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野菊花提取物群体感应中的研究.doc

野菊花提取物群体感应中的研究

東門涙
2019-03-26 0人阅读 举报 0 0 0 暂无简介

简介:本文档为《野菊花提取物群体感应中的研究doc》,可适用于领域

野菊花提取物群体感应中的研究摘要医学发展不断前进在改善医疗条件的同时也导致了细菌耐药性问题日趋严重细菌耐药性将造成治疗代价增大以及治疗难度增大。种种数据研究表示细菌群体之间的特殊感应又称群体感应(quorumsensing.QS)是细菌耐药性的主要原因之一。群体感应的研究成为新型药物研究的切入点所以传统中医药材的研究也为抑制菌种群体感应提供了研究方向。以野菊花为对象通过乙醇厚萃取浓缩得到粗提物。以紫杆菌CV为生测菌初步检测野菊花提取物的群体感应抑制活性。在此基础上进一步考察了其对条件致病菌铜绿色假单胞菌群体感应的抑制作用。野菊花提取物具有显著的群体感应抑制作用可显著抑制铜绿色假单胞菌各毒力因子的表达。野菊花提取物对群群体感应有明显的抑制作用表明野菊花不仅具有传统中药的药用功效同时能明显阻碍菌体群体感应具有作为新型药物研究的潜力。关键词:野菊花紫色杆菌铜绿假单胞菌群体感应群体感应抑制剂AbstractWiththeadvanceofthemedicinedevelopment,thebacterialresistanceisincreasinglyseriousThebacterialresistancewillresultintheincreaseofthetreatmentcostandthedifficultyofthetreatmentAvarietyofdataandresearcheshaveshownthatthespecialinductionbetweenthequorumsofbacteria,quorumsensing,beoneoftheleadingcausesinbacterialdrugresistanceTheresearchonthequorumsensingistheentrypointofnewdrugresearchTherefore,theresearchonthetraditionalChinesemedicinesprovidesaresearchdirectionfortheinhibitionofbacterialquorumsensingEthanolextractofDendranthemaindicumwaspreparedandinvestigateditsquorumquenchingactivity,usingChromobacteriumviolaceumCVasanindicatorinbioassaytestAndthenthequorumquenchingactivitieswerefurthertestedandidentifiedintermofinhibitingvirulencefactorsbiosysnthesisinPseudomonasaeruginosaTheextractofDendranthemaindicumhasthesignificantactivitiesofquorumquenching,caninhibitvirulencefactorsbiosysnthesisinPseudomonasaeruginosaTheextractofwildchrysanthemumhasobviousinhibitoryeffectonthebacterialquorumsensingItsuggestedthatwildchrysanthemumnotonlyhasthemedicinaleffectoftraditionalmedicinebutalsocanobviouslypreventbacteriaquorumsensing,whichhastheconditionofbeingasanewdrugKeywords:DendranthemaindicumViolaceinPseudomonasaeruginosaQuorumsensingQuorumsensinginhibitors引言传统抗生素的使用在细菌感染性疾病的治疗中做出了巨大的贡献但由于其ldquo抑菌rdquo或ldquo杀菌rdquo的作用机制给细菌本身的生存带来选择压力从而导致耐药性细菌的产生和蔓延。