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红霉素在绿脓杆菌生物膜形成的抑制作用

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红霉素在绿脓杆菌生物膜形成的抑制作用 182 中山医科大学学报(Acad J JMs)199"/,1s(3):1跎~185 王一I 红霉素对绿脓杆菌生物膜形成的抑制作用。 饶 宪。 唐英 张扣兴 张天托 毕小刚 (中山医科大学附属第三医院内科;广州,510630) R 7 ,7/ J27 7 .t/- ¨ 摘 要 采用高教液相色谱分析的方法,槲定不同液度红霉索在琼脂培养基上生长的绿脓杆菌产生的藻 醴盐。结果显示:红霉索对绿脓杆菌产生藻酸盐物质有抑制作用,红霉索的液度在 1 mg/L、4 mg/L、16 mg/L 和64 mg...

红霉素在绿脓杆菌生物膜形成的抑制作用
182 中山医科大学学报(Acad J JMs)199"/,1s(3):1跎~185 王一I 红霉素对绿脓杆菌生物膜形成的抑制作用。 饶 宪。 唐英 张扣兴 张天托 毕小刚 (中山医科大学附属第三医院内科;广州,510630) R 7 ,7/ J27 7 .t/- ¨ 摘 要 采用高教液相色谱 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 的方法,槲定不同液度红霉索在琼脂培养基上生长的绿脓杆菌产生的藻 醴盐。结果显示:红霉索对绿脓杆菌产生藻酸盐物质有抑制作用,红霉索的液度在 1 mg/L、4 mg/L、16 mg/L 和64 mg/L时,抑击I率分别为 23 7%、65.2%、92 O%和92.5%。电子扫描显微镜观察.红霉索浓度为 50 mg/ L时.放在其溶灌中的医用塑料纤维片上,未见绿脓杆菌生物膜的形成。红霉豪是通过抑制绿脓杆菌产生藻醴 盐进而抑制其生物膜的形成。 主题词 红霉索/治疗应用 ;红霉索/药理学;但单胞苗,铜绿/药物作用 ;生物睦;藻醴盐 中田号 R 978 1:378 99 一 些细菌形成生物膜是造成慢性感染症治疗困 难的原因之一,细菌因长期生存的需要,在感染灶局 部,或俸内留置物的表面附着后,产生多糖.蛋 白质 复合物,互相牢固地凝集在一起,形成所谓的生物 膜,它有助于细菌抵抗外界 的攻击,在一定的条件 下.又游离出来,形成新的感染灶,反复感染 ,造成感 染症慢性化,更为难浩。绿脓杆菌是慢性呼吸道感 染中常见府原苗之一 ,其中粘液型绿脓杆菌形成生 物膜,它产生的多糖.蛋白质复合物的主要成分为藻 酸盐- ,作者就红霉素对绿脓杆菌产生藻酸盐的影 响进行了研究,并用电子扫描显微镜观察绿脓杆菌 生物膜的形成。 1 材料和方法 1.1 藻酸盐定量分析 1.1 1 藻酸盐的分 离提取 将粘液型绿脓杆菌标 准菌株 M310接种在对照组及台 l~64 mg/L不同 浓度红霉索(大 日本制药株式会社提供)的普通琼脂 培养基,37℃培养 24 h。收集菌落用生理盐水调制 苗液浓度为 McFar|and No.4,取部分苗液稀释后用 S。i商 system接种于普通琼脂培养基,37℃过夜培 养,进行存活苗落计数。苗液用 O.22/an微小过滤 器过滤灭菌,取 1 mL滤液按照丰田氏的改良法L2 进行藻酸盐分离提取,取 2o止 用高教液相色谱分 析(眦 )方法作藻酸盐的定量,浓度用标准曲线法 求得。 1 1 2 标准曲线配制 配制台标准藻酸盐 (sigma 产品)5 mg/L至 200 r~g/L不同浓度的溶 液.按上 法同条件下提取测定。求得值制成标准曲线。标准 曲线方程由标准藻酸盐的浓度对藻酸盐与外标峰面 积比值求得。 1 1 3 }Ⅱ LC 的洲定条件 高教液相色谱仪为 日 本岛津公司生产的 L 9A型系列,捡出器同为岛津 公司的sP 6Av型分光光度计。