拟南芥总蛋白提取_图文

拟南芥总蛋白提取_图文 河北经贸大学毕业论文 拟南芥蛋白不同提取方法的SDS— PAGE凝胶电泳分析 专业名称： 生 物 技 术 班 级： 2003 02 学生姓名： 陈 丽 丽 指导教师： 陈 颖 完成时间： 2007年6月 植物蛋白提取方法有很多种，不论使用哪一种方法，均必须在操作中保存生物大分子结构的完整性，保存活性防止变性及降解现象的发生。因蛋白空间结构主要依靠氢键、盐键和范德华力的存在，遇酸、遇碱、高温、剧烈的机械作用及强烈的辐射等均可导致活性丧失，因此选择的条件应为十分温和。SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳技术作为分离鉴定生物大分子的一种实验技术手段，已经成为分子生物学实验室中的重要技术之一。 本试验采用三种不同的方法（两种蛋白溶解法，一种蛋白沉淀法）分别提取拟南芥不同组织（拟南芥整个植株，拟南芥叶片，拟南芥愈伤组织）的蛋白，然后用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳技术进行电泳分析，通过分析凝胶电泳图谱比较分析不同提取液提取蛋白的效果优劣从而确定较好的蛋白提取法，以及拟南芥植株不同组织含有的不同蛋白。 实验结果表明提取液2提取蛋白的效果最好，电泳条带最清楚，提取液3即三氯乙酸丙酮次之，提取液1即PBS溶液最次；并且拟南芥总蛋白跑的电泳谱带最多且最清晰，叶片蛋白谱带最少且较模糊，说明植物各组织的蛋白含量与种类存在差异，这与其功能性质具有相关性，叶片电泳谱带少说明叶片蛋白只含有总蛋白的一部分，由于根部蛋白受培养基中的琼脂的影响而出现一条粗带。另外，本实验采取了快速脱色和脱色液脱色两种不同的脱色法，结果表明快速脱色法不仅简单方便效果更好适于推广致用。 关键词 SDS-PAGE电泳；拟南芥蛋白；蛋白质分析 Abstract There are many methods of the withdrawtion of the plant proteins, no matter any method, it must preserve the biology macromolecular structure to be integrity in the operation, preserve activity to prevent the degradation and degeneration phenomenon. Space for protein structure mainly rely on hydrogen bonding, salt bonding and the Vander Waals bonding, the existence of the event acid, alkali treatment, high temperature, Mechanical dramatic role and strong radiation can lead to the loss of activity, it should choose the conditions for the very modest. SDS-PAGE as the isolation and identification of biological macromolecules in one of laboratory means, it has become one of the important laboratory technique in Molecular biology. This experiment uses three different methods (two methods are proteins todissolve solution, one method is protein precipitation) withdraws the tissues, protein of Arabidopsis thaliana ( all the protein of Arabidopsis thaliana, the leaf protein of Arabidopsis thaliana, the injuries tissue protein of Arabidopsis thaliana),and then the protein atlas in different tissues and organs of Arabidopsis thaliana were analyzed with SDS polyacrylamidegel, and then, through the analysis of the SDS-PAGE picture we can analysis the different