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灵芝多糖和多肽抗氧化能力研究.doc

灵芝多糖和多肽抗氧化能力研究

東門涙
2019-03-26 0人阅读 举报 0 0 0 暂无简介

简介:本文档为《灵芝多糖和多肽抗氧化能力研究doc》,可适用于领域

灵芝多糖和多肽抗氧化能力研究StudyonantioxidantcapacityofpolysaccharidesandpolypeptidesformGanodermalucidum摘要:本实验采用DPPH体系、氮蓝四唑(NBT)光化还原法以及抗坏血酸mdashmdash体系法对不同条件下提取的灵芝中多肽和多糖清除DPPH、和middotOH自由基的能力测定。结果表明,用碱性蛋白酶酶解灵芝所得到的多糖溶液的清除效果比超声法提取的灵芝多糖溶液的清除效果好而用超声法提取的灵芝多肽溶液的清除效果比用碱性蛋白酶酶解灵芝所得到的多肽溶液的清除效果好。综合三种酶解法对DPPH、middot自由基、bullOH的清除效果碱性蛋白酶酶解灵芝的清除效果最好纤维素酶次之木瓜蛋白酶相对最差。关键词:灵芝提取液清除DPPH超氧自由基羟基自由基AbstractEffectsofremovingtheDPPHthesuperoxideradicalandhydroxylradicalwithpolysaccharidesandpolypeptidesfromGanodermaLucidum,extractedunderdifferentconditions,weredeterminedbythemethodofthesystemofDPPH,NBTphotoreduction,systemofascorbicacidCuHOTheresultsshowedthattheremovingeffectsofEnzymaticGanodermalucidumpolysaccharidesbyAlkalineProteaseisbetterthantheremovingeffectsofEnzymaticGanodermalucidumpolysaccharidesbyultrasonic,theremovingeffectsofEnzymaticGanodermalucidumpolysaccharidesbyultrasonicisbetterthanttheremovingeffectsofEnzymaticGanodermalucidumpolysaccharidesbyAlkalineProteaseEffectsofremovingtheDPPHthesuperoxideradicalandhydroxylradicalwithpolysaccharidesandpolypeptides,AlkalineProteasersquoSisbest,Cellulosersquosisfollowed,PapainlsquosisrelativeWorst引言研究的背景和意义自由基又叫游离基它是由单质或化合物的均裂(HomdyticFission)而产生的带有未成对电子的原子或基团。它的单电子有强烈的配对倾向倾向于以各种方式与其他原子基团结合形成更稳定的结构因而自由基非常活泼成为许多反应的活性中间体。自由基是机体在氧化反应中不可避免而产生的ldquo副产物rdquo。自由基具有高度活性可以直接或者间接地发挥着强氧化的作用在人体中可能会攻击其他处于稳定结构的分子易引起连锁反应。