色谱柱为 日本分 光公 司制 造的 Hn印ak S1 LCl8,长 25 cm,内径 4.6 mm;移动相是氰化甲烷·水·醋酸丁脂(75:20: 5);流 速 为 1_2mL/min,紫 外 线 检 测 波 长 为 565 nm。 1.2 电子扫描显微镜观察生掏膜 试臂内生物膜制作根据小林氏的方法L4 稍作改 良。绿脓杆菌 M31O接种于普通琼脂培养基,37℃ 培养约 16 h.用 生理 盐水 调制 苗浓 度约 为 5× 109 CFU/L。红霉素浓度为 O、5 mg/L、50 mg/L,放 人 5 mtllx 5 rr吼 医用塑料纤维片.37℃培养 1周, 用 2 5%戊二醛 和 1%四氧化锇酸 双重 固定.在 60.0%~99 5%乙醇系列内脱水、临界点干燥后 .白 金蒸着,用日立 S-450电子扫描显微镜进行观察。 1.3 红霉素最低抑菌浓度fMIC)测定 用二倍稀释方法 配制 台不 同浓 度红 霉素的 MHA培养基(Mudler-Hinton agar),接种物为每点 tO4 cFU绿旅杆菌 M310、37℃ 培养 24 h,观察结 果。 ① 卫生都启动基金[Al68]资助项目;② 第一作者.1956年出生.男,讲师 维普资讯 http://www.cqvip.com 第3期 饶 宪.等 红霉衰对绿脓杆苗生物膜形成的抑制作用 183 1 4 统计学处理 藻酸盐测定数据用 ;±s. =5,实验组的各 数据采用与对照组配对,以t检验法进行检验。P< 0.05有显著性差异。 2 结 果 2.1 蘸酸盐谢定 藻酸盐在本实验条件下分离良好,分离保留时 间在 4 n,最 低检 测 浓度 为 1 25 r唱/L,在 200 mg/L浓度范围内线性关系良好,r=0 999,平 均回收率97.18%.日内误差与日同误差的变异系 数均小于5% 表 1 为标准藻酸盐的回收率及精密 度测定结果。 表 1 藻酸盐的回收率及精密度铡定 (mg/L.2-±s) 1)平均回收率(97.18%±3 12%);变异系数( )=3 21% 2.2 红霉素对绿脓杆菌产生藻酸盐的影响 宴验结果表明红霉索对绿脓杆菌 M31O产生藻 酸盐有良好的抑制性(袁 2) 绿脓杆菌 M310对红 霉索高度耐药,MIC为 512。 表 2 红莓豪对绿脓杆菌M310产生蕞酸盐的影响 1)蕞酸盐为每毫升古有1×l~cFu绿陆扦菌产生的量㈨ 2)表中P值均为与不古红霉衰的对照组比 2.3 红霉索对绿脓杆菌生物膜形成的影响 图1的电镜观察结果可班看到,对照组(A)绿 脓杆菌 M310菌株体表面产生 了许多多糖一蛋白质 复合物,互相凝集在一起.菌体的形态不清楚,形成 了所谓的生物膜。红霉索浓度为5 mg/L组(B),菌 体表面的多糖一蛋白质复合物较对照组有所减少,但 仍互相凝集在一起,形成了生物膜。红霉索浓度在 50 mg/L(C),医用塑料纤维片表面上的绿脓杆菌苗 体光滑,无多糖一蛋白质复合物产生.没有形成生物 膜,说髓红霉素确实能够抑制绿脓杆菌生物膜的形 成 ^对 姐 B 碍翥组( g u C红茸摩纽 I5O嗥‘LI 图l 电子扫描显微镜下不同浓度红霉索抑制绿脓杆菌生物膜的形态(图中线条=5 ) 维普资讯 http://www.cqvip.com 184 中山医科大学学报(Acad J SUMS)1997,18(3) 3 讨 论 肺、下呼吸道的一些基础疾患 ,如弥漫性泛细支 气管炎(diffusepanbronchlolitis)、慢性支气管炎、支气 管扩张等容易感染 ,绿脓杆菌是重要的病原苗之一, 绿脓杆菌有粘液型和非牯液型两种类型,非牯液型 绿脓杆菌不形成生物膜。绿脓杆菌生物膜的形成与 绿脓杆菌的粘液化有关,非牯液型的绿脓杆菌在渗 透压较高、氯化钠较多、磷酸盐较少等条件下 ,容易 转化为牯液型,在慢性呼吸道绿脓杆菌感染症,容易 分离培养出粘液型绿脓杆菌 ¨J。牯液型绿脓杆菌 产生的多糖一蛋白质复合物 由藻酸等构成,美国学者 Ljnker和Jones在 l966年首先报道从绿脓杆菌分离 出藻酸盐物质l 。