extract buffer and the different protein of the different organizations. Finally, the results indicate that the best method is extract buffer 2 —the SDS-PAGE picture is the clearest, the extract buffer 3 that is the trichloroacetic acid acetone next, the last is the extract buffer 1 which is PBS. The kinds of protein in the whole Arabidopsis thaliana were most and clearest in these three tissues, the kinds of protein in the leaf were least, this phenomenon can be explained by that the protein's content and the protein's type are different, this indicates that the number of the strip belt band has the relevance with the function nature, the phenomenon that the number of the leaf protein is the least indicate that the content and type of the leaf protein are only a part of the whole protein of Arabidopsis thaliana; as a result of that the culture medium has influence with the root protein, the picture of the whole protein has a thick belt. In addition, this experiment takes two different bleaching methods, one is rapid bleaching, the other is bleaching liquid, the result shows that the rapid bleaching method not only simple and convenient, but also have a better effect, so we can use it extensively. Keywords SDS-PAGE electrophoresis; Arabidopsis thaliana protein; The protein analysis 拟南芥蛋白不同提取方法的SDS—PAGE凝胶电泳分析 1.1 拟南芥简介 拟南芥（Arabidopsis thaliana）十字花科。二年生草本，高7～40厘米。基生叶有柄呈莲座状，叶片倒卵形或匙形；茎生叶无柄，披针形或线形。总状花序顶生，花瓣4片，白色，匙形。长角果线形，长1～1.5厘米。花期3～5月。我国内蒙、新疆、陕西、甘肃、西藏、山东、江苏、安徽、湖北、四川、云南等省区均有发现[1]。 图1-1 拟南芥花 图1-2 拟南芥植株 这种植物具有以下特点： （1）形态个体小，高度只有30 cm左右； （2）生长周期快，从播种到收获种子一般只需6周左右； （3）种子多，每株每代可产生数千粒种子； （4）形态特征简单； （5）基因组小，只有5对染色体。 拟南芥广泛用于植物遗传学、发育生物学和分子生物学的研究，已成为一种典型的模式植物，被科学家誉为“植物中的果蝇”。虽然这种植物在许多方面“简单”，但它的大多数基因与其他“复杂”的植物基因具有很高的同源性，另外，由于这种植物的全部基因组测序已经完成，因此可以预测，拟南芥在植物学所有领域的研究中将发挥更大的作用[2]。 1.2 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 1937年瑞典化学家Tiseliue首先开发了蛋白质电泳技术，并成功地将血清蛋白分成几个组分。原理：迁移率是带电颗粒在一定电场强度下，单位时间内介质中的迁移距离，可 公式 小学单位换算公式大全免费下载公式下载行测公式大全下载excel公式下载逻辑回归公式下载 计算：U=V/E=Dl/Ut U：迁移率，单位是cm/V．s或cm/V．