细菌耐药性使越来越多的抗生素在临床治疗中逐渐失去了作用给人类健康带来了日益严重的威胁因此寻找新型抗菌药物已成为生物医学领域的紧迫课题之一。野菊花(学名:Dendranthemaindicum)为菊科多年生草本植物头状花序的外形与菊花相性微寒具疏散风热、消肿解毒的功效。野菊花在我国历史悠久在中医药书《神农本草经》等众多书籍中都记载了野菊花的药用功效。中医认为野菊花味道清香略带苦涩药性比较平实具有清除湿热解除毒素、消肿止痛的功效对于夏季天气湿热带来的热感冒和肝火旺以及因其出现的口疮疾病都有很好地治疗作用能够去肝火、治头痛流鼻涕、避暑消热的作用。另外野菊花还对夏季蚊虫叮咬后的红肿脓包具有杀菌去肿的作用。野菊花的活性物质主要为野菊花内酯(handelinchrysanthelide)野菊花醇(chrysanthemol)野菊花三醇(chrysanthetriol)野菊花酮(indicumeneone)现代医学也积极研究野菊花对现代病症的治疗作用研究显示野菊花对细菌具有很强的抵抗能力能够抵抗外界病毒进入体内具有预防疾病的作用对人体的心脏、大脑和血管都具有保护作用。现代医学、微生物学普遍认为在细菌群体中存在一种特殊的交流这主要来自整个细菌群体之间的联系。认为在细菌能感知外界浓℃、生长环境变化自发产生一种成为自诱导物的信号分子包括启动细菌部分基因的表达比如控制产生毒素、抗生素、荧光、孢子来调节控制群体的生长当然这种现象的前提条件是细菌自身浓℃得达到阈值这种现象就是群体感应调节(quorumsensing.QS)也称为细胞密℃依赖的基因表达(celldensitydependentcontrolofgeneexpression)。考虑到细菌合成的信号分子和感应机制不同群体感应系统(QS)基本可分为三个代表性的类型:革兰氏阴性细菌一般利用酰基高丝氨酸内酯(AHL)类分子作为AI革兰氏阳性细菌mdash般利用寡肽类分子(AlP)作为信号因子另外许多革兰氏阴性和阳性细菌都可以产生一种AI的信号因子一般认为AI是种问细胞交流的通用信号分子另外最近研究发现有些细菌利用两种甚至三种不同信号分子调节自身群体行为吲由此可见群体感应机制是极为复杂的。并且由于细菌之间存在群体感应将导致细菌产生抗药性且呈现愈演愈烈的趋势所以新型药物的研究显得迫在眉睫。年Kohler等通过胞内和胞外实验证实大环内酯类的抑菌药物的抗菌作用主要是通过阻断QS调控路径从而降低QS依赖的毒力因子的产量来实现的。铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa)原称绿脓杆菌是临床上非常常见的一种条件致病菌属于非发酵革兰氏阴性杆菌同时也是专性需氧菌生长温度范围为℃~℃最适生长温为℃~℃。铜绿假单胞菌是医院内感染的主要病原菌之一患代谢性疾病、血液病和恶性肿瘤的患者以及术后或某些治疗后的患者易感染本菌同时引起术后伤口感染也可引起褥疮、脓肿并且感染本菌的病灶可导致血性传播从而导致菌血症和败血症尤其在烧伤后感染铜绿假单胞菌可造成死亡。铜绿假单胞菌的恐怖之处不仅于此HIV感染者及免疫力低下者包括老人、经期女性、儿童很容易感染此菌而且HIV感染者一旦感染此菌非常容易出现晚期HIIV感染的特征。能够导致慢性肺部纤维化(CF)及其他免疫力低下的患者的严重感染并致死。而近期研究者进一步研究了粘液型铜绿假单胞菌和非粘液型铜绿假单胞菌形成生物膜的能力和基因表达的特点。紫色杆菌很少会感染人类但若发生感染则会引起皮肤损伤、败血症及可以引致死亡的肝脓肿。紫色杆菌CV在信号分子CHSL的作用下能使相关基因得到表达产生紫色素这也是一种菌体间群体感应。但若阻断信号分子CHSL与菌体间的交流则可使菌体不产紫色素证实了紫色杆菌的群体感应被抑制意义非凡。厌氧时紫色杆菌通过葡萄糖代谢产生乙酸和甲酸。