自由基可与生物体内的许多物质如脂肪酸、蛋白质等作用夺取它们的氢原子造成相关细胞的结构与功能的破坏更重要的是其氧化产物和中间产物会伤害生物膜、酶、维生素、蛋白质及活细胞功能其中一些还被人物是致癌物质超氧阴离子自由基(middot):超氧阴离子自由基是生物体内最主要的自由基。用EPR仪可以得到middot的电子顺磁共振波谱。生物体内无论是在非酶反应或酶反应中都可以通过接收电子的方式氧化生成middot而middot又可诱导体内超氧化物歧化酶(SOD)使middot及时得到清除。羟自由基(bullOH):羟自由基(bullOH)化学性质极为活泼可与多种有机物或无机物反应反应速度快。在水中寿命极短。采用自旋捕捉法可以间接检测出bullOH的存在。在体内有些羟化类药物醌型抗肿瘤药物及某些生物酶如:黄嘌吟氧化酶、前列腺素合成酶等可以产生bullOH一些物理因素如电离辐射光照等也可产生bullOH。加铁离子结合剂如:脱铁酶可以减轻或消除bullOH。DPPH法于年被提出广泛用于定量测定生物试样和食品的抗氧化能力。此法是根据DPPH自由基有单电子在nm处有一强吸收其醇溶液呈紫色的特性。当有自由基清除剂存在时由于与其单电子配对而使其吸收逐渐消失其褪色程度与其接受的电子数量成定量关系因而可用分光光度计进行快速的定量分析。比起细菌学、病毒学等很多学术领域来说自由基还是一门比较年轻的学科。随着生命科学的飞速发展英国人Harman于年提出了自由基学说。该学说认为自由基攻击生命大分子造成组织细胞损伤是引起机体衰老的根本原因也是诱发肿瘤等恶性疾病的重要起因其中的观点被越来越多的实验所证明。人类对自由基的研究开始于二十一世纪初最初的研究主要是自由基的化学反应过程随后自由基知识渗透到生物学领域。虽然在二十世纪六十年代人们已经认识到自由基与疾病的密切关系但由于受到技术方法的限制研究进展缓慢。研究短寿命自由基的技术有了新的突破推动了生物学的迅速发展形成了一个以化学、物理学和生物医学相结合的蓬勃发展的新领域即自由基生物学、医学领域。由此可知自由基研究没有很长的历史但是现在其自由基所显示出很大的危害所以人们都在努力寻求清除自由基的各种方法。灵芝是担子菌纲多孔菌科灵芝属真菌是拥有数千年药用历史的珍贵药材。灵芝药用在我国已有多年的历史被历代医药家视为滋补强壮、扶正固本的神奇珍品。公元前世纪周代《列子》中就有提到ldquo朽壤之上有菌芝者rdquoldquo煮白沸其味清芳。饮之目明、脑清、心静、肾尖其宝物也rdquo。《神农本草经》记载灵芝具有扶正固本、滋补强壮、延年益寿等功效。灵芝多糖作为灵芝的主要功效成分之一具有抗氧化、抗肿瘤、提高免疫、降血糖引、抗炎等多种药理作用。年已知灵芝属真菌约余种分布最广的为赤芝其次为紫芝还有树舌、松杉灵芝和簿树芝等均供药用。经过大量临床研究灵芝对神经衰弱、高脂血症、冠心病心绞痛、心律失常、克山病、高原不适症、肝炎、出血热、消化不良、气管炎等各有不同程度的疗效。需要注意的是仅仅通过用灵芝食疗这种方法并不能起到明显的防治效果建议可用决明子、黑乌龙等组方为决乌汤茶这种中医经典组方茶对高血脂等症可以起到很好的防治效果。药理研究证明灵芝有多方面的生物活性。研究现状和分析近年来人们对于各种人工合成用来清除自由基的物质进行了广泛的研究。大致可以分为这几类:植物及其提取物、黄酮类物质、肽、自由基清除剂、糖及其衍生物、美拉德反应产物、硒、维生素c、其他(如茶多酚、食用菌、虾青素)研究表明多肽不仅仅易被消化吸收.而且某些具有活性的多肽还同时具有防病、治病、调节机体生理机能的功效而这些功效是前体蛋白质所不具有的。从牛乳、蛋黄、猪肉等动物源食品和大豆、玉米等植物蛋白资源中酶解得到抗氧活性肽均具有清除自由基的能力。虽然清除自由基的糖及其衍生物相关研究倍受关注但其对自由基清除的机理仍存在许多未知.