min V：泳动速度，单位是cm/s 或cm/min E：电场强度，单位是V/cm D： 泳动距离，单位是cm T：电泳时间，单位是min或s L：支持物长度，单位是cm SDS是十二烷基硫酸钠（sodium dodecyl sulfate）的简称，是一种阴离子表面活性剂，加入到电泳系统中能使蛋白质的氢键、疏水键打开，并结合到蛋白质分子上（在一定条件下，大多数蛋白质与SDS的结合比为1.4 g SDS/1 g蛋白质），使各种蛋白质-SDS复合物都带上相同密度的负电荷，其数量远远超过了蛋白质分子原有的电荷量，从而掩盖了不同种类蛋白质原有的电荷差别。这样就使电泳迁移率只取决于分子大小这一因素，于是根据 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 蛋白质分子量的对数和迁移率所作的标准曲线，可求得未知物的分子量[3]。 聚丙烯酰胺变性凝胶电泳是对扩增产物进行检测，与其他电泳法比较具有如下优点：① 电泳区带狭窄不易扩散，供试品用量极微，电泳分离时间短，设备简单，分辨率高，重复性佳，已广泛用于酶、蛋白、聚核苷酸、多肽的分析鉴定和少量制备。② 凝胶是以单体-烯酰胺和交联剂，甲叉丙烯酰胺聚合而成的纵链交错的且有“分子筛效应的三维网状结构”。其机械性 能优良，对热稳定，无色透明，无杂质，不溶于缓冲液，在280 nm波长处无紫外吸收。电泳时无电渗和吸附作用，适于供试品的定量和精制。 本实验利用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分别比较不同提取方法提取拟南芥总蛋白、叶蛋白、愈伤组织蛋白的差异以及每个提取方法的优劣。 1.3 拟南芥蛋白提取 蛋白质的种类有很多，提取方法也有很多种，常用的有等电点沉淀法、盐析法、有机沉淀法，不同的方法对与提取不同的蛋白具有较好的效果。即使是同一种物质的不同组织也含不同的蛋白质，在本实验中，将采用三种方法（两种蛋白溶解法，一种沉淀蛋白法）提取拟南芥不同组织的蛋白质，然后进行SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分析，比较不同的提取方法的提取效果、不同组织的蛋白提取情况[4]。 不论使用哪一种方法，均必须在操作中保存生物大分子结构的完整性，保存活性防止变性及降解现象的发生。因空间结构主要依靠氢键、盐键和范德华力的存在，遇酸、遇碱、高温、剧烈的机械作用及强烈的辐射等均可导致活性丧失，因此选择的条件应为十分温和。同时应注意防止系统中重金属离子、细胞自身酶系及其他有毒物质的污染 [5] 。 1.4 实验研究的意义 拟南芥已广泛用于植物遗传学、发育生物学和分子生物学的研究，已成为一种典型的模式植物，被科学家誉为“植物中的果蝇”。虽然这种植物在许多方面“简单”，但它的大多数基因与其他“复杂”的植物基因具有很高的同源性，该种植物的全部基因组测序已经完成。 SDS聚丙烯是种很重要的分离生物大分子的实验技术，但是在实验过程也有很多应该注意的事项。蛋白质的提取有多种方法，本实验中将选用三种不同的方法进行提取，然后将提取的蛋白样品进行SDS-PAGE分析，从而确定提取蛋白的最佳方法。 本实验通过用多种对拟南芥不同组织进行提取，提取的蛋白样品将进行SDS凝胶电泳分析，分析不同蛋白提取法的优劣以及同一植物不同组织的蛋白电泳差异，加强对SDS-PAGE的原理和操作步骤的理解和掌握。 1.5 展望 提取蛋白跑完电泳后可以做Western杂交，然后进行蛋白序列分析。 Western杂交是将蛋白质电泳、印迹、免疫测定融为一体的特异性蛋白质的检测方法。先从生物细胞中提取总蛋白或目的蛋白，SDS-PAGE电泳将蛋白质按分子量大小分离，再把分离的各蛋白质条带原位转移到固相膜（硝酸纤维素膜或尼龙膜）上，接着将膜浸泡在高浓度的蛋白质溶液中温育，以封闭其非特异性位点。然后加入特异抗性体（一抗），膜上的目的蛋白（抗原）与一抗结合后，再加入能与一抗专一性结合的带标记的二抗，最后通过二抗上带标记化合物（一般为碱性磷酸酶）的特异性反应进行检测。根据检测结果，从而可得知被检生物（植物）细胞内目的蛋白的表达与否、表达量及分子量等情况。Western杂交方法灵敏度高，通常可从植物总蛋白中检测出50 ng的特异性的目的蛋白[6]。 然后也可对已获得的目的蛋白进行蛋白序列的分析。通常使用专一化学试剂或具有不同水解专一性蛋白酶，得到有可能重叠的序列的肽段，从而推断出蛋白的氨基酸序列。蛋白质的一级结构是其高级结构的基础，因此，蛋白质序列分析对于获得有关高级结构的信息是一个很有用的基础[7]。 2 材料、主要试剂及主要仪器 2.1 实验材料 2.1.1 拟南芥培养[8] ⑴ 培养前预处理：拟南芥（Arabidopsis thaliana，哥伦比亚野生型）种子用70%乙醇浸泡2 min后，无菌水漂洗1次，再用3.5％次氯酸钠浸泡10～15 min，无菌水漂洗5次，播种于MS培养基上，放入4℃冰箱中春化3天； ⑵ 春化后的拟南芥种子放入生长箱中培养，生长7天左右（培养箱温度周期为22℃（昼）/18℃（夜），光周期为12 h（光）/12 h（暗），光强为120～130 μmol。 