nullABO血型鉴定 不规则抗体筛选ABO血型鉴定 不规则抗体筛选玻片法(正定型)
试管法(正定型,反定型) 盐水法
聚凝胺法
抗人球法 ABO血型鉴定实验原理ABO血型鉴定实验原理
抗原抗体反应——在ABO血型系统中,红细胞膜上抗原分A和B两种抗原,而血清抗体分抗A和抗B两种抗体。A抗原加抗A抗体或B抗原加抗B抗体,则产生凝集现象→从而测知受试者红细胞膜上有无A或/和B抗原→判断血型
抗体在相邻的红细胞
表
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面抗原决定簇之间搭桥形成肉眼可见的颗粒状凝集团块.见图
IgM抗体凝集红细胞示意图IgM抗体凝集红细胞示意图IgM抗体凝集红细胞示意图IgM抗体凝集红细胞示意图
IgGM在盐水介质中产生凝集
试剂 试剂 抗A、抗B试剂血清
5%的A型、B型及O型试剂红细胞悬液
受检者血清
5%的受检者红细胞悬液 (从指尖或耳垂取血一滴,加入含1ml生理盐水的小试管内,混匀,即得约5%红细胞悬液。采血时应注意先用75%酒精消毒指尖或耳垂。)(取少量受检者红细胞(约0.2~0.5 ml)用生理盐水洗涤3次,然后加入适量生理盐水调配成5%浓度。)
四 实验步骤.swf四 实验步骤.swf
1. 玻片法
(1) 取双凹玻片一块,用干净纱布轻拭使之洁净,在玻片两端用记号笔标明A及B,并分别各滴入A及B
标准
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血清一滴。
(2) 用滴管吸取红细胞悬液,分别各滴一滴于玻片两端的血清上,注意勿使滴管与血清相接触。
(3) 竹签两头分别混合,搅匀。用两根 分别用来混合A型和B型标准
血清和红细胞悬液
(4)观察结果。如有凝集反应可见到呈红色点状或小片状凝集块浮起。先用肉眼看有无凝集现象,肉眼不易分辨时,则在低倍显微镜下观察,如有凝集反应,可见红细胞聚集成团。
(5) 判断血型 根据被试者红细胞是否被A,B型标准血清所凝集,判断其血型。 2.试管法(正定型)2.试管法(正定型) A B
A标准血清 2滴
B标准血清 2滴
受试者的红细胞悬液 1滴 1滴
混匀后1000rpm离心1min或3000rpm离心15秒。 。
取出观察结果。完全凝集的管底部有红细胞的凝块,管底细胞边缘呈花边状,轻弹试管凝块不散;完全不凝的试管,血细胞均匀的沉到管底,边缘整齐,用手轻弹试管,红细胞像一缕烟似的立即上升,随即成为均匀的悬液;轻微凝集的,必须将液体转到载玻片上镜检后判定凝集程度。
试管法(反定型)
试管法(反定型)
Ac Bc Oc
受检者血清 2滴 2滴 2滴
5%的A型红细胞悬液 1滴
5%的B型红细胞悬液 1滴
5%的O型红细胞悬液 1滴
立即以1000rpm离心1分钟或3000rpm离心15秒。
轻轻扣动试管底部,观察结果----同前血型判定swf血型判定swf五 注意事项五 注意事项玻片、试管都要标记!!!, A及B标准血清绝对不能相混,不要依靠用染料颜色标记血清。工作中要形成自己的习惯!
所用玻片、试管实验前必须清洗干净,以免出现假凝集现象。
红细胞悬液滴管头不能接触标准血清液面,竹签一端去混匀一侧就不能去接触另一侧。
一般先加血清,然后再加红细胞悬液,便于核实是否漏加血清。
离心时间、速度严格要求,以防假阳 性或假阴性结果。
试验用血清和试剂红细胞都应标准化。
要在光亮的背景下观察凝集,可使用光镜检查小的凝集,同时应注意观察凝集强度,有助于A、B亚型的发现,观察后立即记录观察结果。
ABO正反定型结果不一致的常见原因有哪些?ABO正反定型结果不一致的常见原因有哪些?(1)人为因素:①试剂不标准、失效或污染;③操作中加错样本或试剂、离心速度不足或过度、细胞与血清比例不当、结果判断错误等。
(2)客观因素:①因某些疾病导致抗原减弱如:白血病,MDS(骨髓增生异常综合征)患者血型抗原减弱导致误定血型。②受检者抗体效价低(如婴幼儿、老年人、大量输液的患者,血浆蛋白低下等)③某些药物干扰如输注右旋糖酐后会干扰血型检定。为什么这次试验没有安排玻片法的反定型?为什么这次试验没有安排玻片法的反定型? 因为存在于病人或献血者血清中的抗A及抗B,个体差异很大,如果效价较弱,在玻片上不足以凝集大量抗原阳性的红细胞,造成假阴牲的结果所以采用玻片法作反定型的结果常不可靠。而用试管离心法作反定型,则促进抗原抗体反应,形成肉眼可见的凝块,使结果更为可靠 二 实验原理二 实验原理
血型就是红细胞膜上特异抗原的类型。在ABO血型系统中,红细胞膜上抗原分A和B两种抗原,而血清抗体分抗A和抗B两种抗体。血型鉴定是将受试者的红细胞加入标准A型血清(含有抗B抗体)与标准B型血清(含有抗A抗体)中,观察有无凝集现象,从而测知受试者红细胞膜上有无A或/和B抗原。在ABO血型系统,根据红细胞膜上是否含A、B抗原而分为A、B、AB、O四型。 见下表谢谢