推测其可能存在的机制:()多糖分子中的羟基基团与氢自由基反应抽提氢()羟自由基与自由氨基取代基(反应形成稳定的大分子自由基()从溶液中吸收H质子形成再与羟自由基发生一系列的反应。灵芝含有丰富的多醣、多肽类化合物研究表明灵芝多糖具有抗氧化的作用和清除自由基的能力并且其清除能力与多糖的浓度存在明显的量效关系。研究基本思路今年来对灵芝的开发利用越来越多随着科技的进步灵芝的综合利用进一步得到加强。灵芝中含有多种天然产物如多肽类化合物具有优良的抗自由基、抗氧化、抗衰老、抗菌抑菌、杀虫等作用。本实验用DPPH体系、氮蓝四唑(NBT)光化还原法以及抗坏血酸mdashmdash体系法通过紫外分光光度法分别对酶解法和普通超声法提取灵芝提取液进行DPPH清除率、超氧自由基的清除率和羟自由基的清除率测定对其抗氧化性能进行了研究并对两种灵芝提取液清除自由基的能力进行了比较。实验部分实验材料、试剂及主要仪器主要原料野生灵芝(采自杭州吴山粉碎后过目筛)主要化学试剂细胞色素C(CytC)无水乙醇、DPPH、核黄素、磷酸氢二钠(middot)、磷酸二氢钠()、甲硫氨酸、氮蓝四唑(NBT)、抗坏血酸(Vc)、硫酸铜()、过氧化氢()。所有试剂均为国产分析纯主要试剂的配置DPPH溶液配置:配置mgmLDPPH溶液:称量DPPHg用无水乙醇使其溶解并且定容至mL。PH为的磷酸钠缓冲溶液(Ⅰ)的配制(Phosphatebuffersaline,PBS):配制浓度为molL磷酸缓冲溶液middot:的体积比为:称取gmiddot蒸馏水溶解定溶至mL,称取g蒸馏水溶解定溶至mL从溶液中取mL从溶液中取mL混匀放于mL容器中PH为的磷酸钠缓冲溶液(Ⅱ)的配制(Phosphatebuffersaline,PBS):配制浓度为molL磷酸缓冲溶液middot:的体积比为:称取gmiddot蒸馏水溶解定溶至mL,称取g蒸馏水溶解定溶至mL从溶液中取mL从溶液中取mL混匀放于mL容器中核黄素溶液配制:配制molL核黄素溶液称取g核黄素用PH为的PHS溶解并定容至mL甲硫氨酸配制:配制molL甲硫氨酸溶液称取甲硫氨酸g用PH为为的PBS溶解并定容至mL棕色瓶保存氮蓝四唑(NBT)溶液的配制:配制molL氮蓝四唑溶液称取g氮蓝四唑(NBT)用mL无水乙醇可适当加热溶解用蒸馏水定容至mL,置于棕色瓶中低温保存抗坏血酸(Vc)溶液的配制:配制molL抗坏血酸(Vc)溶液用PH为的PBS溶解并定容至mL,置于棕色瓶低温保存过氧化氢()溶液配制:配制molL过氧化氢()溶液取的过氧化氢()mL用蒸馏水定容至mL置于棕色瓶中保存硫酸铜()溶液配制:配制molL硫酸铜()溶液称取g硫酸铜(),用蒸馏水溶解并定容至mL细胞色素C(CytC)溶液的配制:配制molL细胞色素C(CytC)溶液用PH为的PBS定容至mL置于棕色瓶中低温保存(现配现用)。主要仪器设备PB型Sartorius普及型PH计(北京赛多利斯仪器系统有限公司)METTLERAE型电子分析天平(梅特勒托利多仪器(上海)有限公司SC型鼓风电热恒温干燥箱(浙江省嘉兴市新塍电器厂)SKLH超声波清洗器(上海科导超声仪器有限公司)DKS电热恒温水浴锅(上海森信实验仪器有限公司)JD型光照度计(上海嘉定学联仪器表厂)UV紫外分光光度计及其配套设备(苏州岛津仪器有限公司)AEL电子天平(日产)移液枪(Thermo):muLmuL自制反应暗箱实验方法灵芝多糖和多肽的提取超声法提取多糖和多肽称取野生灵芝粉末grarr用浸提液(不同浓度乙醇)浸泡hrarr在一定温度下超声波浸提rarr抽滤rarr蒸发浓缩rarr加入mL乙醇rarr在℃冰箱中醇沉过夜rarr离心(rmin,min)rarr上清液用乙醇定容后得灵芝多肽溶液沉淀用乙醇定容并透析h后得灵芝多糖溶液。