HPLC常见故障及排除方法讨论

丁香园电子期刊 2004年 12月 第六期 1 HPLC 常见故障及排除 方法 快递客服问题件处理详细方法山木方法pdf计算方法pdf华与华方法下载八字理论方法下载 讨论 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 技术讨论版 Kinginsun: HPLC 是做分析最常用的仪器，你在实验中遇到了什么问 题 快递公司问题件快递公司问题件货款处理关于圆的周长面积重点题型关于解方程组的题及答案关于南海问题 、怎么解决的，请拿出来与 大家分享。 luxinyanprc: 1.色谱柱跑干了，处理方法：将贮液瓶装入重蒸水，首先按 purge 键，将柱前气柱排 出，若无法排出，可将色谱柱前拆下，用注射器抽吸。待柱前气体排空后，连接色谱柱，用 水高低流速交替冲洗色谱柱，直至柱压稳定为止。 2.基线不稳，有静电，处理方法：检查接地是否良好。 3.峰面积变化非常大，处理方法：检查是否进样阀堵塞。 4.基线突然提高，变粗，处理方法：检查样品池能量，若低于正常值，说明 检测 工程第三方检测合同工程防雷检测合同植筋拉拔检测方案传感器技术课后答案检测机构通用要求培训 器污 染。 5.柱压变动范围较大，处理方法：多为进气泡。高低流速交替冲洗。 6.柱效或峰形突然变差，处理方法：更换预柱。 ☆叶落无声☆: 1.塔板数低 ：色谱柱选择不对，二次保留、峰形不好的影响 2.色谱柱易变性：色说柱选择不对，二次保留的影响 3.色谱柱寿命短：色谱柱选择不对，样品需预处理（PH<3 或 PH>7） 4.保留值变化：色谱柱平衡不够，流动相比例改变 5.出现新的干扰峰：初始分离不够或初始样品无代表性 chenhb521: 选择波长要从以下几个方面考虑： 1.检测波长要大于溶剂截止波长。如果所选择的波长下溶剂有很强的吸收当然是不合 适的。溶剂有强吸收后，基线抬高，减小检测的线性范围而且会加大基线噪声，对溶质的检 测灵敏度下降。 2.对各组分都要有适当的吸收。一般是不可能做到的。所以只要选择一个对大多数组 分都有较大吸收的波长就可以了。 3.外标法定量时，要选择被测组份最大吸收波长。 254nm 对常见的共轭结构和羰基官能团都有吸收。对饱和基团也有弱的吸收。而对于 常见的乙腈、甲醇的透过率很高。是在不知道用什么波长时最理想的试验波长。 dxycn112: HPLC 故障及排除方法: 诊状 可能的原因 解 决 方 法 1.柱温变化 柱恒温 2.等度与梯度间未能充分平衡 至少用 10 倍柱体积的流动相平 衡柱 3.缓冲液容量不够 用>25mmol/L 的缓冲液 (一)保留时间变 化 4.柱污染 每天冲洗柱 丁香园电子期刊 2004年 12月 第六期 2 5.柱内条件变化 稳定进样条件,调节流动相 6.柱快达到寿命 采用保护柱 1.流速增加 检查泵,重新设定流速 2.样品超载 降低样品量 3.键合相流失 流动相 PH 值保持在 3~7.5 检查 柱的方向 4.流动相组成变化 防止流动相蒸发或沉淀 (二)保留时间缩 短 5.温度增加 柱恒温 1.流速下降 管路泄漏,更换泵密封圈,排除 泵内气泡 2.硅胶柱上活性点变化 用流动相改性剂,如加三乙胺, 或采用碱至钝化柱 3.键合相流失 同前(二)3 4.流动相组成变化 同前(二)4 (三)保留时间延 长 5.温度降低 同前(二)5 1.样品体积过大 用流动相配样,总的样品体积小 于第一峰的 15% 2.样品溶剂过强 采用较弱的样品溶剂 3.柱塌陷或形成短路通道 更换色谱柱,采用较弱腐蚀性条 件 4.柱内烧结不锈钢失效 更换烧结不锈钢,加在线过滤 器,过滤样品 (四)出现肩峰或 分叉 5.进样器损坏 更换进样器转子 1.进样阀残余峰 每次用后用强溶剂清洗阀,改进 阀和样品的清洗 2.样品中未知物 处理样品 (五)鬼峰 3.柱未平衡 重新平衡柱,用流动相作样品溶 剂 (尤其是离子对色谱) 丁香园电子期刊 2004年 12月 第六期 3 4.