除此之外该菌还可以通过代谢脂质和氨基酸产生能量。巴西国家基因工程协会已经完成了对紫色杆菌的完整基因序列工作。铜绿假单胞菌对多种抗生素具有内在和获得性耐药性临床上治疗铜绿假单胞菌引起的感染常常极为困难。这使得铜绿假单胞菌成为研究细菌致病性以及抗药性的重要对象。铜绿假单胞菌通过多种毒性因子的表达来侵染宿主如胞外分泌的绿脓菌素、弹性蛋白酶、碱性蛋白酶、外毒素A以及存在于细菌表面的鼠李糖脂和藻酸盐等这些毒性因子对铜绿假单胞菌侵染宿主细胞起重要作用其表达受QS系统的调控。综上所述随着医学、药学的不断发展抗生素泛滥各种细菌耐药抗药性等问题日愈突出新型抗生素药物的研究刻不容缓。细菌之间的群体感应是联系细菌群体调机的重要机制以铜绿假单胞菌为例群体感应中产生的生物被膜、绿脓菌素、弹性蛋白酶、以及流动性涌动性能切实反映菌群的信号分子联系。我国传统中药具有清热解毒的功效同时固本培元尝试从传统中药中找到有效抑制菌群群体感应的有效物质正逐步成为当前微生物学、医药学的研究方向。而野菊花是我国常见花种可入药能化脓解疮所以研究野菊花的活性物质对菌群群体感应的影响显得意义非凡。材料与方法材料、试剂与培养基紫色杆菌(CV)铜绿假单胞菌(PA)野菊花(安徽黄山)乙醇(分析纯)紫色杆菌信号分子己酰基高丝氨酸内酯(CHSLmmoll)卡那霉素刚果红二甲基亚砜LB液体培养基(酵母:蛋白胨:氯化钠:)LB液体培养基(酵母:蛋白胨:氯化钠:琼脂:)Swimming培养基(琼脂:蛋白胨:氯化钠:)Swarming培养基(肉汤培养基:氯化钠:琼脂:)孔板仪器设备真空旋转蒸发仪德国IKA公司LRH系列生化培养箱上海一恒科技有限公司SKHP型超声清洗仪上海科导超声仪器有限公司台式高速冷冻离心机Sigma公司移液枪德国Eppendorf公司漩涡振荡器上海医科大学科学仪器厂全自动高压灭菌锅ASTECL公司恒温调速回转式摇床上海杜科自动化设备有限公司IMS全自动雪花制冰机常熟市雪科电器有限公司BX型ULH电子显微镜日本OIYMPUS公司测定紫色杆菌CV指标方法野菊花的粗品提取制备根据常规方法用乙醇提取:将g野菊花原材料放入玻璃容器中加入ml乙醇置于避光处静置h。将浸提液采用医用脱脂纱布过滤取得滤液加入活性炭静置h进行二次抽提。将抽提后滤液置于干净灭菌的容器中用旋转蒸发仪蒸发酒精浓缩取得浓缩液备用。不同浓℃的野菊花配制采用常规倍稀释法:取只干净灭菌离心管每只离心管分加ml二甲基亚砜溶液在第只离心管加ml浓缩液震荡摇匀,取第一只离心管中ml溶液加入第只离心管依次类推形成、、、、五个浓℃梯℃溶液置于℃冰箱中备用。紫色杆菌CV的的活化培养①配制mlLB液体培养基(酵母:蛋白胨氯化钠:)取ul丙三醇置于EP管中将此培养基与EP管置于℃灭菌min②在超净台条件下将紫色杆菌CV克隆于LB培养基中置于℃、rpm条件下摇床中培养h。取ul菌液加入灭菌后的EP管中置于℃保存备用。野菊花提取物对紫色杆菌生长的影响判定及最适浓度的选择①将℃下保藏紫色杆菌CV按:比例接种于ml灭菌的LB液体培养基并加入ul卡那霉素置于℃、rpm条件下摇床中培养h。②配制两组LB固体培养基℃条件下灭菌min。在室温条件冷却至℃在超净台下按:比例加入紫色杆菌一组加入信号分子ASL另一组不加入信号分子摇匀倒制平板。③每个平板里放置个牛津杯分别加入ul三个不同浓℃的野菊花提取物溶液最后一个加入ul二甲基亚砜做对照置于℃培养箱中过夜培养观察结果。野菊花提取物对紫色杆菌菌密℃与紫色素的影响①按:比例将℃条件下紫色杆菌接种于灭菌后培养基中并加入ul卡那霉素置于℃、rpm条件下摇床中培养h。②按:比例将培养好菌液、ul信号分子溶液加入mlLB液体培养基摇匀。取出ul分装到四个ml培养管中再分别加入、、、、浓度野菊花提取液ul和二甲基亚砜溶液ul置于℃、rpm条件下摇床中培养h。菌密度:③取出ml体系管从每管中取出ul培养液置于洁净孔板中平行吸取三次用酶标仪在OD条件下测定其吸光记录。④将ml体系管中剩余液体倒入离心管中在rp条件下离心min(注:离心管配平时必须小于)每管中吸取ul上清液置于洁净孔板中平行吸取三次用酶标仪在OD条件下测定其吸光记录。两次结果相减即为培养体系中菌密度。