超声协同酶解法提取多糖和多肽称取野生灵芝粉末grarr加蒸馏水(按一定料液比)rarr超声波浸提(min,℃,功率W)rarr调节pHrarr加酶(碱性蛋白酶、纤维素酶、木瓜蛋白酶)rarr煮沸min(灭酶)rarr调pH至rarr抽滤rarr蒸发浓缩rarr滤液醇沉(:加乙醇)rarr离心(rmin,min)rarr上清液用乙醇定容后得灵芝多肽溶液沉淀用乙醇定容并透析h后得灵芝多糖溶液。灵芝中多糖含量的测定制作葡糖糖标准曲线rarr吸取灵芝多糖溶液rarr加水至mLrarr加苯酚溶液mL摇均rarr加浓硫酸mLrarr沸水浴加热minrarr取出冷却至室温rarr在nm下测吸光度rarr根据标曲算出多糖含量。灵芝中多肽含量的测定吸取灵芝多肽溶液rarr加和浓硫酸rarr消化rarr用浓硫酸定容rarr测定多肽含量。DPPH自由基的清除能力测定参考Wu等的方法并略作修改。mL的灵芝多糖溶液(~mgmL)与mL的mmolLDPPHmiddot溶液混合振荡室温下避光放置min在nm下测吸光值(Ai)。以mL相同浓度的样品和mL无水乙醇混合作为对照组(Aj)另外mLDPPH溶液和mL无水乙醇混合后测吸光值(Ac)。DPPHmiddot清除率()=-(Ai-Aj)Actimes超氧自由基middot清除率的测定甲硫氨酸作用于核黄素时可产生超氧离子自由基middot,middot可还原氮蓝四唑(NBT)使之转化为CNH而多肽及活性多糖类化合物可以抑制该反应故可依据抑制率高低来研究灵芝提取液对的清除效果。参照Beauchamp等的方法加以改进。反应在装有一支W的节能日光灯四周衬有铝箔的暗箱中进行调节反应物离灯的距离用光照度计测定其受光强度为lx。ml反应液中核黄素的浓度为molL甲硫氨酸浓度为molL。在℃光照min核黄素即因光化学反应产生middot。然后在此体系中加入NBT使其浓度达到molL。光照核黄素产生的middot能将NBT还原为蓝色的产物以不光照的试液作校正经过扫描后在nm吸光度值最大并在此测得其吸光度为A可表示middot的含量。加入黄酮后能清除middot来抑制NBT的还原测得此时的吸光度为AAA表示middot的减少量则清除率可计算为(每种样品平行做~组):清除率=(AA)A*羟自由基middotOH清除率的测定参照文献的方法,加以改进,具体方法如下:在生理浓度及存在下,用抗坏血酸作为还原剂,能与中间生成的反应,使还原为,生成middotOH,推测middotOH自由基同样能使cyt(I)转化为氧化型cyt(lowast),其反应原理如下:ascorbaterarrdehydroascorbate接着Cu与抗坏血酸中间生成的HO反应:rarrCumiddotOH根据自由基能使还原型的细胞色素Ccytc(II)氧化的原理:GSmiddotcytc(II)middotOH=cytc(III)还原型细胞色素C(II)呈浅红色而氧化型呈浅黄色。前者在nm处有尖锐吸收峰而后者不明显。因此可用比色分析通过测定还原型细胞色素C(II)含量的变化了解middotOH的生成。将细胞色素C、Vc、PH的PBS按一定比例配成mL反应液用紫外分光光度计在nm处测得吸光度值为A。不改变反应液中细胞色素C和抗坏血酸的浓度再在反液中加入和。溶液从浅红色立即转变为浅黄色在nm处测得吸光度值为AAA可表示middotOH生成量。