2.1.2 培养拟南芥愈伤组织[9] ⑴ 挑选大而饱满的具有发芽能力的成熟种子，采取两步消毒法。剥胚前用 CoCl2·6H2O 5 铁盐(母液Ⅲ) mg/L FeSO4·7H2O 5 560 Na2-EDTA·2H2O 7 460 有机成分(母液Ⅳ) mg/L 肌醇 20 000 烟酸 100 盐酸吡哆醇(维生素B6) 100 盐酸硫胺素(维生素B1) 100 甘氨酸 400 其中诱导培养基附加植物激素IAA0.5－2 mg，分化培养基附加6BA 0.5-1 mg，IAA0.5 mg，蔗糖20 g，琼脂1.2%，pH5.8。 2.2.1.2 蛋白提取液1——PBS溶液 称取NaCl 0.8006 g，KCl 0.02012 g，KH2PO4 0 .02722 g，Na2HPO4 0.3682 g加蒸馏水溶解，定容至100 ml。 2.2.1.3 蛋白提取液2——提取Buffer 称取Tris 0.1214 g放入洗净的小烧杯中，然后加少量蒸馏水定容，加盐酸用酸度计调pH为8.0，再称取SDS 0.025 g，DTT 0.07715 g，EGTA 0.09509 g，EDTA 0.09306 g加入上述溶液，最后用100 ml的定量瓶定容，放入冰箱待用。 该提取Buffer最后各成分浓度为： 5 m mol/L EDTA 5 m mol/L EGTA 10 m mol/L DTT 0.05 m mol/L SDS 20 m mol/L Tris-HCl pH 8.0 2.2.1.4 蛋白质提取液3——三氯醋酸—丙酮 提取液：含10%TCA和0.07%的β-巯基乙醇的丙酮。 裂解液：2.7 g尿素0.2 g CHAPS溶于3 ml灭菌的去离子水中（终体积为5 ml），使用前再加入1M的DTT 65 μl/ml。 2.2.1.5 Loading buffer（10 ml 1×） 1 mol/LTris-HCl(pH6.8) 0.625 ml β－巯基乙醇 0.25 ml 10% SDS 1 ml 溴酚蓝 0.1125 ml 50％甘油 0.5 ml 蒸馏水 2.5 ml 2.2.2 所用主要药品和试剂 拟南芥种子—哥伦比亚野生型（河北师范大学） 盐酸吡哆醇(维生素B6) 盐酸硫胺素(维生素B1) 氯化钠（天津北宏试剂厂） 琼脂粉（北京奥博星生物技术责任有限公司） 磷酸二氢钠（天津科盟化工工贸有限公司） 磷酸氢二钾（天津科盟化工工贸有限公司） SDS（北京赛弛生物科技有限公司） EGTA（天津东丽区华明镇北于堡工业区） EDTA（河北博海生物工程有限公司） DTT —二硫苏糖醇 β-巯基乙醇 9.5 M尿素 5 m M碳酸钾 丙三醇二甘油（天津永大化学试剂开发中心） 甲叉双丙烯酰胺（北京海淀区土地四街） Tris（华美生物工程有限公司） 甘氨酸（河北博海生物工程有限公司） 丙烯酰胺（天津科密欧） 考马斯亮蓝R-250（天津永大） 四甲基乙二胺（即TEMED） Marker溶液 2.3 主要仪器 电子分析天平BS1245（北京赛多利斯仪器系统有限公司） 超净工作台（哈尔滨） 高压灭菌锅 DYY-Ⅲ4电泳仪(北京六一仪器厂) DYY-Ⅲ28A型垂直夹心式电泳槽(北京六一仪器厂) 制冰机（SANYO） 离心机Beckman Incubator (Avanti j-25) 微电脑电磁炉（佛山） 脱色摇床（上海智城） 3 实验方法 3.1 样品蛋白的制备——蛋白质的提取[11-16] 3.1.1 用提取液1、2和水提取蛋白 ⑴ 选取生长较好的拟南芥，分别称取叶片、拟南芥植株、愈伤组织各1 g，分别放入预冷好的三个研钵中。 ⑵ 分别向三个研钵中加入液氮研磨样品，直至呈粉末状为止。 ⑶ 向已编号的离心管（1.5 ml Eppendorf管，以下简称EP管，编号分别为LFbuffer1、LFbuffer2、LF水、AT buffer1、AT buffer2、AT水、YSh buffer1、 YSh buffer2、 YSH水，其中，LF：叶蛋白，AT：总蛋白，YSh：愈伤组织蛋白。）中预先加入100 μl提取液1、2、3和水。 ⑷ 将加好的样品摇匀，迅速放入冰中备用。 ⑸ 将六只离心管放入提前设好温度的冷冻超速离心机中以12 000 rpm/min 4℃离心10 min。 ⑹ LFbuffer1、LFbuffer2、BF水、AT buffer1、AT buffer2、AT水、YSh buffer1、 YSh buffer2、YSh水这些EP管分别取上清液，分别加入已编号的九个新的EP管中。 ⑺ 再次将九只离心管放入冷冻超速离心机中12 000 rpm/min 4℃离心10min。 ⑻ 按照步骤⑹再次取上清或去上清将所需要的物质加入新的已编号的离心管。 ⑼ 分别加入与样品等量的Loading Buffer，放入沸水中煮10 min，然后迅速放入冰上冷却，然后12 000 rpm/min离心5 min，备用。 3.1.2 提取液3提取蛋白 ⑴ 分别称取拟南芥植株，叶片，愈伤组织各1 g，剪碎后加入10 mgPVP-40(聚乙烯吡咯烷酮)及少量石英砂，用液氮研磨成粉。 ⑵ 加入1.5 ml 10% 三氯乙酸（丙酮配制，含10 mmol即0.07% β-巯基乙醇），混匀，-20℃沉淀1小时，然后4℃，15 000 rpm/min离心15 min。 ⑶ 弃上清，沉淀复溶于1.5 ml冷丙酮(含10mmol β-巯基乙醇)，再于-20℃沉淀1小时，同上离心弃上清。然后干燥沉淀，保存备用。 3.1.3 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳[3 17-19] 3.1.3.1 SDS-聚丙烯酰胺凝胶制备 ⑴ 配置分离胶溶液 分离胶8%（10 ml）： A液2.7 ml，B液2.5 ml，蒸馏水4.8 ml，10%过硫酸胺50 μl， TEMED 5 μl。 ⑵ 配置浓缩胶溶液 浓缩胶3％（4 ml）： A液 0.67 ml，C液 1.0 ml, 蒸馏水2.3 ml, 10%过硫酸铵30 μl, TEMED 5 μl。 ⑶ 电泳缓冲液（Tris-甘氨酸缓冲液pH 8.0）： 称取Tris 4.0 g， 甘氨酸14.4 g，SDS 1.0 g，用无离子水溶解后定容至1 L。 3.1.3.2 样品的处理及加样 提取液1、2和水提取的蛋白样品可充分混合后可直接上样。提取液3提取的蛋白样品需充分混合后加loading buffer后，最好离心5 min后才上样。用微量进样器取30 μl上述混合液，通过缓冲液，小心地将样品加到凝 YS1 AT2 YS YS2 LF3 LF2 LF MK 97 400D 66 200D 43 000D 20 100D 14 400D 图4-2 各种拟南芥组织蛋白凝胶电泳图 MK：maker LF：水提取的叶蛋白 LF2：提取液2提取的叶蛋白 LF3：提取液3提取的叶蛋白 YS2：提取液2提取的愈伤组织蛋白 YS：水提取的愈伤组织蛋白 AT2：提取液2提取的总蛋白 YS1：提取液1提取的总蛋白 在本研究中，由于制样时组织量相同，电泳时上样量一致，因此可以通过比较电泳条带的深浅来分析不同提取液提取蛋白的效果。由图4-1可以看出，AT3，YS3，AT1图谱较清晰，蛋白条带清晰，颜色深，而LF1，YS，AT条带较相对应的前三者都不清晰；图4-2可以看出，AT2，YS2，YS1图谱较清晰，而YS和叶蛋白的所有图谱不清晰。水作为阴性对照，水作为蛋白提取液时，电泳条带几乎没有。 这一结果表明，不论是拟南芥愈伤组织还是拟南芥总蛋白，蛋白提取液2比蛋白提取液1提取蛋白效果好。主要原因是因为蛋白提取2中含有SDS、EGTA、EDTA等物质，对组织蛋白的释放有帮助。而PBS是植物细胞常用的缓冲液，成分中没有助于蛋白释放的化学物质，PBS提取的蛋白主要是来自于液氮研磨时对植物细胞的破坏从而致使蛋白在缓冲液中释放。蒸馏水没有蛋白条带，这说明实验体系没有问题，也就是说蛋白提取液对植物组织蛋白具有提取作用。 4.2 丙酮法提取蛋白与其它提取法的比较 同时我们又采取了丙酮法提取拟南芥愈伤组织和拟南芥总蛋白，同时 用蛋白提取液2提取等量相同的组织，上样量均为30 μl，将两种蛋白的SDS-PAGE结果作比较。实验结果表明，用两种方法分别提取等量相同的植物组织，丙酮法提取的蛋白条带比蛋白提取液2提取的蛋白条带清晰，条带颜色深，带较多说明蛋白浓度比后者高，也就是说提取效果好于后者（见图4-1）。 从上述电泳图可以看出，提取液2提取的蛋白跑电泳的谱带最多也最清晰，可以得出结论：三种提取液中提取液2提取蛋白的效果最好，其次是提取液3，最后是提取液1。 表4-1 各种蛋白提取液提取后凝胶电泳图效果比较 提取液1 提取液2 提取液3 水 植 株 效果不好，蛋白损失多，有杂质，谱带 教多但不太清楚。 效果好，蛋白损失少，杂质少，谱带最多且清晰明显。 效果较好，蛋白损失较少，杂质较少，谱带效果不好，只提出部分蛋白，谱带少也比较多且较清楚明显。 不清晰。 伤 效果不好，蛋白损失多，有杂质，谱带 少且不太清楚。 效果好，蛋白损失少，杂志少，谱带较 多且清晰明显。 效果一般，蛋白损失较多且清晰明显。 效果不好，只提出 较少，杂质较少，谱带 部分蛋白，谱带少 也不清晰。 效果不好，只提出 效果一般，蛋白损失 叶 部分蛋白，只有一条 谱带。 较少，杂质较少，谱带少且较清晰明显。 效果一般，蛋白损失较多，杂质较少，谱带少。 没有提出蛋白。 由表4-1可以看出，提取液2的提取效果最好，蛋白损失的最少，杂质也最少，电泳谱带最清晰；提取液3较提取液2差一些，效果一般；而提取液1的提取效果最差电泳谱带最不清晰，提取出来的蛋白浓度最低；水作为阴性对照，只提取出了部分蛋白或提不出蛋白。