紫色素浓度:⑤吸尽离心管中上清液依次每管中加入ml灭菌LB液体培养基在rpm条件下离心min吸尽离心管中培养基在加入ml培养基同样离心min取出吸出上清液。⑥再在每个离心管中加入ml乙醇(分析纯)在rpm条件下离心min取出离心管用移液枪打散保证液相均匀吸取ul液体于洁净孔板中用酶标仪在OD条件下测定其吸光即紫色素值平行三次记录数据进行数据分析处理。野菊花提取物对紫色杆菌生长曲线的影响①按:比例将紫色杆菌接种于LB液体培养中加入ul卡拉霉素置于℃、rpm条件下摇床中培养h备用。②配制组LB液体培养基于℃条件下灭菌分钟备用。③在超净台条件下将培养好的紫色杆菌按:比例加入组LB液体培养基中按:比例加入、、、、浓度野菊花提取物溶液和二甲基亚砜溶液调节其pH至并摇匀。分别吸取ul溶液置于洁净孔板中用酶标仪在OD条件下测定其吸光平行三次记录数据。④将紫色杆菌培养体系放置于℃、rpm条件下摇床中培养。并且在培养时间为h时吸取ul培养液于洁净孔板中在用酶标仪在OD条件下测定其吸光平行三次记录数据。每隔两小时测定一次D吸光值连续测定次记录数据进行数据分析处理。测定铜绿假单胞菌PA指标方法铜绿假单胞菌PA的活化培养在超净台条件下将铜绿假单胞菌PA克隆于LB液体培养基中置于℃、rpm条件下摇床中培养h。甘油管加入ul丙三醇于℃条件下灭菌min加入活化PA菌液置于℃冰箱备用。野菊花提取物对铜绿假单胞菌PA的生长影响判定及最适浓度的选择①二倍稀释法:取只干燥灭菌离心管第只离心管中加ml二甲基亚砜其余管中加入ml二甲基亚砜溶液取ml野菊花浓缩液加入第管摇匀取ml第管溶液加入第管中摇匀依次取ml溶液加入下一离心管中摇匀置于℃冰箱备用。②按:比例将铜绿假单胞菌接种于mlLB液体培养中置于℃、rpm条件下摇床中培养h。③按:比例将培养好铜绿假单胞菌液在超净台条件下接入mlLB固体培养基中摇匀倒制平板。放置个牛津杯分别在牛津杯中加入、、浓度野菊花提取物溶液和二甲基亚砜溶液ul。置于℃恒温培养箱中过夜培养观察结果。野菊花提取物对铜绿假单胞菌PA生长的影响①按:比例将铜绿假单胞菌接种于mlLB液体培养中置于℃、rpm条件下摇床中培养h备用。②ml体系:按:比例将培养好菌液加入mlLB液体培养基中摇匀后吸取ul于管中加入、、浓℃野菊花提取物溶液和二甲基亚砜ul置于℃、rpm条件下摇床中培养h。菌密℃:③吸取ul体系管中培养液置于洁净孔板中用酶标仪测定其OD吸光记录数据。④将ml体系管中剩余液体倒入离心管中在rpm条件下离心分钟(注:离心管配平时必须小于)每管中吸取ul上清液置于洁净孔板中平行吸取三次用酶标仪在OD条件下测定其吸光记录。两次结果相减即为培养体系中菌密℃。绿脓菌产量:⑤用移液枪吸取ml上清液于离心管中加入ml氯仿用涡旋振荡器振荡提取再在rpm条件下用台式高速冷冻离心机离心min取出下层有机相加入M盐酸溶液ul利用涡旋振荡器振荡反应使之变为红色。再在rpm条件下离心min。⑥用移液枪移取ul上层液于洁净孔板中用酶标仪测其在OD条件下的吸光值平行三次记录数据进行数据分析处理。野菊花提取物对铜绿假单胞生长曲线的影响①按:比例将铜绿假单胞接种于LB液体培养中置于℃、rpm条件下摇床中培养h备用。②配制组LB液体培养基于℃条件下灭菌分钟备用。③在超净台条件下将培养好的铜绿假单胞菌按:比例加入组LB液体培养基中按:比例加入、、、野菊花提取物溶液和二甲基亚砜溶液调节其pH至并摇匀。分别吸取ul溶液置于洁净孔板中用酶标仪在OD条件下测定其吸光平行三次记录数据。④将铜绿假单胞菌培养体系放置于℃、rpm条件下摇床中培养。并且在培养时间为h时吸取ul培养液于洁净孔板中在用酶标仪在OD条件下测定其吸光平行三次记录数据。每隔两小时测定一次D吸光值连续测定次记录数据进行数据分析处理。野菊花提取物对铜绿假单胞菌弹性蛋白酶产量影响的测定①按:比例将铜绿假单胞菌接种于mlLB液体培养基中置于℃、rpm条件下摇床中培养h。②按:比例将活化好菌液加入mlLB液体培养基中摇匀。③吸取ul培养液分装于只培养管中分别加入、、、浓℃溶液ul再吸取ml培养液置于培养管中置于℃、rpm条件下摇床中培养h。