三氟乙酸(TFA)氧化(肽谱) 每天新配,用抗氧化剂 5.水污染(反相) 通过变化平衡时间检查水质量， 用 HPLC 级的水 1.气泡(尖锐峰) 流动相脱气,加柱后背压 2.污染(随机噪声) 清洗柱,净化样品,用 HPLC 级试 剂 3.检测器灯连续噪声 更换氘灯 4.电干扰(偶然噪声) 采用稳压电源,检查干扰的来源 (如水浴等) (六)基线噪声 5.检测器中有气泡 流动相脱气,加柱后背压 1.柱超载 降低样品量,增加柱直径采用较 高容量的固定相 2.峰干扰 清洁样品,调整流动相 3.硅羟基作用 加三乙胺,用碱致钝化柱增加缓 冲液或盐的浓度降低流动相 PH 值,钝化样品 4.同前(四)4 同前(四)4 5.同前(四)3 5.同前(四)3 6.死体积或柱外体积过大 连接点降至最低,对所有连接点 作合适调整,尽可能采用细内径 的连接管 (七)峰拖尾 7.柱效下降 用较低腐蚀条件,更换柱,采用 保护柱 1.进样体积过大 同(四)1 2.在进样阀中造成峰扩展 进样前后排出气泡以降低扩散 3.数据系统采样速率太慢 设定速率应是每峰大于 10 点 (八)峰展宽 4.检测器时间常数过大 设定时间常数为感兴趣第一峰 半宽的 10% 丁香园电子期刊 2004年 12月 第六期 4 5.流动相粘度过高 增加柱温,采用低粘度流动相 6.检测池体积过大 用小体积池,卸下热交换器 7.保留时间过长 等度洗脱时增加溶剂含量也可 用梯度洗脱 8.柱外体积过大 将连接管径和连接管长度降至 最小 9.样品过载 进小浓度小体积样品 studywang: 1、开泵后压力即升高至最高限度，经过对色谱柱前，色谱柱，色谱柱后的分段测试， 确定为检测池堵塞。 2、换检测波长后，色谱峰面积比以前做的小很多，怀疑进样环或管路漏夜，经检查， 排除，最后确定为，检测波长的显示值和实际值不符。 张药师: 1.涡流扩散（Eddy diffusion） 流动相碰到较大的固体颗粒，就像流水碰到石头一样产生涡流。如果柱装填得不均匀， 有的部分松散或有细沟，则流动相的速度就快；有的部位结块或装直紧密则流就慢，多条流 路有快有慢，就使区带变宽。因此，固相载体的颗粒要小而均匀，装柱要松紧均一，这样涡 流扩散小，柱效率高。 2.分子扩散（Molecular diffusion） 分子扩散就是物质分子由浓度高的区域向浓度低的区域运动，也称纵向分子扩散。要 减少分子扩散就要采用小而均匀的固相颗粒装柱。同时在操作时，如果流速太慢，被分离物 质停留时间长，则扩散严重。 3.质量转移（Mass transfer） 被分离物质要在流动相与固定相中平衡，这样才能形成较窄的区带。在液相色谱中， 溶质分子要在两个液相之间进行分配，或在固相上被吸附和解吸附均需要一定的时间。当流 速快时，转移速度慢，来不及达到平衡动相就向前移，这各物质的非平衡移动，使区带变宽。 4.动相流速 当流速太低时，分子扩散严重，特别是在气相色谱中尤为突出。如将理论塔板高度对 流速作图，理论塔板高度随流速增加而急速下降，当达到最低值时，流速再加大则质量转移 起主要作用，理论塔板高度又加大。在高效液相色谱中，流速稍快影响不大，但在凝胶过滤 色谱中，因为物质要渗透到凝胶内部，所以质量转移影响大，流速咖大会降低柱效率。 5.固定相颗粒大小 定相颗粒越小柱效率越高，对流动相流动的阻力越大，需要加大压力才能使它流动。 luckyfeng: 公司有断时间为了节约，使用蒸馏水作为流动相组分之一。结果那段时间色谱图极不 稳定，会出现一些杂峰。（花了好长时间才查出问题的原因） 所以，HPLC 所用试剂的级别一定要高，避免不必要的麻烦！ hope78: 由气味、景象和声音可以发现的问题。 丁香园电子期刊 2004年 12月 第六期 5 你需要运用你所有的感官去发现液相色谱的问题。你最好养成习惯，每天花上几分钟 运用你的感官（除了味觉）来“感觉”你的液相色谱是否存在问题，这样可以帮助你迅速找 到问题所在。