在反应液中加入松针中提取液清除middotOH自由基在nm处测得吸光度值为AAA表示反应体系中最后剩余middotOH自由基的含量则清除率可计算为(每种样品平行做~组):清除率=(AA)(AA)(AA)*=(AA)(AA)*结果与讨论不同方法提取的灵芝多糖和多肽对DPPH自由基清除作用的比较灵芝多糖溶液液对DPPH的清除率比较将上述、所制备的灵芝多糖提取液进行实验按方法进行DPPH清除率比较结果见下表、表、图。表格碱性蛋白酶酶解法多糖提取液对DPPH的清除率样品毫升数mL浓度mugmL清除率plusmnplusmnplusmnplusmnplusmnplusmn表格超声法多糖提取液对DPPH的清除率样品毫升数mL浓度mugmL清除率plusmnplusmnplusmnplusmnplusmnplusmn灵芝多糖提取液对DPPH的清除效果如上表、表、图所示:随着提取物质量浓度的增加总体呈平缓上升的趋势当浓度达到mugmL的时候超声协同碱性蛋白酶酶解法提取的灵芝多糖对DPPH的清除率达随后清除率稍有下降当浓度达到mugmL的时候超声法提取的灵芝多糖对DPPH的清除率达。见图所示当浓度小于mugmL时在同一质量浓度时碱性蛋白酶酶解法灵芝多糖提取液的清除率比超声法灵芝提取液要高一些。灵芝多肽提取液对DPPH的清除率比较将上述、所制备的灵芝多肽提取液进行实验按方法进行DPPH清除率比较结果见下表、表、图。表格碱性蛋白酶酶解法多肽提取液对DPPH的清除率样品毫升数mL浓度mgmL清除率plusmnplusmnplusmnplusmnplusmnplusmn表格超声法多肽提取液对DPPH的清除率样品毫升数mL浓度mgmL清除率plusmnplusmnplusmnplusmnplusmnplusmnplusmn灵芝多肽提取液对DPPH的清除效果如上表、表、图所示:随着提取物质量浓度的增加总体呈上升的趋势。超声法提取的灵芝多肽对DPPH的清除率随着浓度增大快速增加当浓度达到mgmL的时候清除率达后随着浓度增大清除率增速趋于平缓超声协同碱性蛋白酶酶解法提取的灵芝多肽对DPPH的清除率随浓度上升比较平缓当浓度达到mgmL的时候清除率达随后清除率增速更慢。见图所示超声提取的灵芝多肽溶液比超声协同酶解法提取的灵芝多肽溶液在同一质量浓度时清除率高。不同方法提取的灵芝多糖和多肽对middot自由基的清除作用的比较实验灵芝多糖提取液对自由基的清除率比较将上述、所制备的灵芝多糖提取液进行实验按方法进行middot清除率比较结果见下表、表、图。表格碱性蛋白酶酶解法多糖提取液对超氧自由基的清除率样品毫升数mL浓度mugmL清除率plusmnplusmnplusmnplusmnplusmnplusmnplusmn表格超声法多糖提取液对超氧自由基的清除率样品毫升数mL浓度mugmL清除率plusmnplusmnplusmnplusmnplusmnplusmnplusmn灵芝多糖提取液对超氧自由基的清除效果如上表、表、图所示:超声协同碱性蛋白酶酶解法提取的灵芝多糖溶液在mugmL时对的清除率达到顶峰为随后快速下降超声法提取的灵芝多糖溶液在mugmL时对的清除率达到顶峰为。随后缓慢下降在物质浓度达到mugmL之前超声协同碱性蛋白酶酶解法提取的灵芝多糖溶液对的清除率在同一质量浓度下比超声法提取的灵芝多糖溶液对的清除率高在物质浓度达到mugmL之后则相反。灵芝多肽提取液对超氧自由基的清除率比较将上述、所制备的灵芝多肽提取液进行实验按方法进行middot清除率比较结果见下表、表、图。