细菌形成生物膜,产生耐药性,使 治疗困难。在慢性呼吸道感染症的治疗和预防上, 如何防止细菌生物膜的形成是非常重要的.尤其在 慢性绿脓杆菌感染症,如何防止绿脓杆菌的牯液化, 抑制生物膜形成中的重要物质藻酸盐的产生 ,在这 方面国外已进行了较广泛的研究.已有报告+采用实 验室试瞥法用14环的太环内脂类药物,联合应用环 丙沙星、氧氟抄星等畦诺酮类药物.对绿脓杆菌生物 膜进行研究t 。 红霉素对绿脓杆菌无杀菌或抑苗作用,因而理 论上单用红霉素对绿脓杆菌感染症无治疗效果。我 们的研究结果表明红霉素能够抑制绿脓杆菌生物膜 的形成,能够抑制牯液型绿脓杆菌产生藻酸盐,抑制 牯液的产生。红霉素抑制藻酸盐产生的机理,可能 在于抑 制了藻 酸盐形 成 过程 中的醇 GMD的活 性。9J。由于红霉素能够抑制绿脓杆菌生物膜的形 成,从而提高了敏感抗生素对慢性绿脓杆菌感染症 的治疗效果。在 日本实际上也在临床上将红霉素等 14环的太环内脂类药物用于弥漫性泛细支气管炎 等慢性气道感染症的治疗,也提高了弥漫性泛细支 气管炎患者的 5年生存率[t 。鉴于红霉素对绿脓 杆菌生物膜的抑制作用,它对防治慢性绿脓杆菌感 染症有一定的临床意义。 (车研究得到日本国琉球大学压学都第一内科斋藤厚 教授的指导和赞助,特此致谢) 参 考 文 献 i 一宫朋来,山崎透.耶须膀 内科领域;:土beifilm感染 症 化阜瘵法 领域,1994.10(8):1510 2 壁田正武.四方田千佳于,伊藤餐志男, 高速液髓 口7 b 亍74——}二土允 与食品中 7., 酸-y-b U r,厶 分析法 食衡蒜 ,1985,26(2):189 3 Yasuda H,Aiiki Y,Koga T,el al Interact/on between biofilms formed by P~eudmnonas H ,∽ and claritlLrtm~ycln Antimicmb Agars Cbemotber,1993,37 【9):1749 4 小林密行 Ps 出 aeruginosa 组畿付着.呼吸, 1992,11f5):568 5 大垣富隆,太田兄宏,小林宏行 细菌感染症一最新 化翠廉法 瘟床t微生物 ,1994,21(1)51 6 James M T,Sophia E P,Stephen J M En'dmrtmental 0 t n 霄hid1 it~quettce muc~id. ~ao.velq,,on pxeudmnonas aeruglr~sa PAO1.Iafect Immun,1991,59 【2J:471 7 Linker A,Je~es R S A neW ysaccharide resembling alginic acid isolated from pseu~xnonas J B&ol Chem,1966, 241(12)3845 8 大垣意隆.Bacterial biofih in ChlXTy~c ay infection感 染症稚蔷 ,1994,68(1):138 9 小#宏行 绿瞧菌氮遭感染症 寸 E:/亍 F 日胸, 1995,5a(4)267 lO工藤翔二,吾妻安 良太.14且瑗7 口于4 剖最期瘵 法 理揣 裸题.化卓癔法 领域,1994,10(7):1259 (1996-11-20收稿 1997—05—15咎回) 维普资讯 http://www.cqvip.com 第3期 饶 宪.