以下讨论5.1，5.3中将分析各提取液提取效果优劣的原因。 4.3 拟南芥蛋白分子量分析 通过图4-1和图4-2，比较Marker与拟南芥蛋白可以看出，大部分的拟南芥根部和叶片的蛋白分子量集中在15 000D到66 200D之间，97 400D以上蛋白质条带相对较少。这与植物蛋白的分子量大小范围一致。 5 讨论 5.1 金属离子螯合剂在蛋白提取中起重要作用 本研究结果表明，三种提取液中提取液2提取蛋白的效果最好。其原因可以从各提取液的各组分来分析，因为在提取液2中，加入了EDTA、EGTA、PMSF，其中，EDTA是一种金属离子螯合剂，PMSF是一种抗蛋白酶解液，它们都可以直接或间接地起到防止蛋白被分解的效果。 很令人意外的是提取液3，丙酮沉淀法是一种非常经典的蛋白提取法，可是在本试验中该法提取的蛋白条带相对来讲不如预期效果好，可能的原因如下：①试剂放置时间太长；②药品在配置和操作过程中出了差错；③操作不 规范 编程规范下载gsp规范下载钢格栅规范下载警徽规范下载建设厅规范下载 ，提取操作过程中没有始终在低温下进行，使得蛋白变性。丙酮沉淀法主要针对双向电泳，杂质少，离子浓度小的特点，当然单向电泳也同样适用，只是电泳的条带会减少。水作为对照，提取效果不管是从理论上还是从实际的操作上明显劣于上述三种提取液。 5.2 关于谱带倾斜现象 从凝胶电泳图中可以看到，Marker,总蛋白和愈伤组织蛋白谱带都出现了倾斜，这可能是由于凝胶的浓度不均匀所造成的，所以制胶时一定要保证胶的浓度均匀。 5.3 关于拟南芥各组织蛋白 电泳图中显示不管是何种提取液，拟南芥总蛋白的谱带最清晰也最多， 并且还有一条较粗的带，愈伤组织次之，叶片蛋白的谱带最少，也不清楚，几乎不明显。 这种结果的原因有以下几种：首先是蛋白含量方面。在称取各样品材料时，拟南芥植株、愈伤组织、叶片都是称取了1 g，加的提取液都是100 μl，离心时间相同，加的loading buffer也都是1×溶液，所以该现象只能从各组织的蛋白含量来解释。 拟南芥整个植株含有所有的蛋白，愈伤组织也是，但由于愈伤本身还只是组织，相对于有根茎叶分化的整个植株而言，它的蛋白含量相应要少，而叶片却含有部分蛋白，相对来说不含有根蛋白和茎蛋白，所以谱带相对少一些。这说明，谱带的多寡与各组织的蛋白含量成线性关系，间接来讲也与其功能性质具有相关性。 其次，拟南芥总蛋白的电泳谱带之所以会出现一条较粗的谱带是因为根蛋白的原因，由于培养基中琼脂对根部蛋白的影响会使得电泳图出现一条粗带，叶片蛋白不接触培养基，所以不会出现粗带。相应的，如果只提取植株的根部蛋白，在凝胶电泳图中也会出现一条粗带。这说明琼脂对蛋白电泳有影响。 此外，由于叶片中叶绿素等各色素分子的影响也会使叶片的电泳图谱带少且不清晰。 由图4-1，图4-2可以看出，AT带中间明显有一段颜色较深的部分，而LF带则没有，分析其中的原因可能由于根部一直接触培养基，叶片部分不接触培养基，而培养基中含有较多的琼脂，因此分析电泳胶板中颜色较深的带可能为琼脂。 5.4 染色、脱色 本实验凝胶片都是用考马斯亮蓝染色，但是将传统染色液的乙醇改用甲醇。 图4-1用脱色液脱色，此脱色液的成分也不同于传统脱色液，此脱色液中将传统脱色液中的乙醇改用为甲醇，脱色效果比传统脱色液要好，背景较浅。 图4-2用快速脱色法，即将胶片放入沸水中煮十至十五分钟，胶片底色为白色即可捞出。 [1] 陈玉琨，研究性学习多样化模式，丛书少年儿童出版社，2002：11~33 [2] 曹仪植，模式生物丛书--拟南芥，高等教育出版社，2002：149~168 [3] 魏群，崔丽华，杨淑杰等，分子生物学实验指导，高等教育出版社， 施普林格出版社，2005：93~98 [4] 黄熙泰，于自然，李翠凤等，现代生物化学，化学工业出版社，2005： 55~66 [5] 汪家政，范明编，蛋白质技术手册，北京：科学出版社，2002：213~244 [6] 朱玉贤，李毅，分子生物学，高等教育出版社，2005：55~166 [7] 张维铭，现代分子生物学实验手册，北京：科学出版社，2003：91~98 [8] Detlef Weigel，Jane Glazebrook，拟南芥实验手册，人民军医出版社， 2004：159~166 [9] 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Space for protein structure mainly rely on hydrogen bonding, salt bonding and the Vander Waals bonding, the existence of the event acid, alkali treatment, high temperature, Mechanical dramatic role and strong radiation can lead to the loss