表格碱性蛋白酶酶解法多肽提取液对超氧自由基的清除率样品毫升数mL浓度mgmL清除率plusmnplusmnplusmnplusmnplusmnplusmnplusmn表格超声法多多肽提取液对超氧自由基的清除率样品毫升数mL浓度mgmL清除率plusmnplusmnplusmnplusmnplusmnplusmnplusmn灵芝多肽提取液对超氧自由基的清除效果如上表、表、图所示:随着提取物质量浓度的增加总体呈上升的趋势超声法提取的灵芝多肽溶液对自由基的清除率随浓度增大而较快增大而超声协同碱性蛋白酶酶解法对自由基的清除率随浓度增大而缓慢增大但当浓度为mgmL时超声协同碱性蛋白酶酶解法对自由基的清除率达到最大为随后清除率略有下降如图在同一质量浓度下超声法提取的灵芝多肽溶液对自由基的清除率比超声协同碱性蛋白酶酶解法对自由基的清除率高。不同方法提取的灵芝多糖和多肽对middotOH自由基的清除作用的比较灵芝多糖提取液对middotOH自由基的清除率比较将上述、所制备的灵芝多糖提取液进行实验按方法进行清除率比较结果见下表、表、图。表格碱性蛋白酶酶解法多糖提取液对bullOH自由基的清除率样品毫升数mL浓度mugmL清除率plusmnplusmnplusmnplusmnplusmnplusmn表超声法多多糖提取液对middotOH自由基的清除率表格超声法多多糖提取液对bullOH自由基的清除率样品毫升数mL浓度mugmL清除率plusmnplusmnplusmnplusmnplusmnplusmn灵芝多糖提取液对middotOH自由基的清除效果如上表、表、图所示:随着提取物质量浓度的增加总体呈上升的趋势。超声协同碱性蛋白酶酶解法提取的灵芝多糖溶液对middotOH的清除率随质量浓度的增大而快速增大超声法提取的灵芝多糖溶液对middotOH的清除率随质量浓度的增大而缓慢增大如图在同一质量浓度下超声协同碱性蛋白酶酶解法提取的灵芝多糖对middotOH自由基的清除率比超声法提取的灵芝多糖溶液对middotOH自由基的清除率高。灵芝多肽提取液对middotOH自由基的清除率比较将上述、所制备的灵芝多肽提取液进行实验按方法进行清除率比较结果见下表、表、图。表格碱性蛋白酶酶解法多肽提取液对bullOH自由基的清除率样品毫升数mL浓度mgmL清除率plusmnplusmnplusmnplusmnplusmnplusmn表格超声法多多肽提取液对bullOH自由基的清除率样品毫升数mL浓度mgmL清除率plusmnplusmnplusmnplusmnplusmnplusmn灵芝多肽提取液对middotOH自由基的清除效果如上表、表、图所示:随着提取物质量浓度的增加总体呈上升的趋势。超声协同碱性蛋白酶酶解法提取的灵芝多肽溶液对middotOH的清除率随质量浓度的增大而缓慢增大超声法提取的灵芝多糖溶液对middotOH的清除率随质量浓度的增大而快速增大如图在同一质量浓度下超声法提取的灵芝多肽溶液对middotOH自由基的清除率比超声协同碱性蛋白酶酶解法提取的灵芝多糖溶液对middotOH自由基的清除率高。不同酶解法提取的灵芝多糖和多肽对自由基的清除作用的比较不同酶解法提取的灵芝多糖对自由基的清除作用的比较根据酶种类的不同实验得到了三种不同的超声协同酶解法所提取出来的灵芝多糖溶液。三种不同的灵芝多糖溶液在同体积条件下我们对其测定了DPPH、middot、middotOH三种自由基的清除率清除效果如图。由图可知在清除DPPH自由基的能力上碱性蛋白酶酶解法提取出来的灵芝多糖提取液的清除能力和纤维素酶酶解法提取出来的灵芝多糖提取液清除能力比较相近而木瓜蛋白酶酶解法提取出来的灵芝多糖提取液要弱于前两者在清除超氧自由基的能力上纤维素酶酶解法提取出来的灵芝多糖提取液清除能力与木瓜蛋白酶酶解法提取出来的灵芝多糖提取液的清除能力要相近而碱性蛋白酶酶解法提取出来的灵芝多糖提取液的清除能力明显高于前两者在清除middotH自由基的能力上碱性蛋白酶酶解法提取出来的灵芝多糖提取液的清除能力最好其次是纤维素酶酶解法提取出来的灵芝多糖提取液最后是木瓜蛋白酶酶解法提取出来的灵芝多糖提取液不同酶解法提取的灵芝多糖对自由基的清除作用的比较根据酶种类的不同实验得到了三种不同的超声协同酶解法所提取出来的灵芝多肽溶液。