④将培养好菌液于℃、rpm条件下离心min吸取上清液并用一次性过滤器(um)过滤除菌在干燥灭菌管中加入mg底物弹性蛋白酶刚果红(ElastinCongoRed)和ml反应缓冲液并加入ml细菌上清液于℃、rpm摇床中振荡反应h。⑤加入ml反应终止液终止反应并将反应物置于冰上min利用台式高速冷冻离心机在℃、rpm条件下离心min吸取上清液ul置于洁净孔板中测其D出吸光值记录数据平行三次并进行数据分析处理。野菊花提取物对铜绿假单胞生物被膜影响的定量检测①按:比例将铜绿假单胞菌接种于mlLB液体培养基中置于℃、rpm条件下摇床中培养h。②按:比例将活化好菌液加入个mlLB液体培养基中摇匀备用。③分别加、、、、浓℃提取物溶液ml于上述LB液体培养基中摇匀。再分别平行三次吸取ul溶液于洁净孔板中设置空白LB液体培养基作为空白对照静置于℃条件下培养h。④小心吸尽上层菌液使用PBS缓冲液洗涤孔板此风干。⑤风干后每孔中加入结晶紫溶液ul染色min然后用ulPBS缓冲液洗涤次。⑥再用ul冰醋酸溶解用酶标仪测定其A吸光值记录数据进行数据分析处理。野菊花提取物对铜绿假单胞菌的生物被膜产生情况影响检测①按:比例将铜绿假单胞菌接种于mlLB液体培养基中置于℃、rpm条件下摇床中培养h。②按:比例将培养好菌液加入mlLB液体培养基中摇匀。③吸取ml上述液体加入孔板中再吸取ul浓℃提取物溶液用枪头吸匀。再直接吸取ml上述液体加入孔板中作空白对照。置于℃条件下培养箱中培养h,于电子显微镜下观察结果。野菊花提取物对铜绿假单胞菌泳动能力的影响检测①按:比例将铜绿假单胞菌接种于mlLB液体培养基中置于℃、rpm条件下摇床中培养h备用。②配制组mlSwimming培养基组中依次加入提取物二倍梯度稀释溶液ml另一组作空白对照摇匀倒制平板风干。③用移液枪吸取ul培养好菌液滴加在培养基表面在℃条件下培养h观察现象。野菊花提取物对铜绿假单胞菌丛动能力的影响检测①按:比例将铜绿假单胞菌接种于mlLB液体培养基中置于℃、rpm条件下摇床中培养h备用。②配制组mlSwarmming培养基组中依次加入提取物二倍梯度稀释溶液ml另一组作空白对照摇匀倒制平板风干。③用移液枪吸取ul培养好菌液滴加在培养基表面在℃条件下培养h观察现象。结果提取物对紫色杆菌CV的影响提取物对生长及群体感应抑制的初步观察图左图为不添加信号分子平板右图添加信号分子。紫色杆菌在信号分子CHSL的作用下使特定基因得到表达可产生紫色素。由图可见实验组平板中四个牛津杯并没有出现抑菌圈证明野菊花提取物在这一系列浓度梯度下并没有杀菌作用而加提取物的三个牛津杯按浓度梯度出现不同宽度的白色晕圈证明这三个浓度下的野菊花提取物溶液能抑阻断信号分子条件下紫色杆菌相应基因表达紫色素产生受阻尤其以浓度溶液效果最为明显。相比之下对照组平板中牛津杯并没有出现抑菌圈也没有出现白色晕圈更加证明野菊花提取物溶液没有抑菌作用只有抑制紫色杆菌在信号分子条件下的相应基因的表达能力。图提取物对生长及群体感应抑制的初步观察提取物对菌体生长的影响图中号为空白对照样其余个浓度依次提取物浓度倍递减。由图可见组吸光度数值均在之间并没有出现明显波动直观得出野菊花提取物在、、、浓度下对紫色杆菌的生长并没有影响。图提取物对菌体生长的影响对紫色素产量影响判定图中号为空白对照样其余个浓度依次倍递减。由图可见第组吸光度值最大证明不加提取物溶液的空白组紫色杆菌产紫色素量最多。其余组随着添加提取物浓度减小情况下吸光度值依次增大证明添加提取物溶液浓度越大产紫色素量越小抑制紫色杆菌群体感应效果越明显。在浓度下吸光度值与空白对照值相差无几几乎对紫色杆菌产紫色素不起抑制作用在浓度下紫色素产量最小阻断信号分子使紫色杆菌相应基因表达能力越大。图提取物对紫色素产量的影响提取物对紫色杆菌生长曲线影响图中号为空白对照样其余组浓度依次倍递减。由图可见组浓度、、、、与空白组的生长曲线基本重合可见野菊花提取物不同浓度溶液对紫色杆菌的生长周期没有明显影响。紫色杆菌生长周期较长其中h为调整期h为对数期h为稳定期h为衰亡期。图提取物对紫色杆菌生长曲线影响提取物对铜绿假单胞菌PA的影响对生长影响判定及最适浓度的选择图中号为空白对照样其余组依次加入倍稀释梯度提取物溶液。