例如：在你看到漏液之前，你可能首先闻到它的气味。大部分的问题是可以通 过眼睛看到。 诊状 可能原因 解 决 方 法 1、漏液 见前 A、溶剂的气味 2、溅出 a、检查废液瓶是否已满 b、找到溅出的部位并清洗干净 B、热气味 1、仪器过热 a、检查并调节通风设施 b、检查并调节温度设定 c、关掉仪器，查找维修手册 1、压力不正常 见前 2、柱温箱问题 a、检查并调节设定 b、参照用户手册 C、读数不正常 3、检测器灯失效 更换灯 1、压力超出极限值 a、检查是否阻塞 b、检查并调节极限值的设定 D、灯警告 2、其它警示灯 见用户手册 1、溶剂泄漏/溅出 找到并解决 E、警告音 2、其它警告音 见用户手册 1、轴承失效 见用户手册 2、润滑不够 进行恰当的润滑 F、刺耳的短音或长音 3、机械故障 见用户手册 hope78: 进样阀可能发生的问题 问题 可原因 解 决 方 法 1、转子密封损坏 更换或调整转子密封 A、手动进样阀，转动不灵 2、转子太紧 调整转子的松紧度 B、手动进样阀，载样困难 1、进样阀安装不当 重新安装 丁香园电子期刊 2004年 12月 第六期 6 2、定量环阻塞 清洗或更换定量环 3、进样器污染 清洗或更换进样器 4、管路阻塞 清洗或更换管路 1、无压力（或电源） 提供恰当的压力（电源） 2、转子太紧 调整转子的松紧度 C、自动进样阀，不能转动 3、进样阀安装不当 重新安装 1、阻塞 清洗或更换阻塞部件 2、机械故障 见随机维修手册 D、自动进样阀，其它问题 3、控制器故障 维修或更换控制器 Shyshll: A．HPLC 柱压过高： 1.拆去保护柱，看柱压是否还高，否则是保护柱的问题，若柱压仍高，再检查； 2.把色谱柱从仪器上取下来，如果压力仍然不降，则是管路堵塞，须清洗，如果压力 下降了，将柱子的进出口反过来接再仪器上，用 10 倍量柱体积的流动相冲洗柱子，如果柱 压仍不降，再检查； 3.更换柱子入口筛板，若柱压下降，说明溶剂获样品中含有固体颗粒，若柱压还高， 可在进样器与保护柱之间接一个在线过滤器。 B．基线不稳，上下波动或漂移： 1．流动相有溶解气体；用超声波脱气 15-30 分钟； 2．单向阀堵塞，取下超声去除堵塞物； 3．泵密封损坏，造成压力波动，更换泵密封； 4．系统存在漏液点，确定漏液位置并维修； 5．流通池内有赃物或者杂质，清洗杂物； 6．柱后产生气泡，流通池出液口加负压调节器； 7．检测器没有设定在最大吸收波长处； 8．柱平衡慢，特别是流动相发生变化时。用中等强度的溶剂进行冲洗，更改流动相时， 在分析前用 10-20 倍体积的心流动相对柱子进行冲洗。 zhzhong: 1.检测信号出现倒峰，检查检测器与主机相连接是否有松动，可以把下重新连接。 2.夏季气温高，水容易生菌，要求 HPLC 所用重蒸水必须每天都要更新。 3.由甲醇换到流动相平衡时，压力先稍稍下降，然后慢慢回升，可能是混合池混合效 果不好，也可能是 B泵轻度堵塞。 4.色谱柱长期不用，应用甲醇冲洗 2h 以上后，拧上两端螺丝保存。 pengjian: 岛津机器易出现的毛病是： 1、压力不稳：单向阀堵塞，可拆下，用甲醇水超声；或漏液；管路过滤器损坏。 2、基线噪音变大：未接地线，可在检测器的外壳外接一根铁丝连地；灯能量不足，可 在 function 功能中查找灯的使用时间，或拆开机器外壳，观看紫外灯的强度 检测池污染， 丁香园电子期刊 2004年 12月 第六期 7 拆下柱子，用无体积连接器连接泵和检测器，用异丙醇小流速冲洗半个小时即可；流动相污 染或进气泡。 3、泵头有盐析出：应经常用 5％异丙醇清洗柱塞杆，否则易磨损。 4、进样口漏液：可能是 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 针头变形或损坏，使得进样器磨损，不好的针头应及时扔 掉。 该文仅供丁香园网站（www.dxy.cn/bbs）内部学习交流之用， 未经作者授权请勿做他用。