三种不同的灵芝多肽溶液在同体积条件下我们对其测定了DPPH、、middotOH三种自由基的清除率清除效果如图。在清除DPPH自由基的能力上碱性蛋白酶酶解法提取出来的灵芝多肽提取液的清除能力要稍高于纤维素酶酶解法提取出来的灵芝多肽提取液清除能力而木瓜蛋白酶酶解法提取出来的灵芝多肽提取液的清除能力要弱于前两者在清除middot自由基的能力上碱性蛋白酶酶解法提取出来的灵芝多肽提取液的清除能力最好其次是木瓜蛋白酶酶解法提取出来的灵芝多肽提取液最后是纤维素酶酶解法提取出来的灵芝多肽提取液清除能力在清除middotH自由基的能力上碱性蛋白酶酶解法提取出来的灵芝多肽提取液的清除能力最好木瓜蛋白酶酶解法提取出来的灵芝多肽提取液和纤维素酶酶解法提取出来的灵芝多肽提取液清除能力相近。结论本实验采用DPPH体系、氮蓝四唑(NBT)光化还原法以及抗坏血酸mdashmdash体系法测定不同条件下提取灵芝中多肽和多糖清除DPPH、middot和middotOH自由基的能力。酶解法和超声法提取的灵芝多糖溶液对DPPH自由基的清除能力的实验碱性蛋白酶提取出来的灵芝多糖溶液的清除效果比超声法提取出来的灵芝多糖溶液的清除效果好随着质量浓度的增加清除能力两种都不断增强但最高只能达到左右酶解法和超声法提取的灵芝多肽溶液对DPPH自由基的清除能力的实验超声法提取出来的灵芝多肽溶液的清除效果明显比碱性蛋白酶提取出来的灵芝多肽溶液的清除效果好随着质量浓度的增加清除能力两种都不断增强最高可达左右。酶解法和超声法提取的灵芝多糖溶液对middot自由基的清除能力的实验碱性蛋白酶酶解法所提取出来的灵芝多糖所表示出来的清除率最大可达到超声法提取出来的灵芝多糖所表示出来的清除率最大可达碱性蛋白酶提取出来的灵芝多糖溶液的清除效果比超声法提取出来的灵芝多糖溶液的清除效果好酶解法和超声法提取的灵芝多肽溶液对middot自由基的清除能力的实验超声法提取出来的灵芝多肽溶液的清除效果明显比碱性蛋白酶提取出来的灵芝多糖溶液的清除效果好随着质量浓度的增加清除能力两种都不断增强碱性蛋白酶提取出来的灵芝多糖溶液的清除效果最高可达超声法提取出来的灵芝多肽溶液的清除效果最高可达酶解法和超声法提取的灵芝多糖溶液对middot自由基的清除能力的实验碱性蛋白酶酶解法所提取出来的灵芝多糖所表示出来的清除率最大可达到超声法提取出来的灵芝多糖所表示出来的清除率最大可达碱性蛋白酶提取出来的灵芝多糖溶液的清除效果比超声法提取出来的灵芝多糖溶液的清除效果好酶解法和超声法提取的灵芝多肽溶液对超氧自由基的清除能力的实验超声法提取出来的灵芝多肽溶液的清除效果明显比碱性蛋白酶提取出来的灵芝多糖溶液的清除效果好碱性蛋白酶酶解法所提取出来的灵芝多糖所表示出来的清除率最大可达到超声法提取出来的灵芝多糖所表示出来的清除率最大可达总之在清除DPPH、middot自由基、middotOH中用碱性蛋白酶酶解灵芝所得到的多糖溶液的清除效果比超声法提取的灵芝多糖溶液的清除效果好而用超声法提取的灵芝多肽溶液的清除效果比用碱性蛋白酶酶解灵芝所得到的多肽溶液的清除效果好。综合三种酶解法对DPPH、middot自由基、middotOH的清除效果碱性蛋白酶酶解灵芝的清除效果最好纤维素酶次之木瓜蛋白酶相对最差PAGE

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