由图可见加入二甲基亚砜组牛津杯孔并没有产生晕圈随着加入提取物递减浓度的溶液产生晕圈的宽度逐渐减小可推出最适稀释液浓度为。图对生长影响判定及最适浓度的选择对菌密度影响图中号为空白对照样其余个浓度依次倍递减。由图可见组吸光度数值均在之间并没有出现明显波动直观得出野菊花提取物在、、、浓度下对铜绿假单胞菌的生长并没有较大影响。图对菌密度影响对绿脓菌素产量影响铜绿假单胞菌在受QS系统的调控能产生绿脓素是一种胞外毒力因子。可通过测其OD来判定对铜绿假单胞菌绿脓素合成的抑制情况。图中号为空白对照组后面四组提取液浓度依次二倍减小。直观得出浓度下吸光度值最小产生绿脓素量最小与浓度下吸光度的值几乎持平在浓度条件下吸光度值较前三组明显增大。故可知野菊花提取物对铜铝假单胞菌的群体感应有抑制作用。图对绿脓菌素产量影响对铜绿假单胞菌生长曲线影响由图可知共组数据号为空白对照样。其余组提取物溶液、、、、浓度依次递减。直观判断图中条曲线基本重合并无较大偏差故可推断出野菊花提取物对铜绿假单胞菌的生长周期无明显影响。铜绿假单胞菌生长周期较短其中h为调整期h为对数期h为稳定期h为衰亡期。图对铜绿假单胞菌生长曲线影响对弹性蛋白酶产量影响铜绿假单胞菌的QS系统是细菌胞间交流系统的典型代表。Passador等发现铜绿假单胞菌细胞间的信号传递且QS信号因子LasR能激活重要的毒力因子弹性蛋白酶。弹性蛋白酶是一类分解不溶性弹性蛋白的蛋白水解酶。图中号为空白对照剩下组依次添加提取物浓度二倍递减溶液。由图直观可知空白组OD值最大产弹性蛋白酶量最大其余组随着浓度递减吸光度值递增产弹性蛋白酶依次增大。故野菊花提取物对铜绿假单胞菌的群体感应有抑制作用。图对弹性蛋白酶产量影响对生物被膜的定量铜绿假单胞菌能形成生物膜对感染治疗带来了极大挑战因为在生物膜中生长的细菌对宿主免疫系统有极大抗性并且对多种抗生素表现出耐药的特性。图中号为空白对照其吸光度值最大产生生物被膜量最大其余四组随着添加提取物浓度的依次减小其生物被膜的吸光度值递增表示其生物被膜的产量也递增其中在与浓度条件下吸光度值几乎相等其生物被膜产量也应相近。推出野菊花提取物对铜铝假单胞菌的群体有抑制作用浓度较低时与活性成分量无较大关系。对生物被膜产生情况图可知左边添加高浓度提取液右图为对照。由图可见在不添加提取物的条件下PA能形成紧密、完整的生物被膜但在野菊花提取物的作用下能破坏群体感应使形成的生物被膜不完整对泳动能力影响图中号为空白对照其余组添加提取物浓度二倍递减。由图可知空白对照组泳动性最强其余组泳动能力依次增强提取物溶液对PA的泳动性有影响。对丛动能力影响图中号为空白对照其余组添加提取物浓度二倍递减。由图可知空白对照组丛动性最强其余组的丛动能力相差不大但与对照组之间差距显示提取物溶液对PA的丛动性有影响。图对生物被膜的定量图对生物被膜产生情况图对泳动能力影响图对丛动能力影响讨论铜绿假单胞菌是临床上非常常见的致病菌感染率极高对抵抗力差类人群此菌极有可能带来严重后果所以治疗药物的研发显得尤为重要。但医药界当前面临一个普遍的难题即细菌的耐药性越来越明显导致抗生素作用越来越狭窄于是新型药物的研发逐渐成为研究的热点和难点。近年来大量研究证实细菌能自发产生、释放一些特定的信号分子并能感知其浓度变化来调节微生物的群体行为称为群体感应QuorumSensing。近年以抑制QS系统为靶点从而达到抑制细菌致病性为目标的新型抗生素的研究已成为生物医学领域的研究热点。近年来研究相继在多种天然植物中发现了QSI的存在。野菊花属中医药材化脓解毒药效堪奇并且价格低廉原材料易得且其提取物提取方便机具研究价值。从本研究中可以发现野菊花的活性物质中的一种或多种物质确实能在一定程度上抑制铜绿假单胞菌的群体感应也能在一定程度上抑制紫色杆菌与信号分子CHSL间的交流。从而在不影响菌体正常生长的前提下达到人们所预期的效果。在传统中医药材提取活性成分作为新型药物的研究对象已逐渐成为新的研究潮流。而本实验更加坚定的证明了这一方向的可行性。也应该在中药库里研究更多的传统药材找到更新的研究方向造福人类。