等 红霉紊对绿脓杆菌生物膜形成的抑制作用 185 THE EFFECT OF ERYTHROMYCIN ON BIOFILM FoRMATIoN oF PSEUDoM.O N=AS AERUG 9S4 Rao Xian Tang Yingchun ng Kouxlng Zhang Tiantuo Bi Xiaoga~g (Depar'tmet~t of Interal Medicine,the Third Affiliated Flo ta] s_lI1 Yat-sen UnN~r,sity of Medical Science.Guangzhou.510630) .adginate pmrluced by P. r ”d鼢 w}1jch、vere incubated at culture media oontained dif[erent concentration of erythromycin(EM)was determined by high pe南㈣ ce liquid chromatngrapay(FIPLC)method The results showed that alglnote production by P aerugirmsa Was inhibited by EM .Inhibiting rates of EM at l mg/L,4 mg/L, 16 mg/L and 64 mg/Lw叮e 23 7% .65 2% ,92 O% and 92 5% The resuJtsfrom scanning etectmnmicroscopy showed no biofirm formation 0fP aerugirmsa∞ teflon pieceinEM solution(50mg/L).This s1udy demorzstrated thatthe biofi1m 0fP.aerugiTmsa 0outd beinhibited by EM th~ong hinhibited alginateproduction S~ eet headings drug effects~biofitm~algir ∞ trse;erythromycin/口hammmlcgy;peeudomonas aeruginosa/ ·简 讯 · 我国生存质量的测定和评价引起国际关注 人类与健康有关的生存质量的测定与应用是目前世界医学界关注的热点之一。随着疾病病谱、健康概念 和医学模式的转变,我国医疗卫生工作者开始重视生存质量的评价 ,但缺乏适宜的手段 、限于文化、语言和国 情差异、国外量表翻译成中文是否适用?各家 自行修改和增删国外量表,缺乏可比性和权威性。因而,我国急 需一套既有国际可比性,又适合中国文化、语言和国情的标准化量表。 中山医科大学和广东省卫生厅率先合作研究 WHOQOL 100中国广东版。卫生部也及时地领导开展全 国性协作研究。去年5月在卫生部领导下成立了由中山医科大学牵头,有上海医科大学 、西安医科大学、中国 医科大学、华西医科大学、北京老年医学研究所和协和医院等单位参加组成的“世界卫生组织生存质量量表中 国版”协作研究组。经过 1年努力,研制了普适性量表 WHOQOL一100中文版并经过大规模现场测试,又研制 了适用于肝癌患者、塘尿病患者和戒毒者 3种特异性量表以及系统整理 出改进生存质量资料统计分析的方 法。 1997年 4月 10日在香港举行的第 2届生存质量学术会议上,由卫生部领导的生存质量研究中国中心负 责人方积乾教授应逝报告了该项成果,当宣布目前的中国中心的学术水平和地位已和国际上早期的 15个中 心并驾齐驱时,全场响起了热烈的掌声。在会议组织的专题研讨会上中外专家就医药卫生工作普及推广生存 质量测定和研制特异性模块的必要性与方法学展开了深人讨论。香港医院管理局负责人专程约请世界卫生 组织官员奥利博士、中国卫生部官员史安俐、中山医科大学方积乾教授及来自美国、加拿大和澳大利亚的学者 座谈,并征询如何在香港医院管理改革中应用生存质量的测定与评价,从而进一步推进“以病人为中心 的医 院管理工作。 (冯世客) 维普资讯 http://www.cqvip.com
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