgKg对展开青霉、白曲霉、杂色曲霉的MIC值为mgKg、mgKg脱氢乙酸钠对黄曲霉的MIC值为mgKg对展开青霉、杂色曲霉的MIC值为mgKg对白曲霉的MIC值为mgKg。从结果可得纳他霉素的抑菌效果明显好于epsilon聚赖氨酸和脱氢乙酸钠且其MIC值在国标规定范围内。另外根据李东等人文章可得纳他霉素对大多数霉菌的MIC值在mgKg之间特别是对黄曲霉菌的MIC值在mgKg之间从而可得本试验的结果与该结论较符合。MIC值和MBC值结果表明纳他霉素的MIC值和MBC值远远小于国标值而epsilon聚赖氨酸和脱氢乙酸钠仅MIC值在国标范围内从而可知纳他霉素的抑菌和杀菌效果皆好于epsilon聚赖氨酸和脱氢乙酸钠在辣条中的应用会起到一个较好的作用但其在辣条中的添加量还需要进一步的试验而对于epsilon聚赖氨酸和脱氢乙酸钠需要在后续试验中着重考虑与其他防腐剂的复配试验以降低两者的使用量从而才能达到一个良好的抑制效果。表防腐剂MIC研究结果TabletheresultoftheMinimuminhibitoryconcentrationofmouldinhibitiors霉菌菌株抑菌剂浓度(mgKg)纳他霉素epsilon聚赖氨酸脱氢乙酸钠黄曲霉菌展开青霉白曲霉杂色曲霉结论本试验主要研究纳他霉素、聚赖氨酸、脱氢乙酸钠对辣条中霉菌的抑制效果。从腐败辣条中分离纯化得到类霉菌通过菌落大小、形态、颜色菌丝和孢子显微形态特征观察初步鉴定类霉菌中类为曲霉属霉菌类为青霉属霉菌分别为黄曲霉菌、白曲霉、杂色曲霉和展开青霉。此结果表明辣条的腐败主要是由曲霉菌属和青霉菌属引起。在牛津杯法筛选防腐剂过程中得到种有效防腐剂分别为纳他霉素、epsilon聚赖氨酸、脱氢乙酸钠其中纳他霉素相对于epsilon聚赖氨酸、脱氢乙酸钠的抑菌效果更显著。在对黄曲霉菌、展开青霉、白曲霉、杂色曲霉的抑菌活性研究中纳他霉素的抑菌活性最强其对黄曲霉菌的MIC值为mgKgMBC值为mgKg对展开青霉、白曲霉和杂色曲霉的MIC值为mgKgMBC值为mgKg。另外纳他霉素不会影响食品风味使用方便因而具有更好的应用前景为后续纳他霉素于辣条中的应用奠定一个良好的基础。参考文献:梁庆华,邱德生麻辣小食品的保鲜J农产品加工:创新版(中),():阎永贞,周绪霞,李卫芬等纳他霉素抑菌机理及其在食品中的应用J食品工业科技,():SofosJN,BeuchatLR,DavidsonPM,etalNaturallyoccurringantimicrobialsinfoodJRegulatoryToxicologyandPharmacology,,():高玉荣,王雪平,刘洋纳他霉素水溶液生物稳定性研究J食品科学,():何艳玲,邬建国间歇补料分批发酵提高纳他霉素产量J药物生物技术,,():陈冠群,季波纳他霉素的特性及应用J中国乳品工业,,():TeWelscherYM,HendrikH,BalagueacuteMM,etalNatamycinblocksfungalgrowthbybindingspecificallytoergosterolwithoutpermeabilizingthemembraneJJournalofBiologicalChemistry,,():ShimaS,SakaiHPolylysineproducedbyStreptomycesJAgriculturalandBiologicalChemistry,,:李诚石磊epsilonPL抑菌性能研究J食品与发酵工业,():ShimaS,MATSUOKAH,IWAMOTOT,etalAntimicrobialactionofEPSILONpolyLlysineJTheJournalofantibiotics,,():GB,食品安全国家标准食品添加剂使用卫生标准S叶银枝脱氢醋酸钠在食品中的应用J中国食品添加剂,():周家华崔英德曾颢食品添加剂M第二版北京:化学工业出版社:,,,,赫利平夏延斌陈永泉等食品添加剂M北京:中国农业大学出版社:,,,王国军山梨酸(钾)的性能及其应用J中国食品,():杨晓丽,韩克勤双乙酸钠对霉菌抑制作用的研究J天津师范大学学报:自然科学版,,():修祥菊,郑尚基,刘春宪等新型防腐剂单辛酸甘油酯在食品中的应用J中国食品添加剂,,:哈瑞根食品微生物试验室手册M第三版北京:中国轻工业出版社:,,刘慧现代食品微生物学试验技术M中国轻工业出版社,石磊epsilon聚赖氨酸抑菌特性及其在畜产品保藏中的应用研究D四川农业大学,LIUJ,WANGH,ZHAOSDeterminationoftheantibacterialactivityofGallachinensisonpathogenvibrioofPseudosciaenacroceabyoxfordplateassaysystemJMarineSciences,,:苏世彦庄平陈亡名食品微生物检验手册M中国轻工业出版社,孔华忠中国真菌志:曲霉属及其相关有性型M科学出版社,罗雪云刘宏道食品卫生微生物检验标准手册M中国标准出版社,秦芸桦,周涛聚赖氨酸抑菌特性研究J安徽农业科学,,():李东,杜连祥,路福平等纳他霉素的抑菌谱及最小抑菌浓度J食品工业科技,,():PAGE

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