参考文献肖骏、沈立新、赵琳、武玉婷、段康民*郭俏*半枝莲对铜绿假单胞菌群体感应系统的抑制作用A中国抗生素杂志,年月第卷第期)KohlerT,GuanellaR,CarletJ,etalQuorumsensingdependentvirulenceduringPseudomonasaeruginosacolonisationandpneumoniainmechanicallyventilatedpatientsJThorax,,():KohlerT,PerronGG,BucklingA,etalQuorumsensinginhibitionselectsforvirulenceandcooperationinPseudomonasaeruginosaJPLoSPathog,,():eBendiakGN,RatjenFTheapproachtoPseudomonasaeruginosaincysticfibrosisJSeminRespirCritCareMed,,():BodeyGP,BolivarR,FainsteinV,etalInfectionscausedbyPseudomonasaeruginosaJRevInfectDis,,(MarApr):KochC,HoibyNPathogenesisofcysticfibrosisJLancet,,():LeeB,SchjerlingCK,KirkbyN,etalMucoidPseudomonasaeruginosaisolatesmaintainthebiofilmformationcapacityandthegeneexpressionprofilesduringthechroniclunginfectionofCFpatientsJAPMIS,,():BrazilianNationalGenomeProjectConsortium.ThecompletegenomesequenceofChromobacteriumviolaceumrevealsremarkableandexploitablebacterialadaptabilityJ.PNAS():mdashLatifiA,WinsonMK,FoglinoM,etalMultiplehomologuesofLuxRandLuxIcontrolexpressionofvirulencedeterminantsandsecondarymetabolitesthroughquorumsensinginPseudomonasaeruginosaPAOJMolMicrobiol,,():)PassadorL,CookJM,GambelloMJ,etalExpressionofPseudomonasaeruginosavirulencegenesrequirescelltocellcommunicationJScience,,():GreenbergEP.TinyteamworkJ.Nature:KohKH,ThamFYScreeningoftraditionalChinesemedicinalplantsforquorumsensinginhibitorsactivityJJMicrobiolImmunolInfect,,():)VandeputteOM,KiendrebeogoM,RasamiravakaT,etalTheflavanonenaringeninreducestheproductionofquorumsensingcontrolledvirulencefactorsinPseudomonasaeruginosaPAOJMicrobiology,,():VandeputteOM,KiendrebeogoM,RajaonsonS,etalIdentificationofcatechinasoneoftheflavonoidsfromCombretumalbiflorumbarkextractthatreducestheproductionofquorumsensingcontrolledvirulencefactorsinPseudomonasaeruginosaPAOJApplEnvironmMicrobiol,,():PAGE

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