of activity, it should choose the conditions for the very modest. SDS-PAGE as the isolation and identification of biological macromolecules in one of laboratory means, it has become one of the important laboratory technique in Molecular biology. This experiment uses three different methods (two methods are proteins todissolve solution, one method is protein precipitation) withdraws the tissues, protein of Arabidopsis thaliana ( all the protein of Arabidopsis thaliana, the leaf protein of Arabidopsis thaliana, the injuries tissue protein of Arabidopsis thaliana),and then the protein atlas in different tissues and organs of Arabidopsis thaliana were analyzed with SDS polyacrylamidegel, and then, through the analysis of the SDS-PAGE picture we can analysis the different extract buffer and the different protein of the different organizations. Finally, the results indicate that the best method is extract buffer 2 —the SDS-PAGE picture is the clearest, the extract buffer 3 that is the trichloroacetic acid acetone next, the last is the extract buffer 1 which is PBS. The kinds of protein in the whole Arabidopsis thaliana were most and clearest in these three tissues, the kinds of protein in the leaf were least, this phenomenon can be explained by that the protein's content and the protein's type are different, this indicates that the number of the strip belt band has the relevance with the function nature, the phenomenon that the number of the leaf protein is the least indicate that the content and type of the leaf protein are only a part of the whole protein of Arabidopsis thaliana; as a result of that the culture medium has influence with the root protein, the picture of the whole protein has a thick belt. In addition, this experiment takes two different bleaching methods, one is rapid bleaching, the other is bleaching liquid, the result shows that the rapid bleaching method not only simple and convenient, but also have a better effect, so we can use it extensively. Keywords SDS-PAGE electrophoresis; Arabidopsis thaliana protein; The protein analysis